土司文化hsp90α基因四环素诱导调控表达质粒的构建及功能验证斯帕拉捷
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目的 构建Hsp90α基因的单质粒四环素/强力霉素诱导表达系统，并验证其不同表达量对HepG2肝癌细胞增殖的影响。方法 通过PCR，分别从pRetroX-Tet-On Advanced质粒和pcDNA3.1-EGFP质粒中扩增rtTA表达盒和EGFP基因，依次将rtTA和EGFP基因克隆入pTRE-Tight载体中，pRetroX-Tight载体中，获得EGFP标记的Tet-on单质粒系统。基于本系统，构建DOX诱导的Hsp90α表达质粒pRetroX-Hsp90α-EGFP-Tet-On，然后采用脂质体转染HepG2细胞，以不同浓度（0，100，500，2500 ng/mL）的DOX诱导，通过荧光显微镜、荧光定量PCR以及Western blot检测EGFP和目的蛋白Hsp90α的表达。结果 转染质粒载体后的HepG2细胞经不同浓度的DOX 24 h后，RT-PCR和Western blot结果显示一致，随着DOX浓度的增大，Hsp90α基因表达量逐渐增加，DOX 500 ng/mL时时，基因表达的水平达到高峰；加入DOX 48 h后，细胞的增殖明显高于对照组，且存在剂量依赖性。结论 该研究成功地应用四环素基因表达调控系统调控了Hsp90α基因在HepG2细胞内表达及促肿瘤细胞增殖的功能，为进一步探讨Hsp90α基因与肿瘤的增殖和侵袭之间的关系提供理论基础。资本主义生产方式
标签：四环素；基因表达调控；Hsp90α基因；HepG2细胞校企合作的意义
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基因的过表达和沉默是研究基因功能的重要手段。但是由于某些基因的编码产物在特定的细胞时期对细胞具有毒性或其减少严重影响细胞正常生长甚至导致细胞死亡，给这些基因生物学功能的阐明带来的极大地困难。此外，随着研究的深入，有报道表明某些基因表达水平的不同所引起的生物学表型也截然不同[1-2]。因此，可人工调控表达系统的建立对基因功能的研究将具有非常重要的意义。
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