• 操作简便且兼容血清 • 转染效率高 • 细胞毒性极低 • 细胞类型广泛 操作流程图：
Xfect 质粒DNA 转染试剂操作步骤(6-孔板)：
央视新闻频道改版1. 转染前的准备
贴壁细胞: 在转染的前1d ，接种1ml 合适密度的细胞于6-孔板的单孔中，使转染当天细胞融合度能够达到50–80%。
悬浮细胞: 在混匀Xfect Polymer 前，将细胞以5 x10e5–1.25 x10e6/1ml 接种于6-孔板中培养。 2. 漩涡混匀Xfect Polymer 。
3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂： Tube 1 (质粒DNA)
---μl (5 μg) 质粒DNA
---μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积
T ube 2 (Polymer) 1.5 μl Xfect Polymer (100μg /μl ) 98.5 μl Xfect 反应缓冲液 100 μl 总体积
注意:
• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。 • 每1μg 质粒DNA 加0.3 μl Xfect Polymer 。 • 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA 是最佳使用量。若您是首次使用Xfect 转染细胞，需要按照2.5 μg ，5 μg 和7.5 μg 的质粒DNA 的量进行梯度实验，确定质粒DNA 的最优使用量。 实验证明，质粒DNA 的量
夜圣不能少于2.5 μg ，不然会造成转染效率低（经转染Hela 细胞实验验证）。 • Xfect Polymer 预混液室温放置不要超过30min 。
4. 漩涡混匀每管混合物。
5. 将Xfect Polymer 预混液和DNA 预混液混合，再将混合液以适中的速度漩涡10sec 。
6. 室温孵育10 min ，形成Xfect/DNA 复合物。
ca1277. 将200μl 纳米复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。 注意:
无需去除培养基中的血清，当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜会有些改变，这是正常的。
8. 37℃孵育培养板。
9. 4 hr 后，吸走培养基，向培养板中加入2ml新鲜培养基，再将培养板放回37℃培养箱继续培养，48 hr后检测基因的表达。
Xfect 成人干细胞转染试剂
薄洁莹•转染效率优于其他竞争产品
• 人间质干细胞的转染效率为67%
• 人脂肪干细胞的转染效率99%
• 对细胞分化无任何影响
成人干细胞专用Xfect质粒DNA转染试剂操作步骤(6-孔板)：
1.转染前1d，接种2ml细胞，不同类型的细胞需要不同的接种密度，
转染时细胞应该达到的融合度：
hMSC的融合度为50–60%
hADSC的融合度为60–70%
2. 室温下解冻Xfect Adult Stem Cell Polymer，漩涡混匀。
3. 对于每个孔转染实验，将以下试剂分别在2个离心管中混匀：
Tube 1 (质粒DNA)
---μl (7.5 μg) 质粒DNA
---μl Xfect 反应缓冲液100 μl 总体积
T ube 2 (Polymer)
3 μl Xfect ASC Polymer(50μg/μl) 97 μl Xfect 反应缓冲液
谭厚兰100 μl 总体积
注意:
• Xfect ASC Polymer预混液室温放置不要超过30min。Xfect ASC Polymer在4℃放置不超过3个月。
•上述为6-孔板单孔转染所需的量。
4. 将各管中混合物漩涡混匀。
5. 将Xfect ASC Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。
6. 室温孵育10 min，形成Xfect ASC/质粒DNA复合物。
7. 从步骤1的6-孔培养板中吸掉1ml培养液，保证在转染时6-孔板中剩余1ml培养基。
8. 将200μl复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意: 无需去除培养基中的血清。当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜会有些改变，这是正常的。
