脂肪酶活检测原理及实际方法:
1.对硝基苯酚酯(4-Nitrophenyl ester)是脂肪酶水解活力测定中运用最为广泛的一种
底物,脂肪酶水解其产生pNP(对硝基苯酚)在碱性条件下显黄,在410nm下有吸光值,且灵敏度很高。 2.所需试剂有:
CAS 碳链长度 出货号 价格 名称
830-03-5 C2 N8130-1G ¥462 对硝基酯
2635-54-9 C4 N9876-1G罗马规约三点式振荡器 ¥570 对硝基苯丁酸酯
1956-10-1 C8 21742-1G-F ¥487 对硝基苯辛酸酯
1956-11-2 C12 61716广州黄埔造船厂-1G ¥435 对硝基苯月桂酸酯
1492-30-4 C16 N2752-1G ¥379 对硝基苯棕榈酸酯
244uu
14617-86-8 C18 N3627-1G ¥2621.97 对硝基苯硬酸脂
全部为谱纯试剂,购于sigma公司
3.标准曲线绘制:
a.标准对硝基苯酚母液(2mM,2mmol / L):
称取0.02789g的对硝基苯酚(p-NP)溶于100ml的溶液B(即不同pH的缓冲液),置于棕试剂瓶内,4℃冰箱保存。
方法一:
会员信息系统>虹膜定位b.标准曲线绘制:
分别取0.02,0.04,0.06,0.08,0.12,0.16ml的对硝基苯酚母液(2mM),用溶液B(即不同pH的缓冲液)稀释至4ml,分别测定在410nm处的吸收值。以对硝基苯酚浓度x(对应浓度分别是0.01,0.02,0.03,0.04,0.06,0.08,单位:mM)为横坐标,吸光值y为纵坐标,绘制标准曲线。
方法二:全部对硝基苯酚经过与测酶活相同的处理,获得吸光度。