櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄櫄
２４（１０）：３５１－３５９．
［１６］向妙莲，付永琦，何永明，等．茉莉酸甲酯浸种对水稻幼苗白叶
枯病抗性及抗氧化酶活性的影响［Ｊ］．中国水稻科学，２０１４，２８（４）：４１９－４２６． ［１７］孙正祥，王瑞霞，周 邁，等．植物诱导抗病性研究进展［Ｊ］．中 国植保导刊，２０１０，３０（１０）：１５－１７．
［１８］王燕荣，王 永，李 杰，等．番茄早疫病病组织浸提液对番茄
早疫病诱导抗性的研究［Ｊ］．内蒙古农业大学学报（自然科学
版），２０２１，４２（１）：１６－２２．
［１９］刘嘉方，王 永，云兴福．ＰＩＡＳ对番茄晚疫病的诱导抗性及叶
片内酶活性的研究［Ｊ］．内蒙古农业大学学报（自然科学版），２０２１，４２（４）：１２－１９．
［２０］高晓敏．西芹浸提液化感物质分离鉴定及其对黄瓜枯萎病诱导
抗性的研究［Ｄ］．呼和浩特：内蒙古农业大学，２０１５．
［２１］田菲菲．菜粉蝶提取物诱导黄瓜对病的抗性及其机理研究
［Ｄ］．保定：河北农业大学，２００７．
冯蓓蓓，邓业成，卢丹丹，等．广西地不容和地枫皮内生真菌对罗汉果土传病原真菌的抑制活性［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（１）：１２３－１２８． ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．０１．０１８
广西地不容和地枫皮内生真菌对罗汉果
土传病原真菌的抑制活性
冯蓓蓓，邓业成，卢丹丹，汤夏安，邓志勇，骆海玉
（广西师范大学生命科学学院，广西桂林５４１００６）
摘要：为了探索更加科学环保的防治罗汉果土传病害的方法，采用平板对峙法测定了３株广西地不容内生真菌和４株地枫皮内生真菌对３种罗汉果病原真菌的抗菌活性，并采用菌丝生长速率法测定７株内生真菌的发酵产物不同萃取组分的抑菌活性。结果表明，
７株内生真菌都具有一定的抗菌活性。６种植物内生真菌［除ＤＦＰ－Ｇ－５（Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｇｌｏｂｏｓｕｍ）外］的发酵液乙酸乙酯萃取物对３种病原真菌的抑制活性较好，有效中浓度（ＥＣ５０）为０．１２０８～２．９１１７ｇ／Ｌ；这６种植物内生真菌的菌丝体甲醇提取物对３种病原真菌的抑制活性一般，ＥＣ５０为０．２７０８～９．１４１３ｇ／Ｌ；４种植物内生菌ＤＢＲ－５（Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａｓｐ．）、ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７（Ｆｕｓａｒｉｕｍｎｅｍａｔｏｐｈｉｌｕｍ）、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液萃余物对３种病原真菌的抑制活性一般，ＥＣ５０为１．４８８１～９．４３１３ｇ／Ｌ。另外广西地不容内生真菌ＤＢＲ－５对病原菌的毒力最高，其发酵液乙酸乙酯萃取物对罗汉果白绢病菌（Ａｔｈｅｌｉａｒｏｌｆｓｉｉ）ＢＪＢ以及菌丝体甲醇提取物对腐皮镰刀菌（Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ）ＧＦＢ－Ｇ１５都具有很强的抑制作用，ＥＣ５０值分别为０．１２０８ｇ／Ｌ和０．２７０８ｇ／Ｌ。上述结果表明，６种植物内生真菌在防治罗汉果土传病害上具有潜在应用价值。
关键词：广西地不容；地枫皮；罗汉果；内生真菌；发酵产物；抑菌活性；土传病害
