（盐酸萘乙二胺法）
亚硝酸盐广泛存在于自然界中，作为国家允许的食品添加剂，其纯品一般应用于肉制品加工。肉制品、肉类罐头等肉类食品，在其加工过程中，经常加入一定量的硝酸盐、亚硝酸盐，能够改善风味，稳定泽，抑制肉毒梭菌的生长及其繁殖。
蔬菜过多施用硝酸铵和其它硝态氮肥以后，未被蔬菜吸收利用的过剩硝态氮，以硝酸盐的形式储藏在蔬菜中，硝酸盐在其后的贮藏、加工、食用过程中在细菌的作用下易转化为亚硝酸盐，如绿蔬菜中的甜菜、莴苣、菠菜、芹菜及萝卜等最为严重。 生鲜白菜等蔬菜中通常含有一定量的硝酸盐，在长期贮藏尤其是腌渍加工过程中，由于硝酸还原菌的作用，硝酸盐被还原成亚硝酸盐。
其次，隔夜熟菜、霉变蔬菜、饮用水、火锅食品中亚硝酸盐含量也比较高。
反对本本主义的意义亚硝酸盐是剧毒物质，成人摄入0.2～0.5g即可引起中毒，3g即可致死。其次，亚硝酸盐与蛋
白质中的胺类结合生成亚硝胺或亚硝酰胺，亚硝胺有强致癌作用，长期大量食用含亚硝酸盐的食物有致癌的隐患。因此，硝酸盐及亚硝酸盐的使用量及在肉制品中的残留量均应按标准执行。
一、实验目的
1、掌握样品制备、提取的基本操作技能。
2、掌握分光光度计的使用。
3、掌握比法测定食品中亚硝酸盐的原理与方法。
4、了解食品中亚硝酸盐含量的卫生标准。
5. 掌握食品中亚硝酸盐与硝酸盐含量测定的国家标准方法。
二、实验原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红染料，外标法测得亚硝酸盐含量。 三、试剂和仪器
1. 试剂
除非另有规定，本方法所用试剂均为分析纯。水为GB/T 6682 规定的二级水或去离子水。
（1）亚铁（K4Fe(CN)6·3H2O）
（2）乙酸锌（Zn(CH3COO)2·2H2O）
（3）冰醋酸（CH3COOH）
（4）硼酸钠（Na2B4O7·10H2O）
（5）盐酸（ρ＝1.19 g/mLpbo2）
（6）对氨基苯磺酸(C6H7NO3S）
（7）盐酸萘乙二胺(C12H14N2·2HCl）
（8）亚硝酸钠（NaNO2）
2.试剂配制
（1）亚铁溶液(106 g/L)：称取106.0 g 亚铁用水溶解，并稀释至1000 mL。
（2）乙酸锌溶液轧辊(220 g/L)： 称取220.0 g 乙酸锌，先加30 mL 冰醋酸溶解，用水稀释至1000 mL。
（3）饱和硼砂溶液(50 g/L)： 称取5.0 g 硼酸钠，溶于100 mL 热水中，冷却后备用。
（4）对氨基苯磺酸溶液（4 g/L）：称取0.4民用机场管理条例ｇ对氨基苯磺酸，溶于100 mL 20 %（V/V）盐酸中，置棕瓶中混匀，避光保存。
（5）盐酸萘乙二胺溶液（2 g/L）：称取0.2 g 盐酸萘乙二胺，溶于100 mL 水中, 混匀后，置棕瓶中，避光保存。
（6）亚硝酸钠标准溶液（200 μg /mL）：准确称取0.1000ｇ于110℃～120℃干燥恒重或于硅胶干燥器中放置24h 以上的亚硝酸钠，加水溶解移入tsh
500 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
（7）亚硝酸钠标准使用液（5.0 μg/mL）：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00 mL，置于200 mL 容量瓶中，加水稀释至刻度。
3.仪器
（1）天平：感量为0.1 mg 和1 mg。
（2）组织捣碎机或食物粉碎机。
（3）恒温水浴锅。
（4）分光光度计。
四、操作步骤
1.试样的预处理
（1）新鲜蔬菜、水果：将试样用去离子水洗净，晾干后，取可食部切碎混匀。将切碎的样品用四分法取适量，用食物粉碎机制成匀浆备用。如需加水应记录加水量。
（2）肉类、蛋、水产及其制品：用四分法取适量或取全部，用食物粉碎机制成匀浆备用。
（3）乳粉、豆奶粉、婴儿配方粉等固态乳制品(不包括干酪) ：将试样装入能够容纳2 倍试样体积的带盖容器中，通过反复摇晃和颠倒容器使样品充分混匀直到使试样均一化。
（4）发酵乳、乳、炼乳及其他液体乳制品：通过搅拌或反复摇晃和颠倒容器使试样充分混匀。
（5）干酪：取适量的样品研磨成均匀的泥浆状。为避免水分损失，研磨过程中应避免产生过多的热量。
2.提取
称取5ｇ（精确至0.01 g）制成匀浆的试样（如制备过程中加水，应按加水量折算），置于50 mL烧杯中，加12.5 mL 饱和硼砂溶液，搅拌均匀，用去离子水约150 mL 将试样洗入 250 mL容量瓶中，于80℃水浴中加热 20 min，取出备用。
3.提取液净化
在振荡上述提取液时加入5 mL 亚铁溶液，摇匀，再加入 5 mL 乙酸锌溶液,以沉淀蛋白质。加水至刻度，摇匀，放置30 min，除去上层脂肪，上清液用滤纸过滤，弃去初滤液30 mL，滤液备用。
4.亚硝酸盐的测定
夏目漱石从此以后吸取40.0 mL 上述滤液于50 mL 带塞比管中，另吸取0.00 mL、0.20 mL、0.40 mL、0.60 mL、0.80mL、1.00 mL、1.50 mL、2.00 mL、2.50 mL 亚硝酸钠标准使用液（相当于0.0 μg、1.0 μg、2.0 μg、3.0 μg、4.0 μg、5.0 μg、7.5 μg、10.0 μg、12.5 μg亚硝酸钠），分别置于50 mL 带塞比管中。于标准管与试样管中分别加入2 mL 对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3 min～5 min 后各加入1 mL盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15 min，用1 cm 比杯，以零管调节零点，于波长 538 nm 处测吸光度，绘制标准曲线比较。同时做试剂空白。
五、结果计算
亚硝酸盐（以亚硝酸钠计）的含量按下式进行计算。
式中：
X1 ——试样中亚硝酸钠的含量，单位为毫克每千克（mg/kg）；
A1 ——测定用样液中亚硝酸钠的质量，单位为微克（μg）；
m ——试样质量，单位为克（ｇ）；
V1 ——测定用样液体积，单位为毫升（mL）；
V0 ——试样处理液总体积，单位为毫升（mL）。
以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
六、注意事项
1.以重复性条件下获得的两次独立测定结果的算术平均值表示，结果保留两位有效数字。
2.在重复性条件下获得的两次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10 %。
八、参考文献
1．石岩．食品中亚硝酸盐过量的危害与防治．食品与健康，2006，（2）：39．
2．中华人民共和国卫生部．食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定．中华人民共和国国家标准．GB 5009．33-2010．
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议