一、选择
单选
1、下列哪项不属于生物工程？
A. PCR技术 B.重组DNA技术 C.蛋白质工程 D.酶工程 E.细胞工程
2、重组DNA技术中所用的限制酶是哪类？
A.Ⅰ型限制酶 B.Ⅱ型限制酶 C.Ⅲ型限制酶 D.Ⅳ型限制酶 E.Ⅴ型限制酶
3、可以利用蓝白筛选法筛选用pUC转化的重组DNA克隆，是因为pUC包含以下哪种元件？
A. 复制起点 B. ampR C.acZ' D.多克隆位点MCS E.调节基因lacI 4、关于λ噬菌体，以下叙述错误的是
A. 基因组DNA的部分序列并非溶原性生长所必需
B. 基因组DNA感染大肠杆菌后形成闭环结构
C. 在溶原性生长时进行滚环复制
D. 复制时形成多联体结构
E. 其转化的细菌经过培养形成噬菌斑
5、pBR322质粒包含两个抗性基因：氨苄青霉素抗性基因和四环素抗性基因，据此可以利用哪种方法筛选重组DNA克隆？
A. α互补 B. PCR C.插入失活 D.核酸分子杂交 E.蓝白筛选
6、制备重组DNA首先要制备目的DNA，要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。常用的制备方法不包括
A. PCR扩增 B.从组织细胞分离基因组DNA
C.化学合成 D.逆转录合成cDNA E.限制酶截取
7、第一种应用于临床的重组蛋白是
A. 基因工程疫苗 B.基因工程抗体 C.激素
D. 生长因子 E.细胞因子
8、在重组DNA技术中，目的DNA与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。体外重组的方法不包括： A. 加人工接头连接 B.加同聚物尾连接 C.互补黏端连接 D.连接 E.平移连接
9、重组DNA的宿主细胞有原核细胞和真核细胞。用于制备基因文库的宿主细胞主要是 A. 哺乳动物细胞 B.大肠杆菌 C.酵母 D.枯草杆菌 E.昆虫细胞
10、哪种方法要求宿主细胞必须是感受态细胞？
A. CaCl2法 B.病毒感染法 C.脂质体载体法 D.显微注射法 E.穿刺法
11、蓝白筛选属于筛选重组DNA克隆方法的哪种？
A. PCR分析 B.插入失活分析 C.核酸分子杂交分析 D.酶切分析 E.免疫分析
12、重组DNA技术领域常用的质粒DNA是
A. T病毒基因组DNA的一部分
B. 细菌染体外的独立遗传单位
C. 细菌染体DNA的一部分
D. 真核细胞染体外的独立遗传单位
E. 真核细胞染体DNA的一部分
13、某限制性内切核酸酶切割5’…GGGGGG▼AATTCC…3’序列后产生
A. 5’突出末端 B. 5’或3’突出末端
C. 5’及3’突出末端
D. 3’突出末端 E. 平末端
14、“克隆”某一目的DNA的过程不包括
A. 重组DNA分子导人受体细胞
B. 外源基因与载体的拼接 C. 基因载体的选择与构建 D. 筛选并无性繁殖含重组分子的受体细胞 E. 表达目的基因编码的蛋白质 15、关于基因文库及其构建，以下叙述错误的是
A. 基因文库包括基因组文库和cDNA文库
B. 构建基因组文库常用的克隆载体是λ噬菌体、粘粒和酵母人工染体系统
C. 金牌班长目前构建的cDNA文库可以包含一种生物基因组所含的全部编码序列
D. 真核生物cDNA文库中的目的基因可以在原核细胞内表达活性产物
E. 构建cDNA文库要用到逆转录酶
多选：
1、用目的DNA和质粒制备重组DNA入世十年，下列哪些工具酶是必需的？
A. DNA聚合酶 B.核酸酶 C.连接酶 D.限制酶 E.修饰酶
2、影响限制酶切割效率的因素有那些？
淳于髡
A. 底物纯度 B.底物甲基化程度 C.底物结构 D.反应温度 E.反应体系组成
3、哪些因素会降低限制酶的特异性?