中图分类号：Ｓ４３５．６７；Ｓ１８２；Ｓ４８２．２＋
９２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２３）０１－０１２３－０６
收稿日期：２０２２－０３－１３
基金项目：广西重点研发计划（编号：桂科ＡＢ１８５００２５）；桂林市重点研发计划（编号：２０１９０２１１－１９）。
作者简介：冯蓓蓓（１９９４—），女，湖北宜昌人，硕士研究生，主要从事天然产物研究。Ｅ－ｍａｉｌ：２６０６６９２７９６＠ｑｑ．ｃｏｍ。
通信作者：邓业成，博士，教授，主要从事天然产物与植物保护研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｄｙｅｃｈｅｎｇ＠１６３．ｃｏｍ。
罗汉果（Ｓｉｒａｉｔｉａｇｒｏｓｖｅｎｏｒｉｉ）是葫芦科罗汉果属
植物的果实，很早就被发现是药食两用的植物［１－２］。罗汉果植株的主要土传病害有根腐病［３－４］、白绢病［５］、青枯病［６］、根结线虫病［７］、芽枯病［８］等。研究
发现，齐整小核菌（ＳｃｌｅｒｏｔｉｕｍｒｏｌｆｓｉｉＳａｃｃ．）是罗汉果白绢病的致病菌，通过侵害罗汉果的茎基部和根
部，使罗汉果茎叶萎蔫，最后枯萎而死［９］
。罗汉果
根腐病的致病菌是镰刀菌根腐类病菌［
１０］
，通过侵染罗汉果根部，使根腐烂，造成植株枯萎死亡。目前，化学防治是最广泛应用的防治方式，但人们越来越注重随之而来的环境、食品等问题，所以研究出更加科学安全的防治方法迫在眉睫。随着技术的发展和人们对杀菌剂要求的日益提高，农业病害的防治提倡采用更加安全、低污染的生物防治，所以植物内生真菌及其产生的抗菌物质成为植物病害防
治相关研究的热门方向［１１］
。植物内生菌是不危害
植物宿主，存在于健康宿主细胞间或细胞内的一大
类未完全开发的微生物［１１－１３］
。
广西地不容（
Ｓｔｅｐｈａｎｉａｋｗａｎｇｓｉｅｎｓｉｓ）是中国特千金藤属植物［１４］，有着广泛的药用价值，比如清
热解毒、消肿去瘀等［
１５］
。目前对广西地不容的杀虫
活性［１６］和抑菌活性［１７］等已有研究报道。地枫皮（Ｉｌｌｉｃｉｕｍｄｉｆｅｎｇｐｉ）为木兰科八角属植物，具有丰富的药用价值，常用于风湿疼痛类疾病的治理，也是跌打损伤药品的主要药物原料［１８］。
笔者所在课题组经过多年研究得出，广西地不容和地枫皮的内生真菌对多种植物病原真菌有抗菌活性
［１９－２２］。基于此，进一步研究２种植物内生真菌对罗汉果３种土传病原真菌的抗菌活性，旨在为其在杀菌剂领域的开发利用提供依据。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
１．１．１ 供试植物内生真菌 广西地不容内生真菌：ＤＢＲ－３、ＤＢＲ－５、ＤＢＲ－１５；地枫皮内生真菌：ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｇ－９、ＤＦＰ－Ｐ－７．１。上述内生真菌均由笔者所在实验室保存并提供的菌种中筛选取得，见表１。
１．１．２ 供试罗汉果病原真菌 ３株罗汉果病原真菌为ＧＦＢ－Ｇ１０、ＧＦＢ－Ｇ１５和ＢＪＢ。上述病原真菌均由笔者所在实验室保存并提供的菌种中筛选取得，见表１。
１．１．３ 供试培养基和发酵液 菌株活化、制作大量培养基。拮抗试验培养基：马铃薯葡萄糖琼脂培养基（ＰＤＡ，含马铃薯２００ｇ、葡萄糖２０ｇ、琼脂２５ｇ、蒸馏水１Ｌ）。液体发酵培养基：马铃薯葡萄糖液体培养基（ＰＤＢ，含马铃薯２００ｇ、葡萄糖２０ｇ、蒸馏水１Ｌ）。
表１ 内生真菌和病原真菌种类
菌株种类菌株编号中文名拉丁名
广西地不容内生真菌ＤＢＲ－３白壳菌Ａｌｂｏｎｅｃｔｒｉａｒｉｇｉｄｉｕｓｃｕｌａ
