摘 要
苏霍姆林斯基的教育思想
本实验是利用采自内蒙古贺兰山的外生菌根真菌子实体作为研究对象，通过常规CTAB法对该子实体进行基因组DNA提取，并利用真菌特有的引物ITS1F和ITS4对特异的DNA片段进行PCR扩增，将扩增产物在浓度为1%的琼脂糖凝胶中电泳进行检测，并在紫外透射反射分析仪下观察检测的结果，对于较好的扩增产物利用回收试剂盒进行纯化，后将纯化产物送由上海生工进行DNA测序，将测序所得到的序列输入GeneBank数据库中的局部相似性查询（Basic Local Alignment Search Tool,BLAST)程序进行比对，列出数据库中与所测得到的序列同源性较高的序列信息并进行分类鉴定，然后运用软件raxmlGUI进行系统发育树构建。最终的研究结果显示该菌种属于报道的choiromyces helanshanensis。 关键词：外生菌根真菌；ITS序列；分子生物学；鉴定
Abstract
In this experiment, an ectomycorrhizal fungi collected from Helan Mountain, Inner Mongolia,
was used as the research object. The extraction of genomic DNA of the fruiting body of ectomycorrhizal fungi was carried out by the conventional CTAB method. The specific primers ITS1F and ITS4 were used to amplify the specific DNA sequences by PCR amplification. The amplified products were tested by electrophoresis with a 1% agarose molecular biology grade gel, and the results of the gel were observed under the ultraviolet transmission reflectance analyzer. The better amplification products were purified by using a recovery kit. Then, the purified products were sent to Shanghai Shenggong for DNA sequencing. The sequence obtained by sequencing was input into the Basic Local Alignment Search Tool(BLAST) program in the GeneBank database for comparsion. In the database, find out the sequences with higher homology with the sequenced sequences and perform the classification and identification. The phylogenetic tree was constructed by using the software raxmlGUI. The final results showed that the strain belongs to the reported Choiromyces helanshanensis 2012豪门盛宴in Helan Mountain, Inner Mongolia.
Key words：ectomycorrhizal fungi; ITS sequence; molecular biology; identification
引 言
贺兰山坐落于宁夏回族自治区的西北部，是银川平原的原始屏障，也是三北防护林建设的重点地段[]。欧 亨利贺兰山植被类型比较复杂，既有标志山地所在水平地带属性的草原和荒漠，也有山地植被垂直系列中出现的针叶林和稀疏草原，还有各种灌丛、草甸和落叶阔叶林[]。
贺兰山是我国西北部温带草原与荒漠的分界线，同时也是连接蒙古高原、青藏高原及华北植被区系的重要枢纽。因特殊地理位置及气候条件越来越受到国内学者的重视。同时独一无二的地理位置、地形地势和天然气候条件及丰富多样的生态系统造就了贺兰山丰富的真菌资源[]。青海云杉、油松等为组分的森林大约在贺兰山2000m以上。由于贺兰山的特殊地势，对贺兰山真菌资源进行研究调查和保护发展就显得迫切需要[]。
菌根（Mycorrhizae）是真菌与植物的根系形成的具有一定的形态和功能的共生体[]，能够促进林木吸收营养元素。外生菌根真菌（Ectomycorrhizal fungi，EMF)是森林生态系统的重要成员之一，能与6000多种树木形成菌根，对维持生态系统的功能和生物多样性具有不十字军
1999年虎门大桥事故
可代替的作用[]。面临我国林木连作后生产力明显下降的近况，研究外生菌根真菌在这个过程中发挥到底着怎样的作用，首先要明确外生菌根真菌落的组成情况和物种多样性[]。正是因为外生菌根真菌具有丰富的物种多样性，所以宿主植物才能适应各种不同的恶劣环境的影响，并能充分地利用土壤中的各种化学元素和养分。大量的研究表明，在森林的生态系统中，如果外生菌根真菌较少，则会影响森林中植被的生长和发育。外生菌根真菌能促进森林生态系统发挥其自我调节和更新功能，并协助维持森林生态系统的稳定。诸多研究表明，植被的生长通常受到重金属的胁迫，而外生菌根真菌则可产生大量的有机酸来消除这种重金属，降低重金属的有害作用[]。传统的菌种的分类鉴定通常是采用形态学和解剖学相结合的方法，即以观察子实体的形态为基础，通过形态学的特征来对某个菌种进行分类鉴定。然而随着分子生物学技术的发展，分子生物学方法也越来越被广泛运用于菌种的分类鉴定，尤其是基于rDNA ITS序列分析的分子鉴定方法，为属内、种间及种内体菌种的分类鉴定带来了巨大的便利edta[]。
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