抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体在狂犬病街毒检测中的应用

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羊、猫、牛等家养动物和大鼠、狐狸、梅花鹿、貂等野生动物以及人；基因２型为Ｌａｇｏｓ蝙蝠株；基因３型Ｍｏｋｏｌａ共２株分离于尼日利亚和喀麦隆的地鼠；基因４型Ｄｕｖｅｎｈａｇｅ分离于中非的蝙蝠；基因５型共３株分离于丹麦、法国的蝙蝠；基因６型共３株分离于荷兰、瑞士的蝙蝠及芬兰被蝙蝠咬伤的人；基因７型ＡＢＬ分离于澳大利亚被蝙蝠咬伤的人。

狂犬病阴性动物脑样品：２００３年８—１２月期间法国巴斯德研究所ＷＨＯ狂犬病参考中心收集的来自１２种动物的脑组织样品共计２７１份，其中狗１３６份、猫１０４份、松鼠２份、大鼠２份、白鼬６份、鹿１份、狐狸１１份、蝙蝠３份、貂１份、地鼠１份、牛３份以及刺猬１份。经巴斯德研究所用相应的ＥＬＩＳＡ、免疫荧光及细胞培养等三个试验证实均为狂犬病毒阴性。

２．方法：ＣＶＳ病毒颅内注射Ｓｗｉｓｓ乳鼠，待发病后处死取脑组织标本；５日龄正常乳鼠处死取脑标本，在载玻片上印片，丙酮室温固定３０ｍｉｎ后，一３０℃保存备用。取待检动物脑海马回部分，在载玻片上印片，丙酮室温固定３０ｍｉｎ后，一３０℃保存备用。取保存备用的脑印片，室温干燥后加入１：１０００倍稀释的抗狂犬病毒核蛋白单抗，３７℃湿盒孵育１ｈ后，ＰＢＳ漂洗３次，晾干后加入工作浓度的兔抗鼠ＩｇＧ荧光抗体，内含０．１％的伊文思兰，３７℃湿盒孵育１ｈ

后，ＰＢＳ漂洗３次，荧光显微镜下观察。

结果

ＣＶＳ阳性对照样品免疫荧光为强阳性，荧光显微镜下可见胞浆中布满大量的亮绿荧光颗粒，此为狂犬病毒特异性核蛋白包涵体，同时发现细胞核中无任何荧光颗粒；６３份狂犬病毒阳性的街毒标本免疫荧光均呈阳性，细胞核中无狂犬病毒，荧光染呈阴性，不同的样品胞浆中荧光颗粒大小及形状各不相同，有的呈条索状（图１），有的呈大颗粒状（图２），还有的呈砂砾状均匀分布（图３）。

正常乳鼠脑阴性样品免疫荧光为阴性，荧光显微镜下仅见伊文思兰负染造成的暗红细胞背景；所有已证实为狂犬病毒阴性的２７１份动物脑组织标本，免疫荧光试验均为阴性，印片可见呈暗红细胞背景，无任何亮绿荧光颗粒。

表１为免疫荧光特异性及灵敏度比较，计算特异性和灵敏度结果如下：特异性＝６３÷（６３＋０）＝１００％，灵敏度＝２７１÷（２７１＋０）＝１００％。

图１狂犬病毒免疫荧光试验条索状荧光（×２００）

图２狂犬病毒免疫荧光试验荧光大颗粒（×２００Ｊ

图３

狂犬病毒免疫荧光试验尘埃状荧光颗粒（×１００）

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tatp抗狂犬病毒核蛋白单克隆抗体在狂犬病街毒检测中的应用

作者：徐葛林，严家新， Larrous F，祝玉桃， Cozette P，薛红刚，胡巧玲， Bourhy H，XU Ge-Lin， YAN Jia-xin， Larrous F， ZHU Yu-tao， Cozette P， XUE Hong-gang，

HU Qiao-ling， Bourhy H处方药与非处方药分类管理办法

作者单位：徐葛林，严家新，祝玉桃，薛红刚，胡巧玲,XU Ge-Lin,YAN Jia-xin,ZHU Yu-tao,XUE Hong-gang,HU Qiao-ling(430060，武汉，卫生部武汉生物制品研究所)， Larrous F,Cozette

P,Bourhy H,Larrous F,Cozette P,Bourhy H(Pasteur Institute,France)

铁托

合肥五里墩立交桥刊名：

中华流行病学杂志

scc

英文刊名：CHINESE JOURNAL OF EPIDEMIOLOGY

年，卷(期)：2005,26(2)

被引用次数：7次

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