ＤＢＲ－５黑孢霉属Ｎｉｇｒｏｓｐｏｒａｓｐ．
地枫皮内生真菌ＤＦＰ－Ｇ－５球毛壳菌Ｃｈａｅｔｏｍｉｕｍｇｌｏｂｏｓｕｍ
ＤＦＰ－Ｇ－７镰孢属真菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｎｅｍａｔｏｐｈｉｌｕｍ
ＤＦＰ－Ｇ－９子囊菌纲柱孢属真菌Ｃｙｌｉｎｄｒｏｃａｒｐｏｎｏｌｉｄｕｍ罗汉果病原真菌ＧＦＢ－Ｇ１０尖孢镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｏｘｙｓｐｏｒｕｍ
ＧＦＢ－Ｇ１５腐皮镰刀菌Ｆｕｓａｒｉｕｍｓｏｌａｎｉ
ＢＪＢ罗耳阿太菌Ａｔｈｅｌｉａｒｏｌｆｓｉｉ
１．２ 试验方法
１．２．１ 内生真菌发酵产物制备 所有试验在广西师范大学雁山校区珍稀濒危动植物生态与环境保护省部共建教育部重点实验室开展，时间为２０２１年１—５月。在无菌超净台内活化７种纯化好的植物内生真菌，在ＰＤＡ平板上培养３ｄ后使用。用０．４ｃｍ打孔器在每种内生真菌菌落边缘打
取菌饼。分别放入已准备好的灭菌ＰＤＢ培养基中，每瓶放１５个菌饼。放置于（２７±１）℃恒温培养箱中培３０ｄ，每天振荡３次。
采用液－液萃取法分离出内生真菌发酵液中的粗提物，操作如下：首先，将内生真菌发酵液与之等体积的乙酸乙酯连续萃取３次，将萃取液合并，得到乙酸乙酯层和萃余层。然后，使用旋转蒸发器，分别得到发酵液乙酸乙酯萃取物以及发酵液萃余物的膏体。最后，将分离出的菌丝体烘干、碾碎后，用甲醇浸提［２３］。反复多次浸提直至浸提液无为止，每次浸提时间为２ｄ。通过抽滤把菌丝体与甲醇浸提液分开，使用旋转蒸发仪处理甲醇浸提液得到膏体，即菌丝体甲醇粗提物。１．２．２ 抑菌活性测定
１．２．２．１ 内生真菌对罗汉果病原真菌的拮抗试验 在无菌超净台内使用平板对峙法［２４－２５］完成拮抗试验。操作如下：分别活化７种植物内生真菌和３种植物病原菌，培养３ｄ。在培养皿底面做记号，以培养皿直径画线，以圆心为对称点，２点之间间距３ｃｍ取点，做标记。用直径为０．４ｃｍ的打孔器分别在内生真菌和病原菌的菌落边缘打取菌饼，依次接种于标记的２点，并在培养皿底面写好对应的菌种名称。对照组除不接内生真菌外，其他与试验组相同，且处理组、对照组都做３个重复。于恒温箱（２７±１℃）中培养１～９ｄ，同时每天观察菌丝生长速度、边缘菌丝是否变形、抑菌带是否产生等。测量每个菌落的半径，按照下面公式计算得出抑制率：抑制率＝（对照组菌落半径－处理组菌落短半径）／对照组菌落半径×１００％。
１．２．２．２ 发酵产物对罗汉果病原真菌菌丝生长的抑制活性测定 在无菌工作台中操作，使用菌丝生长速率法［２６］完成活性的测定。首先将７株内生真菌的发酵液乙酸乙酯萃取物膏体、发酵液萃余物膏
体及菌丝体粗提物膏体配制成质量浓度分别为２０、１００、１００ｇ／Ｌ的药液，溶剂为丙酮，然后活化内生真菌和植物病原菌３ｄ。在９ｃｍ直径的培养皿中同时加入１ｍＬ药液（对照组药液用丙酮代替，其他与处理组相同）与９ｍＬ热熔的ＰＤＡ培养基，轻微晃动使其混合均匀，制成带药培养基（质量浓度分别为：２、１０、１０ｇ／Ｌ）。用直径为０．４ｃｍ的打孔器分别在３种罗汉果病原真菌的菌落边缘打取菌饼。菌饼贴于之前做好的已凝固带药培养基上，且菌饼成“品”字排列［白绢病菌病原菌（ＢＪＢ）的对照组除外，由于ＢＪＢ生长速度过快，因此ＢＪＢ的对照组每皿只接１个菌饼］，在恒温培养箱（２７±１℃）中培养３ｄ。ＢＪＢ的对照组重复３次。使用十字交叉法
［２７］
测量
每个菌落的直径，按照下面公式计算得出抑制率：
抑制率＝（对照组菌落直径－处理组菌落直径）／（对照组菌落直径－０．４）×１００％。
