(6H,s,2×OCH
3
),6154(1H,s,H24),6161(1H,s, H211);E I2MS m/z(%):432(M+,100),316(20), 330(70),299(17),180(23),15(15),43(38)。以上数据与五味子醇甲〔10〕基本一致，因此,5被确定为五味子醇甲。
化合物6：无晶体(Me OH),mp11122114℃, I RνK B r max c m21:3400(OH),1720(C=O),1600,1470, 1450,1410,1270,1250,1100,710;1H2NMR(CDCl3)δppm:6182(1H,s,H24),6153(1H,s,H211),5183 (1H,s,H26),2120(1H,m,H28),2106～2110(2H, m,H29),1133(3H,s,Me27),1117(3H,d,J=712Hz, Me28),5175(2H,s,OCH2O),3186(3H,s,OCH3), 3183(3H,s,OCH3),3153(3H,s,OCH3),3127(3H, s,OCH3),712427150(5H,m,COPh);E I2MS m/z (%):536(M+,42),416(49),345(36),105(100), 77(34)。以上数据与五味子酯甲〔11〕基本一致，因此,6被确定为五味子酯甲。
参考文献
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报(自然科学版),1999,21(4):3141
(2006-02-08收稿)
王晓利1，张俊松1，罗 谦1,2，刘金钏1,2，杨汝德2中美小学生守则对比
(11深圳职业技术学院，广东深圳518055;21华南理工大学，广东广州510641)
摘要 目的：建立贯叶连翘药材及提取物中金丝桃素的含量测定方法。方法：样品经甲醇超声波提取，采用Kr omasil C18柱(416mm×200mm,5μm)分离测定；甲醇201006mol/L磷酸氢二钠(8715∶1215,v/v，用磷酸调pH至615)为流动相；检测波长590n m；流速110m l/m in。结果：金丝桃素在010095μg～01285μg范围内呈良好的线性关系(r=019999)，平均回收率为10112%,RS D为111%。结论：本方法快捷、简便，结果准确、可靠，可作为贯叶连翘药材及提取物中有效成分的质量控制方法。
关键词 贯叶连翘；金丝桃素
中图分类号:R28411 文献标识码:A 文章编号:100124454(2006)1021047203
贯叶连翘(Hypericum perfor m atum L1)为藤黄科金丝桃属多年生草本植物，其味苦、辛，性平，可清心明目、调经活血、止血生肌、解毒消炎，是世界最畅销草药之一，国外俗称为圣约翰草。金丝桃素(Hy2 pericin)是贯叶连翘中的有效成分，为萘骈二蒽酮类化合物，具有明显的抗病毒、抗抑郁、抗肿瘤的作用，国内外完成了它抗艾滋病的Ⅱ期临床试验，其恶性神经胶质瘤的临床研究也在进行中，由于金丝桃素的多种生物活性作用，近年来已成为国际上新药研究开发的热点之一〔1、2〕。我国贯叶连翘资源相当丰富，主要分布在西北及西南地区，但我国对金丝桃素的基础和应用研究不多，目前仅将金丝桃素含量大于013%的贯叶连翘提取物出口，且提取物中的金丝桃素含量相差较大，其
中原药材的有效成分含量差别较大是原因之一。本文采用高效液相谱法对贯叶连翘原药材以及提取物中金丝桃素进行了含量测定，建立了一种简便、可靠、准确的测定方法，为原药材及提取物的质量控制提供依据。
1 仪器与试药
美国Agilent1100型高效液相谱仪(含四元
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中药材第29卷第10期2006年10月
梯度泵、在线真空脱气机、自动进样器、柱温箱、二极管阵列检测器、Che mStati on谱工作站)。
金丝桃素对照品(瑞士A lexis B i oche m icals公司)；贯叶连翘药材(陕西嘉禾植物化工有限公司，深圳市药品检验所熊英主任药师鉴定)；贯叶连翘提取物(本实验室提供)；甲醇为谱纯(Merck公司)；水为超纯水(M illi pore纯水仪制得，并过0145μm水系微孔滤膜)，磷酸氢二钠、磷酸为分析纯。
2 谱条件
依利特Kr omasil C
18
谱柱(416mm×200mm, 5μm)；流动相为甲醇201006mol/L磷酸氢二钠(8715∶1215,v/v，用磷酸调pH至615)；检测波长590nm；流速110m l/m in；柱温30℃。
