3.2.3.11 buffer A
NaH2PO4 | 100 mmol/ L |
TrisHCl | 10 mmol/ L |
尿素 | 8 mol/ L |
| |
用NaOH调整pH值到8.0。
3.2.3.11 buffer B 宽霖法师
NaH2PO4 | 100 mmol/ L |
TrisHCl | 三星m750010 mmol/ L |
尿素 | 8 mol/ L |
| |
用HCl调整pH值到6.3。
3.2.3.11 buffer C
NaH2PO4 | 100 mmol/ L |
TrisHCl | 10 mmol/ L |
尿素 | 8 mol/ L |
| |
用HCl调整pH值到5.9。
3.2.3.11 buffer D
NaH2PO4 | 100 mmol/ L |
TrisHCl | 10 mmol/ L |
尿素 | 8 mol/ L |
| 剩余人生店 | |
用HCl栖霞市实验小学调整工业控制计算机pH乔丹法则值到4.5。
挑取含有pET-HisPrP质粒的菌落接种20ml kana LB培养基中，37℃，摇菌过夜。按照1:100接种菌液于1L kana LB培养基，37℃，摇菌3h。加入IPTG，使其终浓度为1mmol/L，37℃，摇菌3h。3000×g，10min离心，收获菌体。用100ml预冷PBS重悬菌体，5000×g，离心10min，收获菌体，如此重复三遍，菌体可储存于-80℃备用。 已知rHisbPrP存在于细菌包涵体中，纯化rHisbPrP的方法有两种，方法一为pH梯度洗脱，步骤如下：
将按照5ml/g湿重的比例加入buffer A重悬菌体，放置在冰上，超声，强度10，超声10s冰上放置30s至1min，重复多次，直至菌体全部裂解。室温条件下，10000 ×g，离心30min，弃沉淀取上清，上清用0.45μm过滤器过滤。Ni-NTA用两倍体积的buffer A洗涤、平衡，然后加入等体积buffer A制备成50% Ni-NTA。取4ml的上清加入1ml的50% Ni-NTA，冰上震荡混匀2h。将孵育好的菌体上清和介质的混合液小心的移入一个底部封闭的空柱内，去除底部的密封盖，使液体流出，收集流穿液，用于SDS-PAGE分析。用4 ml buffer B洗涤介质，收集洗涤液，用于SDS-PAGE分析。用0.5 ml bufferC流洗重组蛋白4次，然后用0.5 ml buffer D流洗蛋白4次，收集各收集液，用于SDS-PAGE分析。
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