配制一系列质量浓度的带药培养基，计算得出各个质量浓度的抑菌率。用最小二乘法求出毒力回归方程、相关系数（ｒ）、有效中浓度（ＥＣ５０）及ＥＣ５０的９５％置信限。２ 结果与分析
２．１ 植物内生真菌对罗汉果病原菌的拮抗活性
由表２可知，７种植物内生真菌对３种罗汉果病原真菌有不同程度的抑制效果。其中ＤＢＲ－１５对ＧＦＢ－Ｇ１０和ＧＦＢ－Ｇ１５的拮抗作用最大，抑制率达到６
０．００％～７０．７７％。ＤＦＰ－Ｇ－９对ＧＦＢ－Ｇ１０的拮抗作用最小，抑制率只有２．８６％。
表２ ７株内生真菌对３种罗汉果病原真菌的拮抗活性内生真菌抑制率（％）
ＧＦＢ－Ｇ１０ＧＦＢ－Ｇ１５ＢＪＢＤＢＲ－３９．２３±７．０５２６．１５±４．６２９．２０±３．５９ＤＢＲ－５１８．４６±９．６１２１．５４±９．２３１３．７９±３．４５ＤＢＲ－１５７０．７７±７．０５６０．００±２．６６４１．３８±６．９０ＤＦＰ－Ｇ－５４４．２９±４．２９５５．３８±４．６２３９．６６±１．７２ＤＦＰ－Ｇ－７１４．２９±８．５７１１．５９±２．５１２８．７４±３．５９ＤＦＰ－Ｇ－９２．８６±２．４７１０．１４±６．６４３５．６３±１．９９ＤＦＰ－Ｐ－７．１
５０．００±６．５５
５０．７２±５．０２
山坡羊潼关怀古赏析４８．８５±２．６３
２．２ 植物内生真菌发酵产物对罗汉果病原真菌的抑制活性
２．２．１ ２ｇ／Ｌ植物内生真菌发酵液乙酸乙酯萃取物对罗汉果病原真菌的抑制活性 如表３所示，６种植物内生真菌ＤＢＲ－３、ＤＢＲ－５、ＤＢＲ－１５、
ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｇ－９、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液乙酸乙酯萃取物对３种病原菌抑菌活性好（除ＤＢＲ－１５对ＧＦＢ－Ｇ１０的抑菌活性一般），抑制率均大于５０％。ＤＦＰ－Ｇ－５发酵液乙酸乙酯萃取物抑菌活性差，抑制率均小５０％。根据此结果，接下来研究２种罗汉果内生真菌（ＤＢＲ－３、ＤＢＲ－５）、３种地枫皮内生真菌（ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｇ－９、ＤＦＰ－Ｐ－７．１）的发酵液乙酸乙酯萃取物对３种罗汉果病原真菌的毒力和ＤＢＲ－１５的发酵液乙酸乙酯萃取物对ＧＦＢ－Ｇ１５、ＢＪＢ的毒力。
表３ ７株内生真菌发酵液乙酸乙酯萃取物对３种罗汉果
病原真菌菌丝的抑制活性
非晶硅
内生真菌抑制率（
％）ＧＦＢ－Ｇ１０ＧＦＢ－Ｇ１５ＢＪＢＤＢＲ－３６８．９４±２．１５７０．６２±０．９８６９．６４±１．７９ＤＢＲ－５１００．００±０．００８３．０５±３．３９１００．００±０．００ＤＢＲ－１５３８．５１±３．２３７１．１９±４．４８１００．００±０．００ＤＦＰ－Ｇ－５８．０７±２．１５１６．３８±１．９６３８．９９±１．０３ＤＦＰ－Ｇ－７８６．４５±１．９４５６．２１±１．１３１００．００±０．００ＤＦＰ－Ｇ－９５８．０６±１．１２７２．５５±３．９２９３．６３±４．３１ＤＦＰ－Ｐ－７．１
７７．４２±１．１２
７３．２０±１．１３
１００．００±０．０
０２．２．２ １０ｇ／Ｌ植物内生真菌发酵液萃余物对罗汉果病原真菌的抑制活性 如表４所示，４种植物内生真菌ＤＢＲ－５、ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液萃余物对ＢＪＢ的抑菌活性好，抑制率均大于５０％。其他植物内生真菌的发酵液萃余物对罗汉果病原真菌抑菌活性差，抑制率均小于５０％。得出结论，这７种植物内生真菌的发酵液萃余物对３种罗汉
