转染是将外源性基因导⼊细胞内的⼀种专门技术。分为物理介导⽅法：电穿孔法、显微注射和基因；化学介导⽅法：如经典的磷酸钙共沉淀法、脂质体转染⽅法、和多种阳离⼦物质介导的技术；⽣物介导⽅法：有较为原始的原⽣质体转染，和现在⽐较多见的各种病毒介导的转染技术。理想细胞转染⽅法，应该具有转染效率⾼、细胞毒性⼩等优点。病毒介导的转染技术，是⽬前转染效率最⾼的⽅法，同时具有细胞毒性很低的优势。但是病毒转染⽅法的准备程序复杂，常常对细胞类型有很强的选择性，在⼀般实验室中很难普及。其它物理和化学介导的转染⽅法，则各有其特点。需要指出的⼀点，⽆论采⽤哪种转染技术，要获得最优的转染结果，可能都需要对转染条件进⾏优化。影响转染效率的因素很多，从细胞类型、细胞培养条件和细胞⽣长状态到转染⽅法的操作细节。下⾯列举⼀些影响因素。 选矿学1、⾎清
A、DNA-阳离⼦脂质体复合物形成时不能含⾎清，因为⾎清会影响复合物的形成。
湖南卫生信息网B、⼀般细胞对⽆⾎清培养可以耐受⼏个⼩时没问题，转染⽤的培养液可以含⾎清也可以不加，但⾎清⼀度曾被认为会降低转染效率，转染培养基中加⼊⾎清需要对条件进⾏优化。 C、对于对⾎清缺乏⽐较敏感的细胞，可以使⽤营养丰富的⽆⾎清培养基，或者在转染培养基中使⽤⾎
米奇的甜心屋清。对⾎清缺乏⽐较敏感的贴壁细胞，建议使⽤专⽤转染试剂。有条件的话，可以⽤⽆⾎清培养基代替PBS洗细胞两遍，注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加⼊液体，然后不要吹吸细胞，⽽是转动培养板让液体滚动在细胞表⾯。如果洗的太厉害，细胞⼜损失⼀部分，加了脂质体后，细胞受影响就更⼤了，死亡细胞会增多。
2、抗⽣素(PS)梅机关
抗⽣素，⽐如青霉素和链霉素，是影响转染的培养基添加物。这些抗⽣素⼀般对于真核细胞⽆毒，但阳离⼦脂质体试剂增加了细胞的通透性，使抗⽣素可以进⼊细胞。这降低了细胞的活性，导致转染效率低。所以，在转染培养基中不能使⽤抗⽣素，甚⾄在准备转染前进⾏细胞铺板时也要避免使⽤抗⽣素。这样，在转染前也不必润洗细胞。对于稳定转染，不要在选择性培养基中使⽤青霉素和链霉素，ICIN选择性抗⽣素的竞争性抑制剂。另外，为了保证⽆⾎清培养基中细胞的健康⽣长，使⽤⽐含⾎清培养基更少的抗⽣素量。
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3、细胞状态
这点⾮常重要，不要急于求成，⼀定要让细胞处于最佳的⽣长状态再做。有⽂献说传代不要超过17代。细胞复苏后的3代左右时细胞状态最好，不要⽤传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发⽣变化。⼤多数已建⽴的细胞系都是⾮整倍体，原代培养包括了表达不同基因组合的细胞的混合物。细胞
培养在实验室中保存数⽉和数年后会经历突变，总染⾊体重组或基因调控变化等⽽演化。这会导致和转染相关的细胞⾏为的变化。如果随时间发现这种变化，融化⼀管新鲜的细胞可能会恢复原先的转染活性。因此，如果观察到转染效率降低，可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。或者，⼏种来源于经筛选，转染效率较⾼细胞亚系的细胞系现在有售。
4、细胞铺板密度
⽤于转染的最佳细胞密度根据不同的细胞类型或应⽤⽽异。因转染试剂对细胞有毒害作⽤，细胞太少，容易死。⼀般转染时，贴壁细胞密度为70%-90%，悬浮细胞密度为2-4×106细胞/ml，确保转染时细胞没有长满或处于静⽌期。因为转染效率对细胞密度很敏感，所以在不同实验间保持⼀个基本的传代步骤很重要。铺板细胞数⽬的增加可以增加转染活性和细胞产量。细胞的融合度必须要达到90%才能做。
孙晋芳丈夫江伟光照片5.启动⼦的选择
获得⾼转染活性所需选择的启动⼦依赖于选⽤的细胞系和要表达的蛋⽩。CMV启动⼦在⼤多数细胞类型中可以获得⾼表达活性。同其他启动⼦，如SV40和RSV(劳斯⾁瘤病毒)相⽐，在BHK-21中其活性最⾼。这三种病毒启动⼦在T细胞来源的细胞系，如Jurkat中组成表达⽔平较低。转染后在培养基中加⼊PHA-L和PMA可以激活Jurkat细胞中CMV启动⼦，⽽单PMA就⾜以激活KG1和K562(⼈⾻髓瘤⽩细
胞)中的CMV启动⼦。SV40启动⼦的表达在含有⼤T抗原(存在于COS-1和COS-7)时会提⾼，因为⼤T抗原可以刺激染⾊体外的合成。
6、DNA量
⾼质量的DNA对于进⾏⾼效的转染⾄关重要。转染的质粒⼀定纯度好、浓度⾼、⽆内毒素。浓度不要低于0.35ug/ul。产物表达，48⼩时mRNA表达最⾼；72h蛋⽩表达最⾼。
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