重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确配对，导致蛋白以包涵体的形式存在。导致包涵体形成的主要原因有以下几点： 重组蛋白的氨基酸组成，一般说来含硫氨基酸越多越容易形成包涵体。
重组蛋白所处的环境：诱导温度高或胞内pH接近蛋白的等电点时容易形成包涵体。
重组蛋白是大肠杆菌(Escherichia coli)的异源蛋白，由于缺少真核生物中翻译后修饰所需酶类，致使中间体大量积累，容易形成包涵体沉淀。
有报道认为，丰富的培养基有利于活性蛋白质的表达，当培养条件不佳时，容易形成包涵体。
汉语听力包涵体内的蛋白是非折叠状态的聚集体，不具有生物学活性，因此要获得具有生物学活性的蛋白质必须将包涵体溶解，释放出其中的蛋白质，并进行蛋白质的复性。包涵体复性在世界范围内都是个难题，最好的复性方法也不会超过20%。目前大家在这方面研究也比较多，有
客家建筑研究证明一些分子伴侣有助于蛋白的复性；同时稀释、透析、渗透是最经典的蛋白复性的方法；另外氨基酸如精氨酸、糖类、醇类、表面活性剂对蛋白的复性都有辅助作用，还有很多的表达系统可以助复性。
本公司主要通过梯度透析和稀释的方法对变性蛋白进行复性。
fsr梯度透析法
梯度透析缓冲液配方：
PBS（1L）：8.0NaCl、28.65gNa2HPO4·12H2O、0.234gNaH2PO4·2H2O
缓冲液A：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton-X-100
缓冲液B：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton X-100、2M脲素
缓冲液C：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton-X-100、2M盐酸胍
溶解缓冲液D：数理化自学丛书50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、10mM β-巯基/乙醇/DTT、2mM脱氧胆酸钠、8M脲素
复性缓冲液Ⅰ：50mM Tris-HCl (pH8.5)、100mM NaCl、6M/4M/2M脲素、1%甘氨酸、5%甘油、0.2%PEG、1mM氧化型谷胱甘肽、1mM还原型谷胱甘肽
若蛋白以包涵体的形式纯在，则需要从包涵体中纯化出目的蛋白：
1、大量诱导表达菌液，片章5000g离心10min，弃上清，用缓冲液A重悬，超声波破碎，功率45%，工作2s，暂停2s，破碎10min，，10,000g离心10min。将离心收集的包涵体用PBS缓冲液洗涤一次。离心，收集沉淀。
2、将沉淀用缓冲液B重悬，同样的条件超声破碎5min；10,000g离心10min，弃上清，收集包涵体沉淀。
3、再用缓冲液C超声3min，清洗包涵体沉淀。10,000g离心10min收集沉淀。
4、用缓冲液D溶解包涵体，缓慢摇动使其缓慢溶解，室温放置30min，然
后10,000g离心10min，取上清。
5、将上清稀释至0.1-1.0mg/ml，装入透析袋中，放置于6M尿素的复性缓冲液中，4℃缓慢透析6h。
6、再将透析袋置于4 M尿素的复性缓冲液中，4℃缓慢透析14h。
7、再将透析袋置于2 M尿素的复性缓冲液中，4℃缓慢透析14h。
8、最后将透析袋置于透析液（PBS）中透析过夜。
9、将透析后的重组蛋白进行SDS-PAGE检测，看纯度是否达标，若含有杂蛋白则根据重组蛋白所带标签的不同对进行对应的挂柱纯化，后期纯化过程同可溶性蛋白的纯化。
稀释法复性蛋白
稀释法蛋白复性缓冲液配方：
PBS（1L）：8.0NaCl、28.65gNa2HPO4·12H2O、0.234gNaH2PO4·2H2O
缓冲液A：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton-X-100
缓冲液B：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton X-100、2M脲素
缓冲液C：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1mM EDTA、100mM NaCl、1%Triton-X-100、2M盐酸胍
溶解缓冲液E：50mM Tris-HCl (pH8.5)、15mM DTT、8M脲素
复性缓冲液Ⅱ：50mM Tris-HCl (pH8.5)、1M NaCl、2M脲素、0.5mM L-Arg、0.5mM ZnCl2、1mM还原型谷胱甘肽
包涵体纯化及复性操作步骤：
若蛋白以包涵体的形式纯在，则需要从包涵体中纯化出目的蛋白：
1、大量诱导表达菌液，5000g离心10min，弃上清，用缓冲液A重悬，超声波破碎，功率45%，工作2s，暂停2s，破碎10min，，10,000g离心10min。将离心收集的包涵体用PBS缓冲液洗涤一次。离心，收集沉淀。
2、将沉淀用缓冲液B重悬，同样的条件超声破碎5min；10,000g离心10min，弃上清，收集包涵体沉淀。
3、再用缓冲液C超声3min，清洗包涵体沉淀。10,000g离心10min收集沉淀。
4、用缓冲液D溶解包涵体，缓慢摇动使其缓慢溶解，室温放置30min，然
后10,000g离心10min，取上清。
5、使用BAC试剂盒测出溶解的包涵体蛋白浓度，蛋白浓度较高则用溶解缓冲液将其浓度稀释至0.5mg/ml左右。
、将稀释后的蛋白溶液缓慢的加入到复性缓冲液中，加入过快会导致蛋白凝聚，因此尽量慢慢滴加。
7、将混合液的pH值调至8.5，4℃条件下放置24h稀释复性，复性率可达至25%。
8、将复性的蛋白10,000g离心10min，上清转入透析袋中，用PEG20000进行浓缩至合适的浓度。浓缩完成后再次10,000g离心10min，取上清。
9界首教育网、将浓缩后的蛋白进行SDS-PAGE检测，看纯度是否达标，若含有杂蛋白则根据重组蛋白所带标签的不同对进行对应的挂柱纯化，后期纯化过程同可溶性蛋白的纯化。
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