果病原真菌几乎没有抑制活性。可以确定，抑菌物质主要存在于这７种植物内生真菌的发酵液乙酸乙酯萃取物中。根据此结果，接下来研究４种内生真菌Ｄ
ＢＲ－５、ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液萃余物对ＢＪＢ的毒力。
表４ ７株内生真菌发酵液萃余物对３种罗汉果脚印中国
病原真菌菌丝的抑制活性Win2k
内生真菌抑制率（％）
ＧＦＢ－Ｇ１０ＧＦＢ－Ｇ１５ＢＪＢＤＢＲ－３１１．７６±８．０９１８．６０±１．０１４５．０３±１．１５ＤＢＲ－５１９．４１±７．１３４５．０６±１．０７６３．９１±３．１２ＤＢＲ－１５２．３５±２．０４２３．２６±３．４９４１．７２±３．０３ＤＦＰ－Ｇ－５１８．２４±１１．７５３０．８１±１０．２２５３．８２±３．０７ＤＦＰ－Ｇ－７３．７３±５．９９５．４７±０．６０５３．１８±２．５３ＤＦＰ－Ｇ－９６．４７±６．３６
１．１６±６．６０
４５．３６±６．９５ＤＦＰ－Ｐ－７．１
－
－
１００．００±０．００
２．２．３ １０ｇ／Ｌ植物内生真菌菌丝体甲醇提取物对罗汉果病原真菌的抑制活性 如表５所示，ＤＢＲ－５的菌丝体甲醇粗提物对３种病原菌的抑菌活性较好，抑菌率均大于７０％。ＤＢＲ－１５、ＤＦＰ－Ｇ－９的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１０、ＢＪＢ的抑菌活性好，抑菌率均大于５０％。ＤＦＰ－Ｐ－７．１的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１５、ＢＪＢ菌丝的抑菌活性好，抑菌率均大于５０％。ＤＢＲ－３的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１５的抑菌活性好。ＤＦＰ－Ｇ－７的菌丝体甲醇粗提物对ＢＪＢ的抑菌活性好。ＤＦＰ－Ｇ－５菌丝体甲醇提取物抑菌活性差，抑菌率均小于５０％。根据此结果，接下来研究ＤＢＲ－５的菌丝体甲醇提取物对３种罗汉果病原真菌的毒力，ＤＢＲ－１５、ＤＦＰ－Ｇ－９的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１０、ＢＪＢ的毒力，ＤＦＰ－Ｐ－７．１的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１５、ＢＪＢ的毒力，ＤＢＲ－３的菌丝体甲醇粗提物对ＧＦＢ－Ｇ１５的毒力，ＤＦＰ－Ｇ－７的菌丝体甲醇粗提物对ＢＪＢ的毒力。
２．３ 广西地不容内生真菌发酵产物对罗汉果病原真菌的毒力
为进一步确定广西地不容内生真菌发酵产物的抑菌效果，根据上文抑菌活性测定结果，选取３株地不容内生真菌ＤＢＲ－３、ＤＢＲ－５、ＤＢＲ－１５的发酵液乙酸乙酯萃取物、发酵液萃余物、菌丝体甲醇提取物对罗汉果原真菌抑菌率达到５０％以上的相应病原菌作为供试菌株，进一步测定其对供试菌株
表５ ７株内生真菌菌丝体甲醇提取物对３种植物
病原真菌菌丝的抑制活性
内生真菌
抑制率（％）
ＧＦＢ－Ｇ１０ＧＦＢ－Ｇ１５ＢＪＢ
ＤＢＲ－３４７．５４±４．９２５４．６０±８．７０３２．０３±５．０５ＤＢＲ－５７９．７８±３．４１７１．１７±２．８１１００．００±０．００ＤＢＲ－１５５４．１０±１．６４４２．９４±３．１９６８．０２±８．２９ＤＦＰ－Ｇ－５３７．８７±３．０７４３．２１±７．０１４５．７５±３．５６ＤＦＰ－Ｇ－７１３．６１±７．１７３０．２５±８．７５７４．５２±４．３１ＤＦＰ－Ｇ－９５７．４２±１．９４４１．３６±７．４８７２．９３±３．０７ＤＦＰ－Ｐ－７．１３
