植物内生真菌的分类鉴定方法作者：甘森宁 陆梅颖 肖志邦巴黎协定
来源：《安徽农学通报》2019胜利电视台年第10期 摘 ;要：该文介绍了植物内生真菌分类鉴定的方法，主要包括形态学鉴定和分子生物学鉴定2种方法。 关键词：植物;内生真菌;鉴定
中图分类号 ;S663.9 文献标识码 A 文章编号 1007-7731（2019）10-0036-02
真菌广泛存在于自然界中，且种属繁多，有些菌种形态上并无明显差异，仅靠形态特征或生理、生化指标，很难把握真菌之间的亲缘关系[1]。虽然现代分子生物学技术在真菌分类研究中应用广泛，真菌分类和系统发育研究也取得了很大的进展[2]，但形态学鉴定仍是鉴定真菌的重要参考依据。对真菌进行分类鉴定时，多采用形态学、分子生物学相结合的方法。 1 形态学鉴定
个旧一中校长
传统的真菌分类主要参照魏景超《真菌鉴定手册》[3]，依据真菌形态、理化特性及超微特征等表型特征，进行初步分类工作。目前形态学的鉴定主要使用光学显微镜和扫描电镜2种技术。
1.1 光学显微镜 根据内生真菌在PDA培养基上的培养特征（生长速度、大小、菌落纹饰、质地、边缘）进行分类及去重复，采用透明胶带法粘贴好菌丝，镜检观察真菌分生孢子梗、分生孢子形态及大小等显微特征，参考文献[4]进行内生真菌的初步分类。
1.2 扫描电镜 近年来，越来越多的学者将扫描电镜技术应用于真菌的形态学鉴定中，传统的光学显微镜虽然也能观察到真菌的基本形态，但真菌的表面超微结构必须使用扫描电镜进行观察，在SEM下可清晰地分辨出真菌的菌丝、大分生孢子和小分生孢子[5]。采用插片法培养菌株让其菌丝生长与玻璃片表面，取出玻璃片。首先用2.5%戊二醛在磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.0）中固定样品超过4h，然后洗涤3次。在PBS中用1%（聚醚多元醇W/V）锇酸锇（OsO4）后固定1h，再次洗涤gapdh3次。通过一系列乙醇（50，70，80，90，95和100%）将样品在每个步骤脱水约15～20min，转移到乙醇和乙酸异戊酯的混合物（v︰v=1︰ucdos1）约30min，然后转移到纯的乙酸异戊酯约1h。最终，在样品表面涂覆上金钯，之后用扫描电子显微镜观察。
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