转化步骤
1.取5μl的连接产物到1.5ml锋电能源技术有限公司
离心管中，放置于冰盒中，余下连接产物放回4°C冰箱保存。 2.从-70°C冰箱中取出trans-5α感受态细胞转化菌种，迅速放置于冰盒上，在冰上解冻，待到感受态细胞刚刚融化，取50μl加入到盛有连接产物的离心管中。 3.轻柔晃动离心管，冰上放置30 min。
4.在42℃水浴锅中热激45s，立刻放置于冰上2 min。
5.提前将超净台紫外灯打开，杀菌15min。
6.在超净台中往盛有热激过的感受态细胞的离心管中加入500μl LB培养基，高斯扩散模型209转/min,37℃摇床培养一个半小时至离心管中液体呈现雾状。
PEI（聚乙烯亚胺）转染
（对于35mm培养皿而言）
1、待细胞生长24h ，贴壁80%时开始转染；
2、提前30min 37℃ 预热OPTI-MEM培养基；
3、稀释好用于转染的质粒至1ug/ul，一般转染1ug；
4、加入100ul OPTI-MEM于1.5ml 离心管中；
5、加入质粒DNA，混匀；
6、加入PEI（DNA：PEI=1（ug）：2（ul）），立即混匀（一定要马上混匀）；
7、室温静置15min；
8、向离心管中补加opti-MEM至1ml；
9、细胞培养液弃旧液，D.Hanks 洗一遍，加入转染液，稍晃下培养皿使其均匀分布；
10、4h 后，向细胞培养皿中补加1ml 含20%FBS 无PS的培养基；
11、37℃ 5%CO2 培养箱培养24h。
Lipo2000转染
（对于35mm培养皿而言）
1、待细胞生长24h ，贴壁80%时开始转染；
2、提前30min 37℃ 预热OPTI-MEM培养基；
3、稀释好用于转染的质粒至1ug/ul，一般转染1ug；
4、取1个1.5ml离心管，标注为lipo2000，加入200ulOPTI-MEM，及适量lipo2000（DNA：lipo2000=1（ug）：2.5（ul）），室温放置5min（注意：lipo2000加到液面以下，不能加到壁上）；
5、质粒及lipo2000混合，混匀，室温放置20min；
6、追加opti-MEM至1ml；
7、细胞培养液弃旧液，D.Hanks 洗一遍，加入转染液，稍晃下培养皿使其均匀分布；
8、4-6h 后，更换DMEM+10%FBS培养基（不含PS）；
碱裂解法提质粒
1.取检验正确的PCR管对应的试管，提取质粒。ggg
2.将2ml的离心管对应试管编号，将菌液导入2ml离心管中，5000转离心5min瓮安县国土资源局，将上清去掉，留下白菌块。
3.加入重悬液液I（已加入RNA酶），在振荡器上将离心管底部的菌斑震荡重悬混匀，在37°C水浴锅中放置10min魔眼邪神。
4.从水浴锅中取出离心管，加入200ul碱性裂解液II,轻柔颠倒混匀，至菌液清亮。
5.加入350ul个人图书馆的碱性裂解液III，轻柔颠倒混匀。
6.将2ml离心管在冰上，放置10min。
7.预冷冷冻离心机。
8.将离心管放到冷冻离心机里，4°C 13000转/min离心10min。
9.吸取约650ul上清液到新的1.5ml的离心管中，不要吸到蛋白质，加入等体积的异丙醇，轻柔混合均匀后，4°C13000转/min离心15min。
10.离心结束后，在1.5ml离心管底部有微小的白沉淀块。将上清弃掉，离心管控干，加入预冷的75%的酒精，轻轻吹打，直至小沉淀块浮起。继续冷冻离心，4°C13000转/min离心5min。
11.弃去上清，将离心管在室温下晾置20min，至白沉淀块变为无。加入30ul灭菌的超纯水，轻轻吹打混匀。
纯化
以生工试剂盒为例
1、若为切胶，回收胶称重，加入5倍体积溶胶液（B2），50度左右溶胶；
2、若为产物纯化，加入5倍体积B3,；
3、混匀，上柱，soft模式，10000 rpm，1min；
4、弃废液，加入500ul Wash solution（加前看是否已加入无水乙醇），soft模式，10000 rpm，1min；
5、弃废液，加入500ul Wash solution，非soft模式，10000 rpm，2min；
6、换新的1.5ml 离心管，向吸附柱中心滴加适量Elution buffer或水（均匀旋转滴加，确保柱子中心全都覆盖洗脱液），室温静置2-3min，soft，10000rpm，1min；
7、将离心后的液体吸出后重复上柱，室温静置2min，非soft，10000rpm，1min。
12.
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