9. 37℃孵育培养板。
10. 4 hr后，吸掉培养基，然后向培养板中加入2ml新鲜培养基，37℃继续培养。
11. 每天更换一次培养基，48 hr后检测基因的表达。
Xfect 小鼠胚胎干细胞转染试剂
•转染效率优于其他竞争产品
•超高的基因表达Superior gene expression in mES cells
•操作简便且兼容血清
小鼠胚胎干细胞专用Xfect质粒DNA转染试剂操作步骤(6-孔板)：
1.转染前的准备
在转染前5hr，接种5 x 10e5/1ml–1 x 10e6/1ml细胞于6-孔板中。为了防止ES细胞分化，建议使用0.2%明胶包被的培养板（使用2%明胶母液(Sigma cat.No.G1393)去包被培养板）。将包被好的培养板过夜干燥后接种ES细胞。
2. 漩涡混匀Xfect mESC Polymer。
3. 对于单孔转染，分别在2个离心管中混匀以下试剂：
Tube 1 (质粒DNA)
---μl (5 μg) 质粒DNA
---μl Xfect 反应缓冲液100 μl 总体积T ube 2 (Polymer)
2.5 μl Xfect mESC Polymer(100μg/μl) 97.5 μl Xfect 反应缓冲液
100 μl 总体积
注意:
• 上述为6-孔板单孔转染所需的量。
• 每1ug 质粒DNA加0.5 μl Xfect mESC Polymer。
• 对于大多细胞来说，5 μg 的质粒DNA是最佳使用量。若您是首次使用Xfect mESC转染您的细胞，按2.5 μg，5 μg和7.5 μg的质粒DNA进行梯度转染实验，确定质粒DNA的最优使用量。实验验证，质粒DNA 使用量最少不能少于2.5 μg，不然会造成转染效率低。
•Xfect mESC Polymer预混液室温放置不要超过30min。
4. 漩涡混匀各管混合物。
5. 将Xfect mESC Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。
6. 室温孵育10 min，形成复合物。
7. 将200μl复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意: 无需去除培养基中的血清。当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜会有些改变，这是正常
的。
8. 37℃孵育培养板。
9. 3 hr 后，吸走培养基，然后加入2ml新鲜完全生长培养基，放回37℃培养箱继续培养。
10. 每天更换一次培养基，48 hr后检测基因的表达。
* 这是转染用的培养基体积，转染3hr后，使用2倍体积的培养基培养小鼠成纤维细胞。
Xfect siRNA 转染试剂
• 基因敲除效果优于其他竞争产品
• 体系无需优化
• 细胞毒性极低
Xfect siRNA转染试剂操作步骤(24-孔板)：
1.转染前的准备
贴壁细胞: 在转染的前1d，接种500μl细胞，转染当天的细胞融合度需达到90%。
悬浮细胞: 在开始进行混匀Xfect siRNA Polymer的操作前，以5 x 10e5的密度接种500μl 细胞。
2. 漩涡混匀Xfect Polymer。
3. 对于每个孔转染实验，分别在2个离心管混匀以下试剂：
Tube 1 (siRNA)
---μl (30pmol) siRNA
---μl Xfect 反应缓冲液50 μl 总体积T ube 2 (Polymer)
4ul Xfect siRNA Polymer 46 μl Xfect 反应缓冲液50 μl 总体积
4. 漩涡混匀各管混合物。
5. 将Xfect siRNA Polymer预混液和DNA预混液以适中的速度漩涡10sec。
6. 室温孵育20 min形成复合物。
7. 将100μl复合物逐滴加入细胞培养基中，轻柔地前后摇晃混匀。
注意: 无需去除培养基中的血清。当纳米复合物加入培养基后，培养基的颜会有些改变，这是正常的。
8. 37℃孵育培养板。
9. 24-48 hr后检测基因的表达。
Table I：Scaling Xfect siRNA Transfection Up or Down
天和众邦Xfect蛋白转染试剂
• 无需转录和翻译过程，收效快于质粒转染
• 蛋白质瞬时效应研究的理想试剂
• 避免了DNA随机插入基因组造成的潜在危害
Xfect蛋白质转染试剂操作步骤(6-孔板)：
