慢病毒包装实验流程介绍

病毒包装实验流程介绍
慢病毒包装流程:
1、载体质粒与系统质粒共转染293T细胞。
2、收集48~72h的细胞上清液。
3、超速离心纯化浓缩。
偶合症4、纯化分装。
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5、滴度检测。
慢病毒包装具体实验步骤如下:
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一、质粒转染
1、转染前,依次准备好转染试剂、Opti-MEM培养基、目的质粒、骨架质粒、EP管。
2、然后,配置质粒和OMEM的混合液。
3、配置转染试剂和OMEM的混合液。
双翅目蠓科4、轻轻混匀,静置5min。
5、将配好的质粒与转染试剂混合后形成转染体系。
6、轻轻混匀,静置20min。
7、从培养箱中取出10cm培养皿,弃去培养液,更换为OMEM培养液。
8、转染,轻轻混匀。
9、在培养皿盖上做好标记,放回培养箱继续培养。
10、转染后6-8h,更换为新鲜的DMEM培养基。
11、转染后次日,显微镜下观察转染效率。
12、转染后48h,收集上清液于干净的50ml离心管中。
13、加入新鲜的DMEM培养基,继续培养。
14、转染后72h,再次收集上清液。
二、浓缩纯化
1、将收集好的上清液离心,弃去细胞碎片。
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2、用0.22μm滤膜过滤,分装到超速离心管中。
3、超速离心。
4、离心结束后,将所收获的病毒颗粒重新悬浮,于4℃冰箱中溶解,过夜。
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5、次日,再次将溶解后的病毒过滤、分装、入库。

本文发布于:2024-09-25 00:38:42,感谢您对本站的认可!

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标签:质粒   病毒   转染
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