焊缝强度
蛋白前期准备
（1）查阅目标蛋白相关文献，了解其等电点，标签等注意点。
（2）如果目标蛋白易降解，可在纯化时加1-2mMDTT，全程低温，及时处理。（3）透析Buffer的选择可参考文献。
蛋白复性
包涵体：在某些生长条件下，大肠杆菌能积累某种特殊的生物大分子，它们致密地集聚在细胞内，或被膜包裹或形成无膜裸露结构，这种水不溶性的结构称为包涵体（Inclusion Bodies，IB）。 在E.coli中累积的重组蛋白会迅速地以包涵体形式被沉淀出来，这些包涵体蛋白是丧失生物活性的不可溶的错误折叠蛋白的聚集体。
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包涵体的处理一般包括这么几步：包涵体的洗涤、溶解、纯化及复性。
如果过表达蛋白在包涵体中，那么通常有两个选择可以考虑：（1）退一步，优化表达条件；（2）接受包涵体并采取策略来将蛋白溶解以及复性。这里主要考虑第二种方案。
包涵体的洗涤
破碎细胞都会使细胞内蛋白质或核酸水解酶释放到溶液中，使大分子生物降解，导致天然物质量的减少，加入蛋白酶抑制剂等，还可通过选择pH、温度或离子强度等，使这些条件都要适合于目的物质的提取。
洗涤Buffer：50mM Tris-HCl(pH8.0), 2mM EDTA, 2mM DTT，150mM NaCl, 1% Triton X-100, 1mg/ml Leupeptin, 1mg/ml Pepstatin,1mM TCEP。
超声时用40-60ml裂解液，因为我们的超声仪很适合用100ml小烧杯，装
40-60ml裂解液，这样能让超声头离液面不高不低，不会洒出来.菌多就延长超声时间（全程冰浴）。
包涵体的溶解自制有源音箱
系统和PBS系统都没有明确的规定，这些需要你在实验过程中不断试验，确定合适的缓冲系统；复性过程主要是注意以下几个问题：
（1）最适pH值范围为8.0-9.0之间；(有时需要过酸或过碱性)
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（2）温度适宜选择4℃；
（3）复性过程蛋白浓度不宜过大；（小于0.5 mg/ml为宜）
（4）复性时间一般为24-36小时；
（5）低分子化合物如L-Arg有助于增加复性中间产物的溶解度；脲、盐酸胍等，在非变性浓度下是很有效的促进剂，都可阻止蛋白聚集；Tris对蛋白质复性有促进作用。
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（6）氧化还原体系，如GSH/GSSG、DTT/GSSG等。常用的氧化方法有：空气氧化法：在碱性条件下通空气，或者加入二价铜离子，能够取得更好的效果，缺点是不易控制氧化还原电势。
氧化还原电对（redox）：常采用GSSG/GSH（1:5-1:10），通过调整两者的比例来控制较精确的氧化还原电势，也可以在添加了还原剂如DTT，如：5 mM GSSG/2 mM DTT=GSH/GSSG(1.33/1)。
（7）复性过程的添加剂：
1、共溶剂：如PEG6000-20000，据说可以可逆的修饰折叠中间体的疏水集团，此外由于阻止了蛋白质分子间的相互接触的机会，也可能对复性效率的提高起作用。一般的使用浓度在0.1%左右，具体条件可根据实验条件确定。
教子一得2、0.4-0.6 M L-Arg：促进蛋白溶解，（成功的应用于很多蛋白如t-PA的复性中，也可以抑制二聚体的形成。）
3、甘油等：增加黏度，减少分子碰撞机会，一般使用浓度在5%-30%。
4、一定的盐浓度，可能是为了降低某些带电集团间的斥力，有利于蛋白质的折叠。
5、辅助因子：添加蛋白质活性状态必须的辅助因子如辅酶辅基等或蛋白配体等（如分子伴侣等）很多时候对蛋白质正确的折叠是有利的。
6、特殊离子：如CaCl
2，MgCl
2
等特殊的金属离子，可参与蛋白质的正确折
叠，促进活性的作用。（此时勿加入EDTA。）
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