A. 高浓度限制酶
B. 高浓度甘油
C. 低离子强度
D. 用Mn2+取代Mg2+
E. 高pH值
4、限制酶的应用非常广泛，包括:
A. DNA重组 B.gogo70质粒改造 C. DNA杂交 D.探针制备 E.基因定位
5、关于重组DNA技术使用的DNA 连接酶
A. 用以将目的DNA与载体共价连接成重组DNA
B. 包括大肠杆菌DNA连接酶和T4 DNA连接酶
C. 大肠杆菌DNA连接酶需要NAD，而T4 DNA连接酶需要ATP
D. 大肠杆菌DNA连接酶用于连接切口或互补黏端
E. T4 DNA连接酶用于连接互补黏端或平端
6、重组DNA技术常用的DNA聚合酶有
A. DNA聚合酶Ⅰ B. Klenow片段 C. Taq DNA聚合酶
D. 逆转录酶 E. T4 DNA聚合酶
7、载体分为克隆载体和表达载体两类。克隆载体含有以下基本元件
A. 复制起点 B.克隆位点 C.选择标记 D.启动子 E.核糖体结合位点
8、表达载体的哪些元件是克隆载体不需要的？
A. 复制起点 B.克隆位点 C.选择标记 D.启动子 E.核糖体结合位点
9、原核细胞表达载体的表达元件有
A. lt36核糖体结合位点 B.加尾信号 C.启动子 D.增强子 E.转录终止信号
10、真核细胞表达载体的哪些表达元件是原核表达载体没有的
A. 核糖体结合位点
B. 加尾信号
C. 启动子
D. 增强子
E. 转录终止信号
11、以下哪些是真核载体？
A. 质粒 B.噬菌体 C.酵母人工染体 D.逆转录病毒 E.腺病毒
12、以下哪些DNA分子可以通过化学合成法制备？
A. Cdna B. PCR引物 C.寡核苷酸探针 D.较小的基因 E.人工接头
13、将外源DNA导入原核细胞，常用
A. CaCl2法 B.电穿孔法 C.病毒感染法 D.脂质体载体法 E.显微注射法
14、以下哪些是真核生物基因在原核细胞内表达存在的问题？
A. 真核生物基因的启动子不能被原核生物的RNA聚合酶识别
B. 真核生物基因含有内含子，原核细胞没有相应的剪接系统
C. 真核生物mRNA翻译起始位点不能被原核生物核糖体识别
D. 真核生物基因的表达产物往往需要后加工，原核细胞没有相应的加工系统
E. 真核生物基因表达的蛋白质容易被原核细胞的蛋白酶降解。
15、基因工程药物包括
A. 激素 B.细胞因子 C.生长因子 D.基因工程疫苗 E.基因工程抗体
二、填空
1. DNA克隆是从染体中分离特定DNA片段，与一个DNA载体连接成 ，将其导入宿主细胞进行复制，并随细胞分裂而扩增，最终得到该特定DNA片段的 。
2. 重组DNA技术的核心内容之一是DNA重组，即将 与 连接成重组DNA。
3. 限制酶是一种内切核酸酶，由细菌产生，能识别双链DNA的 位点，并水解该位点内部或附近的 键。
4. DNA重组需要连接酶，常用的DNA连接酶包括 DNA连接酶和 DNA连接酶。
5. 载体的化学本质是DNA。载体不但能与 重组，能导入 ，还能利用自身的调控系统，使目的DNA在宿主细胞内复制或表达。
6. 载体分为 载体和 载体两类。
7. 克隆载体含有以下基本元件：复制起点、 和 。
8. 常用的载体有以原核细胞为宿主的 载体和噬菌体载体，以真核细胞为宿主的 载体。
9. 质粒是游离于 之外、能 的闭环双链DNA，根据与宿主的相互关系分为寄生型质粒和共生型质粒。
10. pBR322质粒包含两个抗性基因： 抗性基因和 抗性基因。
11. λ噬菌体感染细菌后可以进行 生长和 生长。
12. λ噬菌体的DNA为线性双链分子，在分子两端各有12nt的 ，是天然黏端，称为 位点。
13. 制备目的DNA就是要保证目的DNA的量和纯度能满足重组要求。常用的制备方法有分离纯化、 、 和化学合成。
14. 化学合成法主要用于合成 、 、人工接头和较小的基因。
15. 在重组DNA技术中， 与载体在体外连接的过程称为DNA的体外重组。体外重组的产物称为 。
16. 体外连接的方法有平端连接、 端连接、加同聚物尾连接、 连接。
17. 外源DNA导入宿主细胞，使其获得新的遗传表型，称为 ；其中通过噬菌体或病毒完成的转化称为转导或 ，外源DNA转化培养的真核细胞称为转染。
18. 将外源DNA导入原核细胞，常用 法、 法和病毒感染法。
19. 将大肠杆菌悬浮在CaCl2溶液中，并置于低温（0～5℃）环境下一段时间，Ca2+使 的结构发生变化， 增加，外源DNA可以进入，这种细胞称为感受态细胞。
20. 许多载体的选择标记内都有 ，插入目的DNA将导致该选择标记失活，称为 。
21. 与克隆载体相比，表达载体应具备表达元件，主要包括 、 和转录终止信号等。
22. 基因文库是已经阐明的各物种基因的总称，包括 文库和 文库。
23. 基因组文库是应用重组DNA技术构建的一个 ，它包含了一种生物 的全部DNA序列。
三、解释
1. 重组DNA技术
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2. 克隆
3. DNA克隆
4. 宿主细胞
5. 限制酶
6. 载体
7. 克隆载体
8. 表达载体
9. DNA重组
10. 转化
11. 感染
12. 转染
13. 感受态细胞
14. 基因组文库
15. cDNA文库
四、问答
1、DNA克隆的基本步骤
2、简述克隆载体及其基本元件
3、简述表达载体及其基本元件
4、简述pBR322质粒载体及其基本元件
5、简述pUC质粒载体及其基本元件
6、将外源DNA导入原核细胞的常用方法
7、真核生物基因在原核细胞内表达存在那些问题
8、用原核细胞表达真核生物基因应注意什么
9、与基因组基因及基因组文库相比，cDNA和cDNA文库的优势
答案
单选
1A 2B 3C 4C 5C 6E 7C 8E 9B
10A 11B 12B 13E 14E 15C
多选：
1CDE 2ABCDE 3ABCDE 4ABCDE 5ABCDE 6ABCDE 7ABC 8DE
9ACE 10BD 11CDE 12BCDE 13ABC 14ABCDE 15ABCDE
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