PCR技术的基本原理
PCR(聚合酶链反应)技术是一种用于扩增DNA分子片段的技术,其基本原理是在适当条件下,利用DNA聚合酶和一组合成DNA的核苷酸引物(也称引子),在目标DNA的两个末端往复扩增目标序列。PCR技术具有扩增效率高、敏感度高、选择性强、快速方便等优点,已经成为生物学研究、遗传学、医学诊断等领域中的重要工具。 微电脑世界 PCR技术的基本原理是复制DNA。复制DNA的过程必须要有原来的DNA分子作为模板,使之成为新DNA的模板。引物是扩增特定DNA片段必不可少的组成部分。引物常常被设计为20到30个碱基长的寡核苷酸序列,分别分布在目标序列的两端,即扩增区域的两端。引物的序列必须与目标序列上所选择的区域对应,以确保新合成的DNA具有预期的序列。PCR过程中,引物结合到模板上,DNA聚合酶开始在其中复制模板DNA的两条链。扩增程序一般由三个步骤组成:变性、退火和延伸。
变性
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变性的过程分为多个步骤。首先将反应体系加热至95-96℃,以使模板链上的两条链分
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离,并拉开DNA双链;其次,在低于95℃的温度下对反应体系进行冷却,使两根队列DNA链在退火温度范围内与引物结合;最后提高温度,使DNA聚合酶能够在一定的温度条件下活动。 退火
在这一步之后,引物被使之延伸,以完整复制下来的DNA双链所依赖的步骤。在大于引物匹配温度条件下,引物两端将特异性地结合到模板DNA上。此后DNA聚合酶沿着模板链扩增新DNA不断进行退火和延伸的步骤,形成重合的DNA双链分子。
延伸
生产测井>暗香面具 扩增效率后半部分仅仅如上面那样无限制地继续按照特定的正向或反向方向进行下去。DNA聚合酶在原始双链DNA上进行工作,从引物的3'端末端开始,向5'端方向移动,以将新的寡核苷酸值添加到新合成的DNA上,并在延伸一定的数目后、周期性往复这一过程。这样,初始DNA模板中的目标DNA片段在不断的扩增和复制中,得到快速复制,从而产生大量的目标DNA片段。pitstop