３．１４±６．７２５０．９３±１．０８５１．２７±３．４４菌丝的毒力，结果见表６。３种病原菌中，ＤＢＲ－３的发酵液乙酸乙酯萃取物对ＧＦＢ－Ｇ１０的毒力最
高，ＥＣ
５０
为０．３３４０ｇ／Ｌ；对ＢＪＢ的毒力最低，ＥＣ
５０
为１ ０６４５ｇ／Ｌ。ＤＢＲ－５的发酵液乙酸乙酯萃取物对
ＢＪＢ的毒力最高，ＥＣ
５０
为０．１２０８ｇ／Ｌ；对ＧＦＢ－Ｇ１０
的毒力最低，ＥＣ
５０
为０．３７９９ｇ／Ｌ。ＤＢＲ－１５发酵液乙酸乙酯萃取物对ＢＪＢ的毒力比对ＧＦＢ－Ｇ１５的毒力高。ＤＢＲ－５的菌丝体甲醇提取物对ＧＦＢ－Ｇ１５
的毒力最高，ＥＣ
５０
为０．２７０８ｇ／Ｌ；对ＧＦＢ－Ｇ１０的
毒力最低，ＥＣ
５０
为０．９５７８ｇ／Ｌ。ＤＢＲ－１５的菌丝体甲醇提取物对ＢＪＢ的毒力比对ＧＦＢ－Ｇ１０的毒力高。
２．４ 地枫皮内生真菌发酵产物对罗汉果病原真菌的毒力
为进一步确定地枫皮内生真菌发酵产物对３种罗汉果病原真菌菌丝生长的抑制活性，根据上文抑
表６ 广西地不容内生真菌发酵产物对３种罗汉果病原真菌的毒力
内生真菌发酵产物病原菌毒力回归方程相关系数
（ｒ）
ＥＣ５０（９５％置信限）
（ｇ／Ｌ）
ＤＢＲ－３乙酸乙酯萃取物ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝５．３６５４＋０．７７９９ｘ０．９７１５０．３３４０（０．２２８８～０．４５１２）
ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝５．３４８４＋０．７５１０ｘ０．９８７２０．３４３６（０．２１０４～０．４７６８）
ＢＪＢｙ＝４．９２６１＋２．７２３５ｘ０．９７４０１．０６４５（０．６９６４～１．４３２７）菌丝体甲醇提取物ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝３．８７５４＋１．２６４２ｘ０．９８９３７．７５５５（４．６０５９～１０．９０５２）ＤＢＲ－５乙酸乙酯萃取物ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝５．５５２９＋１．３１５６ｘ０．９９８７０．３７９９（０．２６８１～０．４９１８）
ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝５．６０８０＋１．０６２６ｘ０．９９６６０．２６７８（０．１４５０～０．３９０６）
ＢＪＢｙ＝５．６４０９＋０．６９８１ｘ０．９７７００．１２０８（０．０８２５～０．１５９１）发酵液萃余物ＢＪＢｙ＝４．５９３７＋２．３５３６ｘ０．９８７９１．４８８１（０．８８５９～２．０９０３）
菌丝体甲醇提取物ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝５．０１４９＋０．７９３６ｘ０．９８８９０．９５７８（０．６１６８～１．２９８７）
ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝５．１９８６＋０．３５０１ｘ０．９７３８０．２７０８（０．１５２２～０．３８９５）
ＢＪＢｙ＝５．１３５５＋０．３２５６ｘ０．９９９２０．３８３６（０．２０３５～０．５６３７）ＤＢＲ－Ｇ１５乙酸乙酯萃取物ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝５．３４９８＋０．６５６６ｘ０．９８０３０．２９３３（０．１６７４～０．４１９２）
ＢＪＢｙ＝５．７６２５＋０．９７９６ｘ０．９９９５０．１６６６（０．１１８４～０．２１４８）菌丝体甲醇提取物ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝３．８３９０＋１．２０８２ｘ０．９８１９９．１４１３（４．９９９０～１３．２８３６）
