2 ）包涵体的分离
蛋白质在细菌中的高水平表达，常形成相差显微镜下可见到的细胞质颗粒，即为包涵体，经离心沉淀后可用Triton-X100 / EDTA 或尿素洗涤，若为获取可溶性的活性蛋白，须将洗涤过的包涵体重新溶解并进行重折叠。 （1）试剂与配制
① 洗涤液I：
0.5 % Triton X -100
10 mmol / L EDTA (pH 8 .0 )
溶于细胞裂解液中。
（中国海洋石油报社2）细胞裂解混合物12 000g 离心，15 min ,4 ℃ ；弃上清，沉淀用9× 洗涤液l 悬浮；室温
放置5 min ; 12 000g 离心15 min ,4 ℃ ；吸出上清，用100 μL 水重新悬浮沉淀；分别取10 μL上清和重新悬浮的沉淀，加10 μL 2× 凝胶电泳加样缓冲液，进行SDS-PAGE 。
3 ）包涵体的溶解和复性广东省地税
（1）试剂与配制
① 缓冲液I：
1 mmol / L PMSF
8mol /L 尿素
10 mmol / L DTT
溶于前述裂解缓冲液中。
② 缓冲液Ⅱ：
50 mmol / L KH2PO4
1 mmol / L EDTA (pH 8 .0 )
50 mmol / L NaCI
一个阿富汗大兵的亡命之旅2 mmol / L 还原型谷胱甘肽
1 mmol / L 氧化型谷胱甘肽
③ KOH 和HCI 。
④ 2×凝胶电泳加样缓冲液。
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（2）用100 μL 缓冲液I 溶解包涵体；室温放置lh ；加9×缓冲液Ⅱ，室温放置30 min ，用KOH 调pH 到10.7 ；用HCI 调至pH 8 .0 ，在室温放置至少30 min ; 1000g 离心，15 min ，室温；吸出上清液并保留，用100 μL 2×凝胶电泳加样缓冲液溶解沉淀；取10 μL 上清，加10 μL 2× 凝胶电泳加样缓冲液，与20 μL 重新溶解的沉淀进行SDS-PAGE 。
四、注意事项
（1）不同的大肠杆菌表达载体带有不同的启动子和诱导成分。实验者必须根据特定系统和用途决定相应的实验方案。
（2激光戒烟）表达和检测时，应设置对照组，如转化载体和非诱导细胞。
（3）由于大肠杆菌中表达的重组蛋白质缺少哺乳动物细胞特异的翻译后加工，所以，其生物活性无法与天然蛋白质相提并论。
氯化铝PBS就可以阿，生理条件的缓冲液，一般pH7-8，可以再考虑加入点保护剂，溶菌酶之类的东西，PMSF主要是防止蛋白被蛋白酶降解，溶菌酶可以帮助破碎，超声的时候要控温冰浴，防止超声产生的热量是温度升高，蛋白变性，因为有些蛋白表达出来是在上清的，无需复性就有活性，而有些是包含体，必须用Urea, Gua-HCl，SDS等溶解再复性，有些蛋白是处于两者之间，可以考虑用不同浓度和种类的detergent溶解，而且也很可能是有活性的。
你后面说的buffer也不是不可以，有些蛋白对盐浓度很敏感，有的蛋白必须用高一点的盐浓度才能溶解，所以蛋白的性质是case by case的，有时候同样的序列，发酵条件改变，得到的蛋白活性也是不一样的。
超声后10000g10min后，依次用PBS, triton-X100 0.01%, 0.05%, 0.1%, 0.2%...0.5%提取一下，后用1M Urea, 2M Urea, 4M Urea,....8M Urea提取，跑个电泳就差不多知道了，这是个预试验。
提取的时候要vortex均匀，1M Urea应该不会让蛋白变性，如果是包含体，8M Urea才能完全提取出来，如果提得不好，根据目的蛋白二硫键的情况，可以考虑加入10mM DTT。
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