实验准备：
2×HBS(ul)配方：8g NaCl，0.14g Na2HPO4•2H2O或0.2g Na2HPO4•7H2O，6.5g HEPS，调节pH值7.0， 最终溶于500ml双蒸水中,4℃保存。
2MCacl中央党校2配方：87.6g Cacl2·6H2O溶于200ml双蒸水中，用0.22μm滤器过滤除菌，4℃保存，不可冻牢凝固。
^^^Day 1
昂达vi40精英版1、在转染前24小时，在10cm dish中（面积约为78.5cm2）中铺3.6 x106 293T细胞，于9ml DMEM（hyclone高糖）+10%FBS+PS，待次日细胞汇合度达到70%。
^^^Day 2
2、早上10：00转染，此时转染前无需换液。
3、混合包装质粒和表达质粒如下：
| Use |
pCMV△R | 10(ug) |
PCMV.VSV.G | 10(ug) |
表达质粒 | 20(ug) |
2M CaCl2 靖江市城北小学 | 75 (ul) |
无菌H2O | 适量（ul） |
无菌2×HBS | 600(ul) |
| |
注意：先将各个组分加到离心管中，最后将2×HBS滴加到离心管中，防止局部浓度过高， 混合均匀。
4、将混合好的复合物RT 5min，加入到细胞培养液中。 5、晚上5：00换液，将培养液换成新鲜的6ml DMEM+10%FBS+PS。
^^^Day 3
6、观察24h荧光。
^^^Day 4
7、早上10：00观察48h荧光，此时可以收集病毒，也可以到下午3：00-4：00再收集病毒(高压离心管和EP管)。
Ooo感染细胞
^^^Day 1天原杯化学竞赛辅导
1、感染细胞前，消化目的细胞，此时培养液用1640+10FBS+PS\DMEM +10%FBS+PS，
铺种在6孔板中，1 x105 cell/well，使感染前细胞汇合到20-30%，37℃，5%CO2孵箱过夜。
^^^Day 2
芳烃抽提2、感染时，37℃融化病毒储存液（病毒也需慢冻速溶），弃去细胞培养液，加入1000ul病毒液+1000ul 1640\DMEM+10%FBS+PS+2ul Polybrene (10mg/ml) [Polybrene：培养液=1:1000]。(Polybrene: 聚凝胺,又名为溴化己二甲铵（hexadimethrine bromide），是一种阳离子聚合物。细胞培养中主要用于提高逆转录病毒感染细胞的效率，通过中和细胞表面的唾液酸和病毒粒子之间的电荷排斥实现。聚凝胺在蛋白质测序中也有一定作用。具有可高温高压灭菌特性。用双蒸水配制，－20℃储存，注意分装，反复冻融三次以上将大大降低效果)
3、将细胞放入冶金自动化37℃，5%CO2孵箱，4-5h后换液2Ml 1640\DMEM +10%FBS+PS。过夜。
^^^Day 3
4、早上换2ml新鲜的1640\DMEM +10%FBS+PS。
^^^Day 4
5、晚上观察48h荧光率。（由于慢病毒表达过程比较慢，到48h才能观察到荧光）开始药筛。
6、药筛：用嘌呤霉素（puro）
Puro:储存浓度：10mg\ml(－20度保存)，使用浓度：2ug\ml。
7、药筛48h后观察48h荧光率，之后可以用2ug\ml维持培养一周后改用1ug\ml puro的培养基培养。
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