I. 材料
Xfect Protein 转染试剂
Xfect Protein Buffer
无菌去离子水
对照β-半乳糖甘酶
X-gal染试剂盒(Cat. No. 631780)或试剂
II. 操作
A. Xfect Protein储存液的准备
1. 向Xfect protein 转染试剂冻干粉中加入无菌的去离子水来制备存储液:
对于30 rxn试剂盒，需加225 μl无菌的去离子水制备1X Xfect protein存储液，可以满足15次转染实验。
对于100 rxn试剂盒，需加入750 μl无菌的去离子水制备1X Xfect protein存储液，可以满足50次转染实验。
2. 1X Xfect protein存储液在–20°C最多放置6个月，避免反复冻融1X Xfect protein存储液。
B. 转染细胞
贴壁细胞：在转染的前1d，向6-孔板中接种适量的细胞，转染当天细胞融合度需达到
60-80%。
悬浮细胞: 在混匀Xfect protein Polymer前，以1.5 x 10e6的密度接种细胞于6-孔板。1．漩涡混匀Xfect Protein Polymer。
2. 在2个离心管中，分别准备以下试剂：
a.管1：15 μl 1X Xfect Protein存储液+85 μl 去离子水，总体积为100 μl，轻柔漩涡混匀。
b.管2：2–5 μg目的蛋白+Xfect Protein Buffer，总体积为100 μl。轻柔漩涡混匀。
3. 将管2和管1混合，轻柔漩涡混匀。室温孵育30min。
4. 在室温孵育30min时，准备细胞：
贴壁细胞(6-孔板):
a. 吸走培养基，并用预热的PBS清洗细胞一次。
b. 吸走PBS，向细胞培养孔中加入400 μl无血清培养基，轻柔摇晃培养板，让液体覆盖培养板底部。
悬浮细胞(6-孔板):
a. 取1.5 x 10e6个细胞放到灭菌管中，500rpm离心5 min收集细胞。
b. 吸走培养基，并用预热的PBS清洗细胞一次，再次离心收集细胞并弃PBS液体。
c. 使用400 μl 无血清培养基重悬细胞，然后将细胞转入6-孔板单孔中，轻柔摇匀，让培养液覆盖培养板底部。
5. 向细胞培养物中加入200 μl Xfect Protein/蛋白复合物。
6. 37°C孵育60 min。
7. 检测蛋白。
C.对照转染:β-半乳糖甘酶转染细胞
1. 铺板细胞，请参照前面所述。
2. 管1：15 μl 1X Xfect Protein存储液+85 μl去离子水，轻柔漩涡混匀。
3. 管2：2 μgβ-半乳糖甘酶+98ul Xfect Protein Buffer，轻柔漩涡混匀。
3. 管2和管1混合，轻柔漩涡混匀。室温孵育30min。
4. 在室温孵育30min时，准备细胞。
贴壁细胞(6-孔板):
a. 吸走培养基，并用预热的PBS清洗细胞一次。
b. 吸走PBS，向细胞培养孔中加入400 μl无血清培养基，轻柔摇晃培养板，让液体覆盖培养板底部。
悬浮细胞(6-孔板):
a. 取1.5 x 10e6加到灭菌的离心管中，500rpm离心5 min收集细胞。
b. 吸走培养基，并用预热的PBS清洗细胞一次，再次离心收集细胞并弃PBS液体。
c. 使用400 μl 无血清培养基重悬细胞，然后将细胞转入6-孔板单孔中，轻柔摇匀，让培养液覆盖培养板底部。
5. 向细胞中加入200 μl Xfect Protein/β-半乳糖甘酶混合物。
6. 37°C孵育60 min。
7. 对于贴壁细胞，更换完全培养基培养；对于悬浮细胞，加入2倍体积的完全培养基，然后37°C 培养2 hr。
8. 使用X-gal染细胞，检测β-半乳糖甘酶的转染效率，检测试剂盒为β-半乳糖甘酶染检测试剂盒。
631317 Xfect™100 rxns 2,001
631318 Xfect™300 rxns 4,207
631320 Xfect™ mES100 rxns 2,375
631321 Xfect™ Stem 300 rxns 4,991
631323 Xfect™ Protein 30 rxns 3,354
631324 Xfect™ Protein 100 rxns 7,178
631329 Xfect™ Adult Stem Cell100 Rxns 2,376
631331 Xfect™ siRNA 1000 Rxns 2,678
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