细菌工程菌胞内表达主要分为两种形式，一种是在强启动子条件下的高效表达，由于蛋白的过度表达，使蛋白不能及时有效折叠而发生无规则卷曲，以固体颗粒的形式堆积于胞间质中，这就是所说的包涵体，另外一种是间质内的可溶性表达，即可以发生正常折叠，具有生物活性。一般情况下，细菌只要被正常破壁就可以通过离心的形式将包涵体分离开：离心沉淀主要为无活性的包涵体，如果是胞内可溶性表达，则破壁离心后目的蛋白集中于破碎上清中。所以包涵体破碎只要细菌胞壁破碎离心即可达到获得包涵体的目的。但破碎功率和时间不宜过大过长，否则可能造成细胞核中的核酸物质对蛋白污染（可通过OD280 &260之比得知是否有核酸污染），功率过大有可能造成破碎液局部过热促使包涵体少量溶解。可通过镜检和od值测定 选择合适破碎条件。 我今天下午已经作了！超声以后离心沉淀中有黑的东西！是不是已经欲望号列车
碳化的还是ep管子不干净的！明天才知道结果的！呵呵！
电除尘器标准
i聚合支付黑的应该是炭化了，调整破碎条件。
包涵体与细菌的超声波破碎可以用相同的超声功率，在超声的次数上可视情况增减。
snake模型
关于包涵体的纯化是一个多步骤很费力的事，关于包涵体的处理一般包括这么几步：菌体的破碎、包涵体的洗涤、溶解、复性以及纯化，内容比较庞杂 。我们一般采用以下步骤，供参考（原创）：
（1）细菌的破碎：将诱导表达后的细菌离心（4000g 15min），重悬后将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，重复3次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 离心25 000g 15min；再用分离缓冲液（2 mol/L Urea，20 mmol/L Tris﹒HCl，0.5 mol/L NaCl，5 mmol/L imidazole，1 mmol/L 2-mercaptoethanol）30ml重新溶解沉淀，合并为一管，超声 8次/20s，离心25 000g 15min；沉淀用blind buffer PH 8.0 30ml重悬，室温下搅拌5小时；4℃ 25 000g 离心30min，去沉淀，上清转移至另一离心管中。上清液用0.45μm一次性过滤器过滤，去除残留颗粒。
（2） Ni2+亲和柱的准备：用50ml的双蒸水洗柱一次，用0.1 mol/L NiSO4 2.5 ml过柱，再用30ml的双蒸水洗柱一次，用30ml结合缓冲液平衡柱子。
（3） 上样及重组蛋白的复性：样本用注射器过柱，分别用30 ml含60 mol/L尿素梯度的折叠缓冲液（20 mmol/L Tris﹒HCl，0.5 mol/L NaCl，20 mmol/L imidazole，1 mmol/L 2-mercaptoethanol）
（4） 重组蛋白的洗脱：用20ml洗脱缓冲液（20 mmol/L Tris﹒HCl，0.5 mol/L NaCl，500 mmol/L imidazole，1 mmol/L 2-mercaptoethanol）进行洗脱，用1ml管进行收集，每管取5μl用15% SDS-PAGE检测洗脱情况。
（5） 重组融合蛋白的脱盐：在AKTA Prime 高效液
相谱仪用HiTrap Desalting column进行脱盐，具体操作参照仪器说明书。脱盐后的重组融合蛋白被转移至新的缓冲液1×PBS中，在核酸蛋白测定仪上测定其浓度。桂枝二陈汤
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（6） elution 后柱子的处理：用100DDW过柱，接着15-20ml的recharge buffer、50mlDDW、5-10ml 0.1M NiSO4、50DDW、20%的乙醇过柱处理
用以上方法我们处理了18kD-66KD不等的包涵体重组蛋白，均很成功。
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