3 方法和结果
311 对照品溶液的制备 精密称取金丝桃素对照品0195mg，置5m l棕量瓶中，加甲醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀制得0119mg/m l对照品贮备液。从中精密量取100μl加甲醇稀释至2m l棕量瓶，制成915μg/m l对照品溶液。 312 原药材供试品溶液的制备 取贯叶连翘药材粉碎，过80目筛，混匀，称取200mg，精密称定，
置50m l量瓶中，加适量甲醇，超声处理30m in溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用PTFE0120μm滤膜过滤，取续滤液，即得原药材供试品溶液。
313 提取物供试品溶液的制备 精密称取贯叶连翘提取物12mg，置10m l棕量瓶中，加适量甲醇，超声处理30m in溶解，加甲醇稀释至刻度，用PT2 FE0120μm滤膜过滤，取续滤液，即得提取物供试品溶液。劳动保险条例实施细则修正草案
314 线性关系考察 精密吸取“311”项下浓度为915μg/m l金丝桃素对照品溶液1,5,10,15,20,25, 30μl，自动进样注入高效液相谱仪，测定金丝桃素峰面积，以峰面积值(A)为纵坐标，金丝桃素含量(C,μg)为横坐标，绘制标准曲线，计算得回归方程为:A=248415C-217569,r=019999，表明金丝桃素在010095μg～01285μg范围内呈良好的线性关系。
315 精密度试验 取“311”项下浓度为915μg/ m l金丝桃素对照品溶液，重复进样5次，每次进样20μl，测定金丝桃素峰面积，计算RS D为012%(n =5)。
水声工程
316 重复性试验 称取贯叶连翘提取物样品，按照“313”项下平行制备提取物供试品溶液5份，每次进样20μl，测定金丝桃素峰面积，样品金丝桃素平均含量为1013mg/g,RS D为118%(n=5)。317 稳定性试验 将“313”项下新制备的供试品溶液1份，棕瓶装置于室温放置，于0,215,5, 715,10,24h分别进样20μl，计算RS D=112%(n= 6)。结果表明提取物供试品溶液中金丝桃素在24 h内基本稳定。
pm0.5318 回收率试验 采用加样回收法，称取已知金丝桃素含量的提取物样品5份，每份6mg，精密称定，分别加入金丝桃素对照品贮备液(浓度为0119 mg/m l)200μl或100μl，按“313”项下方法制备，进样20μl，计算回收率，结果平均回收率为10112%, RS D=111%。
319 样品测定 按“312”和“313”项下方法制备供试品溶液，每个样品平行制备3份溶液，注入高效液相谱仪，进样20μl，同时取浓度为915μg/m l 的金丝桃素对照品进样20μl，按照上述条件测定，以外标一点法计算样品中金丝桃素的含量，结果见表1。
表1 样品测定结果(n=3)
样品含量(mg/g)RS D(%)
原药材0187111
提取物1013118
4 讨论
411 检测波长的选择：据文献报道〔3〕，金丝桃素在284,331,375,473,548,590nm处均有吸收。实验结果证明金丝桃素在590nm处有最大吸收，且杂质干扰少，分离效果好，故选用590nm波长。
412 提取方法选择：以甲醇为溶媒，采用回流提取与超声振荡提取，考察提取率，最后确定以甲醇超声提取30m in提取率最高。
413 流动相及比例的选择：曾用甲醇2012%磷酸(40∶60,v/v)，磷酸盐缓冲液2甲醇(35∶65,v/v, pH610)作为流动相，但分离效果均不理想。经摸索确定甲醇201006mol/L磷酸氢二钠(用磷酸调pH 至615)作为流动相，且发现该流动相的体积比对保留时间产生较大的影响,01006mol/L磷酸氢二钠比例稍有加大，保留时间有显著增加，经综合考虑，选用8715∶1215。
414 层析柱的选择：曾用Agilent S B C18谱柱(416mm×150mm,5μm)和Phenomenex Luna C
18谱柱(416mm×250mm,5μm)来进行分离，但分离效果不佳。
415 滤膜的选择：在提取过滤中发现普通尼龙微孔滤膜对金丝桃素有较强的吸附作用，改用PTFE (Polytetrafluor oethylene，聚四氟乙烯)0120μm滤膜过滤，吸附很小。
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・中药材第29卷第10期2006年10月
