植物激素的酶联免疫吸附测定法（ELISA）
免疫测定是利用抗原、抗体特异性反应而建立的，根据可视化方法的不同可分为：酶联免疫、放射免疫、荧光免疫、化学发光免疫测定、生物发光免疫测定、浊度免疫测定法等。由于酶联免疫吸附分析法（Enzyme-linked Immunosorbent Assays, 简称ELISA）具有灵敏性、特异性高，且方便、快速、安全、成本低廉的特点，而日益被广泛应用于植物激素测定。目前，几大类植物激素IAA,ABA, GA3、GA4、iPA、ZR、DHZR等都建立了相应的ELISA方法并有试剂盒出售。 植物激素的酶联免疫检测方法有两种形式，一种是在固相载体上包被抗体（直接法），另一种是包被抗原（间接法）。
直接法利用游离抗原和酶标抗原与吸附的抗体进行竞争。间接法利用游离抗原和吸附抗原与游离抗体进行竞争。
间接法的原理可用下式表示：
丹丹调味品
Ab+H+HP=AbH+AbHP
其中Ab表示抗体，H表示游离激素，HP表示吸附在板上的激素－蛋白质复合物。根据质量作用定律，当该反应体系中Ab及HP的量确定时，游离H越多，结合物AbH形成的就越多，而AbHP形成的就越少，即结合在板上的抗体就越少，通过酶标二抗检测结合物AbHP的多少，就可以确定游离H 量的多少。
材料、试剂及设备
1 材料
各种新鲜植物材料
2 仪器设备
研钵，冷冻离心机，台式快速离心浓缩干燥器或氮气吹干装置，酶联免疫分光光度计，吸水纸，恒温箱，冰箱，酶标板（40孔或96孔），可调微量液体加样器（10μl，40μl,200μl,1000μl），带盖瓷盘（内铺湿纱布）。
3 试剂
(1) 磷酸盐缓冲液（PBS）：称取8.0g NaCl, 0.2g KH
2PO
4
, 2.96g Na
2
HPO
4
·12H
2
O，用量筒
加1 000 ml蒸馏水，pH为7.5。
(2) 样品稀释液：500 ml PBS中加0.5 ml Tween-20，0.5g明胶（稍加热溶解）。 (3) 底物缓冲液：称取5.10g C
6H
8
O
7
·H
2
O（柠檬酸）， 18.43g Na
2
HPO
4
·12H
2
O，用量筒加1 000ml
蒸馏水，再加1 ml Tween-20，pH为5.0。
(4) 洗涤液：1000ml PBS加1mlTween-20。
(5) 终止液：2mol/L H
2SO
4
。
人脸识别怎么建模(6) 提取液：80％甲醇，内含1 mmol/L BHT(二叔丁基对甲苯酚，为抗氧化剂，先用甲醇溶解BHT，再配成80%的浓度))。 操作步骤
1．样品中激素的提取一名退休人员返聘后因工死亡待遇的争议
（1）称取0.5-1.0g新鲜植物材料（若取样后材料不能马上测定，用液氮速冻半小时后，保存在-20℃的冰箱中），加2ml样品提取液，在冰浴下研磨成匀浆，转入10ml试管，再用2ml提取液分次
将研钵冲洗干净，一并转入试管中，摇匀后放置在4℃冰箱中。
王庆爽简历（2）4℃下提取4h，3500转/min离心8min, 取上清液。沉淀中加1ml提取液，搅匀，置4℃下再提取1h，离心，合并上清液并记录体积，残渣弃去。
（3）上清液过C-18固相萃取柱。具体步骤是： 80%甲醇（1ml）平衡柱→上样→收集样品→移开样品后用100%甲醇（5ml）洗柱→100%乙醚（5ml）洗柱→100%甲醇（5ml）洗柱→循环。
（4）将过柱后的样品转入5ml塑料离心管中，真空浓缩干燥或用氮气吹干，除去提取液中的甲醇，用样品稀释液定容（一般1g鲜重用2ml左右样品稀释液定容，测定不同激素时还要稀释适当的倍数再加样）。
2．样品测定（本指南所用的量是按一块96孔板计算的）
竞争：即加标准物、待测样和抗体。
加标样及待测样：取适量所给标样稀释配成：ABA的最大浓度为500ng/ml,IAA, ZR标准曲线的最大浓度为100ng/ml,GA的最大浓度为10ng/ml，JA-ME 的最大浓度为200ng/ml。然后再依次2倍稀释8个浓度（包括0ng/ml ）。将系列标准样加入96孔酶标板的前两行，每个浓度加2孔，每孔50μl,其余孔加待测样，每个样品重复两孔，每孔50μl。
加抗体：在5ml样品稀释液中加入一定量的抗体（最适稀释倍数见试剂盒标签,如稀释倍数是1：2000，就要加2.5μl的抗体）,混匀后每孔加50μl，然后将酶标板加入湿盒内开始竞争。
竞争条件37℃左右0.5h。
洗板：将反应液甩干并在报纸上拍净。第一次加入洗涤液后要立即甩掉。然后再接着加第二次。共洗涤四次。
餐饮业食品卫生管理办法加二抗：将适当的酶标二抗，加入10ml样品稀释液中（比如稀释倍数1:1000就加10μl），混匀后，在酶标板每孔加100μl，然后将其放入湿盒内，置37℃下，温育0.5h。
洗板：方法同竞争之后的洗板。
加底物显：称取10-20mg邻苯二胺（OPD）溶于10ml底物缓冲液中（小心勿用手接触OPD），完全
溶解后加4μl 30% H
20
2
。混匀，在每孔中加100μl，然后放入湿盒内，当显适当后（肉眼能看出
标准曲线有颜梯度，且100ng/ml孔颜还较浅），每孔加入50μl 2mol/L硫酸终止反应。
比：在酶联免疫分光光度计上依次测定标准物各浓度和各样品490nm处的OD值。
结果计算：
用于ELISA结果计算最方便的是logit曲线。曲线的横坐标用激素标样各浓度（ng/ml）的自然对数表示，纵坐标用各浓度显值的logit值表示。Logit值的计算方法如下：
B/B
B
Logit（B/B
）=ln———— =ln————
1-B/B
0 B
-B
其中B
是0ng/ml孔的显值，B是其它浓度的显值。
待测样品可根据其显值的logit值从图上查出其所含激素浓度（ng/ml）的自然对数，再经过反对数即可知其激素的浓度（ng/ml）。
求得样品中激素的浓度后，再计算样品中激素的含量（ng/g·fw）。
湿盒（容器内加湿纱布或泡沫塑料）
生产商朗盛产地德国产品名称2，6－二叔丁基对甲苯酚化学结构式分子式C15H24O分子量
220.4g/mol外观白无嗅结晶粉末质量指标熔点68－70℃沸点257－265℃闪点127℃溶解点g/100g 溶剂甲醇16乙醇22.8苯63.9异丙醇20.9甲乙酮67.1水、稀碱液不溶应用－油墨，涂料，胶粘剂，聚胺酯，矿物油，石油化工等产品中－食品用橡胶，塑料产品－食品，饲料，医药中包装25千克/袋储存干燥，阴凉，温度低于50°C以下，保存2年
麦胚凝集素
10ug/l等于5.10ng/ml,ug/l与ng/ml是等同的单位，ug是ng的1000倍，l是ml的1000倍，所以
两个单位是等同的。
100ng/ml
100ug/l
1 ug/ml=1000 ug/l =1000 ng/ml
10 ug/ml=10000 ng/ml
100ng/ml
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