实验
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分子 > 糖链的序列测定—高碘酸氧化法
(www.bbioo/experiment/15-1655-1.html)
高碘酸氧化和Smith降解
高碘酸
可选择性断裂糖分子中的邻二羟基
或邻三羟基
处,生成相应的多糖醛,甲醛或甲酸
.反应定量进行,每开裂1个C—C键消耗1分子高碘酸
.通过测定高碘酸的消耗量及甲酸
的释放量
,可以判断糖苷键
的位置,直链多糖的聚合度
,分支多糖的分支数
等.Smith降解是将高碘酸氧化产物
还原后酸水解,再鉴定水解产物,从而推断糖苷键
的位置与分支点
等.以葡萄糖为例,以1—2或1 —4位键合的糖基经高碘酸氧化,平均每个糖基消耗1分子高碘酸,且无甲酸
释放;1—3位键合的糖基不被高碘酸氧化;1—6位键合的糖基或非还原末端糖基经高碘酸氧化,消耗2分子高碘酸同时释放1分子甲酸.【实验原理】
高碘酸可以选择性地氧化和断裂糖分子中连二羟基或连三羟基处，生成相应的多糖醛、甲醛或甲酸。反应定量地进行，每开裂—个C-C键消耗一分子高碘酸。通过测定高碘酸消耗量及甲酸的释放量，可以判断多糖分子中糖苷键的位置、类型、多糖的分枝数目和取代情况等。
规划成果【实验材料】
1. 实验器材
紫外分光光度计。
2. 实验试剂
(1)溴甲酚蓝指示剂:0.1克溴甲酚蓝溶于250ml蒸馏水中（含1.43毫升0.1mol/L氢氧化钠）。
(2) 30mmol/L高碘酸钠溶液。聂党权
高碘酸钠 基本信息
中文名称:高碘酸钠
英文名称:Sodium periodate
张欧亚中文别名:过碘酸钠;偏高碘酸钠
英文别名:Sodium Metaperiodate; Sodium Metapriodate; Sodium (Meta)Periodate; Sodium Tetroxoiodate(Vii); Sodium meta periodate
CAS:7790-28-5[1]
EINECS:232-197-6
分子式:NaIO4
分子量:213.8918
高碘酸 简介
赖如宜
中文名称： 高碘酸
英文名称： periodic acid
正高碘酸
英文别名:pentahydroxy-lambda~5~-iodane oxide[1]
CAS No.： 10450-60-9
分子式： H5IO6
分子量： 227.94
理化特性：
主要成分： 纯品
外观与性状： 无或白结晶，无臭，有潮解性。
熔点(℃)： 122
沸点(℃)： 140(分解)
相对蒸气密度(空气=1)： 7.9
溶解性： 溶于水、乙醇，微溶于乙醚。
主要用途： 用作氧化剂。
高碘酸钠制备：
氧化法 将碘在水介质中，通入进行氧化生成高碘酸，经分离杂质后，加入氢氧化钠溶液中和至pH2～3，生成高碘酸钠溶液，再经提纯、分离杂质、蒸发浓缩、冷却结晶、离心分离、干燥，制得高碘酸钠成品，其反应方程式：
HIO4+NaOH→NaIO4+H2O
(3) 乙二醇。
(4) 0.01mol/L氢氧化钠溶液。
【实验操作】
1. 制作标准曲线：
取6支干燥试管，按下表操作
管号 | 0 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
高碘酸钠（ml） 安置房建设 | 0 | 0.5 | 1.0 | 1.5 | 2.0 | 4.0 |
蒸馏水（ml） | 4.0 | 3.5 | 3.0 | 2.5 | 2.0 | 0 |
各取0.1 ml，定容至25 ml，在223nm处测定光密度 |
A223 | | | | | | |
| | | | | | |
外商投资企业投资者股权变更的若干规定横坐标为高碘酸钠毫摩尔数，纵坐标为光密度值，绘制标准曲线。
2. 样品测定
称取多糖样品25mg，用少量水溶解，加入30mmol/L高碘酸钠溶液,定容至25ml，置于暗处,室温下进行反应，于0，6，12，24，36，48…小时间隔取样0.1 ml，蒸馏水稀释250倍后，使用紫外分光光度计在223nm处测定光密度。至光密度值达一稳定值时，加乙二醇破坏过量的高碘酸以终止反应。由此光密度值根据标准曲线计算出高碘酸的消耗量。取2ml上述反应溶液，测定甲酸的生成量。剩余部分进行Smith降解。
3. 甲酸测定：
取2ml上述反应溶液，加一滴溴甲酚蓝作指示剂，用0.01mol/L氢氧化钠溶液滴定甲酸的释放量。
【注意事项】
为避免发生超氧化，反应溶液的pH值应控制在3~5，而且一定要在低温、避光处进行
实验 > 生化分子 > 糖链的序列测定—Smith降解法
(www.bbioo/experiment/15-1657-1.html)
Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。 以葡聚糖为例，其反应式如下图： 以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消…
Smith降解是将高碘酸氧化产物用硼氢化合物(如硼氢化钾或硼氢化钠)还原成稳定的多羟基化合物。
然后进行适度的酸水解，用纸层析鉴定水解产物，由水解产物可以推断多糖各组分的连接方式及次序。
以葡聚糖为例，其反应式如下图：
以1→2位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；
Smith降解后产生甘油。
以1→4位键合的糖基经高碘酸氧化，平均每个糖基仅消耗一分子高碘酸，并且无甲酸释放；
Smith降解后产生赤藓醇。
以1→3位键和的糖基不被高碘酸氧化；
Smith降解后仍为原来糖。
以1→6位键和的糖基或非还原末端基（1→6）经高碘酸氧化，消耗二分子高碘酸，同时释放一分子甲酸；
Smith降解后产生甘油。
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