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两株红树林来源链霉菌的鉴定和抗菌活性研究

网络出版时间：２０２０－７－２８１６：５４　网络出版地址：ｈｔｔｐｓ：／／ｋｎｓ．ｃｎｋｉ．ｎｅｔ／ｋｃｍｓ／ｄｅｔａｉｌ／３４．１０８６．Ｒ．２０２００７２８．１５０８．０９２．ｈｔｍｌ

叶景静１，卢覃培２，贾舒涵１，郑红芸１，孙承航２，黄大林１

（１．桂林医学院基础医学院微生物实验室，广西桂林　５４１００４；２．中国医学科学院＆北京协和

医学院医药生物技术研究所微生物化学研究室，北京１

０００５０）ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００１－１９７８．２０２０．０８．０１９

煤炭工业济南设计研究院有限公司文献标志码：Ａ文章编号：１００１－１９７８（２０２０）０８－１１３４－０６中国图书分类号：Ｒ１２４；Ｒ３４２２；Ｒ３７８９９４；Ｒ３７９９；Ｒ９７８１摘要：目的　对分离自广西茅尾海红树林根际土壤的两株链霉菌Ｂ

杨氏模量数据处理

３５３和Ｂ４８６进行鉴定和抗菌活性研究。方法　采用４种培养基分离放线菌，ＩＳＰ２培养基纯化菌株；通过ＰＣＲ扩增和测序获得菌株１６ＳｒＲＮＡ基因序列；采用邻接法（ＮｅｉｇｈｂｏｒＪｏｉｎｉｎｇ）来构建系统进化树；采用纸片扩散法（ＫＢ法）测定其抗菌活性；观察两株链霉菌的形态特征；利用薄层谱法（

ｔｈｉｎｌａｙｅｒｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，ＴＬＣ）对活性物质进行初步研究。结果　经１６ＳｒＲＮＡ基因序列比对发现，菌株Ｂ３５３和Ｂ４８６可能是ＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｓｅｏｕｌｅｎｓｉｓＮＲＲＬＢ２４３１０Ｔ

的两个变种。抗菌活性筛选表明，Ｂ３５３和Ｂ４８６这两株链霉菌对不同的鉴定菌株都有较好的抗菌活性，其中对金黄葡萄球菌的抗菌活性较强。Ｔ

ＬＣ的分析结果表明，链霉菌Ｂ３５３和Ｂ４８６产对金黄葡萄球菌有活性的物质。结论　分离自广西茅尾海红树林根际土壤的放线菌有较强抗菌活性，存在从中发现有着天然活性的新抗生素的潜力。

关键词：放线菌；链霉菌；红树林；茅尾海；抗菌活性；１６ＳｒＲＮＡ

；ＴＬＣ开放科学（资源服务）标识码（ＯＳＩＤ）：

收稿日期：２０２０－０１－１０，修回日期：２０２０－０５－２０

基金项目：国家自然科学基金资助项目（Ｎｏ８１４６０５３７）；广西重点实

验室培育基地建设项目（

Ｎｏ１７２５９７４）作者简介：叶景静（１９９３－），女，硕士生，研究方向：放线菌资源、抗

菌及抗肿瘤物质，Ｅｍａｉｌ：８９３３７０８７６＠ｑｑ．ｃｏｍ；黄大林（１９６４－），男，硕士，教授，硕士生导师，研究方向：放线菌资源及相关代谢产物，通讯作者，Ｅｍａｉｌ：１２１７８０３１７５＠ｑｑ．ｃｏｍ

由于耐药菌的日益泛滥，以肠球菌（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、金黄葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）、克雷伯菌属（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａｓｐｐ．）、不动杆菌属（Ａｃｉｎｅｔｏｂａｃｔｅｒｓｐｐ．）、铜绿假单胞菌（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）和产超广谱β 内酰胺酶的肠杆菌科细菌（ＥＳＢＬｐｒｏｄｕ

ｃｉｎｇＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅ）为主要的ＥＳＫＡＰＥ［１］中国越南冲突

耐药问

题现今给临床上的已经带来了极大困难，所以新型抗生素的研发已经是一个急需解决的问题。

放线菌是我们从自然界里发现抗生素的重要来

源之一［

２］

。人们从微生物次级代谢产物中发现了一大批具有不同化学结构和生物活性的抗生素，如氯霉素、红霉素、利福霉素、庆大霉素和雷帕霉素等。据报道，现有抗生素约三分之二是由放线菌产生

的［３］

。然而，从普通环境中获得新的微生物天然活性产物越来越困难［４］。因此，人们开始将研究的目

光投向特殊环境微生物，如海洋、洞穴、热泉和沙漠等，以期得到新的微生物种类，进而获得新的抗生素

或其他生物活性物质［５］。

红树林因为受到潮水周期性的浸没，具有水分高、耐缺氧、盐分高等特点，是生长在热带、亚热带海

淮海工学院体育部岸潮间带的特殊生态系统，是一种独特的植物落，

该地区有着十分丰富新颖的放线菌微生物资源［６］。

本次实验地点选择了污染少、物种丰富和研究相对周璇

较少的广西茅尾海红树林［７］，发现２株活性较强的

链霉菌，从生物学特征，抗菌活性和系统发育树进行研究，这为发现新抗生素提供了微生物资源。１　材料与方法１．１　材料

１．１．１　样品　２株从广西茅尾海红树林根际土壤

获得的链霉菌。

１．１．２　培养基　①分离用培养基：Ｍ１（高氏一号培养基）：海晶盐３ｇ，可溶性淀粉２０ｇ，ＭｇＳＯ４０５ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４０５ｇ，ＫＮＯ３１ｇ，琼脂１８ｇ，蒸馏水１Ｌ，ｐＨ７２；Ｍ２（高氏二号培养基）：胰蛋白胨３ｇ，葡萄糖１０ｇ，氯化钠５ｇ，蛋白胨５ｇ，复合维生素１ｍＬ，琼脂１８～２０ｇ，蒸馏水１Ｌ，ｐＨ７２；Ｍ３（海藻糖－脯氨酸培养基）：脯氨酸１ｇ，海藻糖５ｇ，（ＮＨ４）２ＳＯ４１ｇ，ＮａＣｌ１ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２

土壤固化剂Ｏ１ｇ，ＣａＣｌ２２ｇ，复合维生素１ｍＬ，琼脂１８～２０ｇ，ｐＨ７２；Ｍ４（棉子糖－组氨酸培养基）：Ｌ组氨酸１ｇ，棉子糖５ｇ，ＫＮＯ３１ｇ，Ｋ２ＨＰＯ４１ｇ，ＮａＣｌ１ｇ，ＣａＣｌ２２ｇ，ＭｇＳＯ４·７Ｈ２Ｏ１ｇ，琼脂２０ｇ，ｐＨ７３～７４。②纯化选用培养基：改良ＩＳＰ２固体培养基。③发酵选用培养基：

·４

３１１·中国药理学通报　ＣｈｉｎｅｓｅＰｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌＢｕｌｌｅｔｉｎ　２０２０Ａｕｇ；３６（８）：１１３４～９

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