公共场所卫生检验方法
第3部分：空气微生物作业指导书
一、适用范围：
GB/T18204的本部分规定了公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的现场采样与实验室培养方法。 本部分适用于公共场所空气中细菌总数、真菌总数、β-溶血性链球菌和嗜肺军团菌的测定，其他场所可参照执行。 注：本部分中同一个指标如果有2个或者2个以上检验方法时，可根据技术条件选择使用。
二、参考文献
GB/T18204.3—2013《公共场所卫生检验方法》 第三部分：空气微生物
三、细菌总数
3.1 原理：
采用撞击方法或者自然沉降法采样、营养琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的细菌总数。
3.2 撞击法
3.2.1 仪器和设备
3.2.1.1六级筛孔撞击式微生物采样器。
3.2.1.2 高压蒸汽灭菌器。
3.2.1.3 恒温培养箱。
3.2.1.4 平皿：直径90mm
3.2.2培养基
3.2.2.1 营养琼脂培养基成分：
芒硝矿
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
肉膏 3g
琼脂 20g
蒸馏水 1000mL
2.2.2.2 制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏溶于蒸馏水中，校正PH为7.2～7.6,加入琼脂，121℃，20min灭菌备用。
3.2.3采样
3.2.4 检验步骤
将采集细菌后的营养琼脂平皿置35℃～37℃培养48h，菌落计数。 时间散3.2.5.1采样点细菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/ m3 （每立方米空气中菌落形成单位）。
2.2.5.2一个区域细菌总数测定结果：一个区域空气中细菌总数的测定结果按该区域全部采样点中细菌总数测定值的最大值给出。
3.3 自然沉降法
3.3.1 仪器和设备
3.3.1.1 高压蒸汽灭菌器。
3.3.1.2 恒温培养箱。
3.3.1.3 平皿：直径90mm。
3.3.1.4 采样支架。
3.3.2 培养基
见3.2.2。
3.3.3 采样
3.3.4 检验步骤
见3.2.4。
3.3.5 结果报告
计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验结果以每平皿菌落数（CFU/皿）给出。
四、真菌总数：
4.1 原理
采用撞击法或者自然沉降法采样，沙氏琼脂培养基计数的方法测定公共场所空气中的真菌总数。
4.2 撞击法
4.2.1仪器和设备
见3.2.1。
4.2.2 培养基
4.2.2.1 沙氏琼脂培养基成分：
蛋白胨 10g
葡萄糖 40g
琼脂 20g
蒸馏水 1000ml
4.2.2.2 制法：将蛋白胨、葡萄糖溶于蒸馏水中，校正PH为5.5～6.0,加入琼脂，115℃，15min灭菌备用。
4.2.3 采样
4.2.4 检验步骤
将采集真菌后的沙氏琼脂培养基平皿置28℃培养，逐日观察并于第5天记录结果。若真菌数量过多可与第3天计数结果，并记录培养时间。
4.2.5 结果报告
4.2.5.1采样点真菌总数结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/ m3 （每立方米空气中菌落形成单位）。企业物流管理论文
4.2.5.2一个区域真菌总数测定结果：一个区域空气中真菌总数的测定结果按该区域全部采样点中真菌总数测定值的最大值给出。
4.3自然沉降法
4.3.1 仪器和设备
见3.3.1。
4.3.2 培养基
见4.2.2。
4.3.3 采样
4.3.4 检验步骤
见4.2.4沧州师专
4.3.5 结果报告
计数每块平板上生长的菌落数，求出全部采样点的平均菌落数，检验结果以每平皿菌落数（CFU/皿）给出。
五、 β-溶血性链球菌
5.1 原理
采用撞击法采样、血琼脂培养基培养计数的方法测定公共场所空气中的β-溶血性链球菌。
5.2 撞击法
5.2.1 仪器和设备
见3.2.1
5.2.2 培养基
5.2.2.1 血琼脂平板成分：
蛋白胨 10g
氯化钠 5g
琼脂 20g
脱纤维羊血 5ml～10ml
蒸馏水 1000ml
仙企鹅
4.2.2.2制法：将蛋白胨、氯化钠、肉膏加热溶化于蒸馏水中，校正PH为7.4～7.6，加琼脂，121℃，20min灭菌。待冷却至50℃左右，以无菌操作加入脱纤维羊血，摇匀倾皿。
5.2.3 采样
5.2.4 检验步骤
5.2.4.1 培养方法：采样后的血琼脂平板在25℃～37℃下培养24h～48h。
5.2.4.2 结果观察：培养后，在血琼脂平板上形成灰白、表面凸起、直径0.5mm～0.7mm的细小菌落，菌落透明或者半透明，表面光滑有乳光；镜检为革兰氏阳性无芽孢球菌，圆形或者卵圆形，呈链状排列，受培养与操作条件影响，链的长度在4个～8个细胞至几十个细胞之间；菌落周围有明显的2mm～4mm界限分明、完全透明的无溶血环。符合上述特征的菌落为β-溶血性链球菌。
5.2.5 结果报告
5.2.5.1采样点β-溶血性链球菌结果计算：菌落计数，记录结果并按稀释比与采气体积换算成CFU/ m3 （每立方米空气中菌落形成单位）。
5.2.5.2一个区域β-溶血性链球菌测定结果：一个区域空气中β-溶血性链球菌的测定结果按该区域全部采样点中β-溶血性链球菌测定值的最大值给出。
六、嗜肺军团菌
6.1 原理
采用液体冲击法采样，培养法定性测定公共场所中的嗜肺军团菌。
6.2 仪器和设备
6.2.1 微生物气溶胶浓缩器：采样流量≥100L/min，对于直径3.0μm以上颗粒的捕集效率应≥80%（或浓缩比≥8）。
6.2.2液体冲击式微生物气溶胶采样器：采样流量7L/min～15L/min，对于0.5腐蚀科学与防护技术μm以上粒子的捕集效率应为≥90%。
6.2.3 离心管：容积50ml。
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