416 避光保存：金丝桃素的结构决定了其为良好的光敏剂，因此为精确测定其含量，在提取、含量测定及保存中应注意避光，可用棕瓶盛放或用锡纸包裹。
参考文献
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手册1北京：人民卫生出版社,1986:5961
(2005-11-15收稿)
化州柚提取物中总黄酮含量测定
方铁铮，田 珩，王 宁，彭 维，王永刚，苏薇薇
(中山大学生命科学学院，广东广州510275)
摘要 采用紫外分光光度法测定化州柚提取物中总黄酮的含量，为控制其质量提供了依据。
关键词 化州柚；总黄酮；紫外分光光度法
中图分类号:R28411 文献标识码:A 文章编号:100124454(2006)1021049202
化州柚C itrus grandis(L1)O sbeck var1to m ento2 sa Hort1又称化州仙橘，系芸香科柑桔属植物，为柚C itrus grandis(L1)O sbeck的栽培变种，主产于广东化州，是广东地道药材。化州柚的未成熟或近成熟的干燥外层果皮经加工即为中药化橘红，习称“毛橘红”，具有化痰、理气、健胃、消食之功效，用于胸中痰滞、咳嗽气喘、呕吐呃逆、饮食积滞等症〔1〕。化州柚提取物是中山大学新近开发的中药五类新药，本文报道化州柚提取物中总黄酮含量的测定方法。
1 仪器、试剂与材料
111 仪器 T U21901双光束紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司);E LMA T660/H 超声波清洗器(美国EL MA，功率360W，频率35kHz)。
112 试剂 柚皮苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(供含量测定用，批号1107222200309)；甲醇(分析纯)。
113 样品 化州柚提取物由中山大学广州现代中药质量研究开发中心提供。
2 方法与结果
211 溶液的制备
21111 对照品溶液的制备：精密称取干燥至恒重的柚皮苷对照品15mg置100m l量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取上述溶液1m l，置10m l量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1m l中含柚皮苷15μg)。
21112 供试品溶液的制备：精密称取化州柚提取物50mg，置100m l量瓶中，加入甲醇30m l，超声使溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。滤过，精密吸取续滤液1m l，置25m l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，用分光光度法测定总黄酮。
212 测定波长的选择 取上述对照品溶液和供试品溶液，以甲醇作为溶剂空白，分别进行光谱扫描(400n m～200n m)，结果表明：对照品溶液和供试品溶液的光谱图基本一致，最大吸收波长均在283 nm(±1mm)，故测定波长选择283n m。
213 线性及线性范围 精密称取柚皮苷10100mg 置50m l量瓶中，加甲醇适量使溶解，并加甲醇至刻度，摇匀，即得每1m l含柚皮苷200μg的溶液。精密吸取该溶液0100m l(空白)、0110m l、0140m l、0170m l、1100m l、1130m l，置10m l量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列对照品梯度溶液。以甲醇为空白，于283nm波长处测定吸收度。以浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线。回归方程为:A=010371C+010124,r=019998。表明柚皮苷浓度在0～26μg/m l范围内呈良好的线性关系。214 精密度试验 取柚皮苷对照品溶液(15μg/ m l)，连续测定6次，结果RS D为0143%，表明其精密度好。
215 稳定性试验 取供试品溶液，分别于0、10、30、60、90、120m in测定，结果RS D为1133%，表明其稳定性好。
wap模拟器216 重复性试验 分别取同一批次的化州柚提取物，平行取样6份，制成供试品溶液，依法测定，结果RS D为1177%。
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