ＢＪＢｙ＝３．４２７５＋１．９０９３ｘ０．９７８３６．６６１６（３．７０５９～９．６１７２）
菌活性测定结果，选取４株地不容内生真菌ＤＦＰ－Ｇ－５、ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｇ－９、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液乙酸乙酯萃取物、发酵液萃余物、菌丝体甲醇提取物对罗汉果原真菌抑菌率达到５
０％以上的相应病原菌作为供试菌株，进一步测定其对供试菌株菌丝的毒力，结果见表７。３种病原菌中，ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液乙酸乙酯萃取物对ＢＪＢ的毒力最高，ＥＣ５０分别为０
．１７２４、０．１８６１ｇ／Ｌ；对ＧＦＢ－Ｇ１５的毒力最低，ＥＣ５０分别为２．９１１７、０．８７８９ｇ／Ｌ。ＤＦＰ－Ｇ－９的发酵液乙酸乙酯萃取物对ＢＪＢ的毒力最高，ＥＣ５０为０．４２６９ｇ／Ｌ；对ＧＦＢ－Ｇ１０的毒力最低，ＥＣ５０为１．５４５４ｇ／Ｌ。ＤＦＰ－Ｇ－９菌丝体甲醇提取物对ＢＪＢ的毒力比对ＧＦＢ－Ｇ１０的毒力高。ＤＦＰ－Ｐ－７．１菌丝体甲醇提取物对ＢＪＢ的毒力比对ＧＦＢ－Ｇ１５的毒力高。
表７ 地枫皮内生真菌发酵产物对３种罗汉果病原真菌的毒力
内生真菌发酵产物病原菌毒力回归方程相关系数
（ｒ）ＥＣ５０
（９５％置信限）（ｇ／Ｌ）ＤＦＰ－Ｇ－５发酵液萃余物ＢＪＢｙ＝３．６１０２＋１．５７６９ｘ０．９８４４７．６０９８（４．５３１０～１０．６８８６）ＤＦＰ－Ｇ－７
乙酸乙酯萃取物
ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝５．１０４９＋１．８５３８ｘ０．９６１６０．８７７８（０．６２９１～１．１２６６）ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝４．１４０８＋１．８５１２ｘ０．９８２０２．９１１７（１．７５８６～４．０６４８）ＢＪＢ
ｙ＝６．４０３６＋１．８３８３ｘ０．９３２５０．１７２４（０．１０４３～０．２４０５）发酵液萃余物ＢＪＢｙ＝４．０７１３＋０．９５３０ｘ０．９８７４９．４３１３（５．０８５４～１３．７７７３）菌丝体甲醇提取物
ＢＪＢｙ＝５．１０５８＋０．５５４６ｘ０．９９６７０．６４４４（０．３６３８～０．９２５０）ＤＦＰ－Ｇ－９
乙酸乙酯萃取物
ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝４．９１６３＋０．４４２６ｘ０．９９３０１．５４５４（１．１１５６～１．９７５２）ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝４．９７８６＋１．０２３２ｘ０．９７００１．０４９３（０
．７７４９～１．３２３８）ＢＪＢ
ｙ＝５．４９７０＋１．３４４５ｘ０．９２４１０．４２６９（０．２８１２～０．５７２６）菌丝体甲醇提取物
ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝４．４６５０＋０．６５９８ｘ０．９８３５６．４６８８（４．１７７６～８．７６００）ＢＪＢ
ｙ＝５．０７２０＋０．５２２７ｘ０．９９５２０．７２８２（０．４３０８～１．０２５７）ＤＦＰ－Ｐ－７．１
乙酸乙酯萃取物
ＧＦＢ－Ｇ１０ｙ＝５．２９６４＋１．４８９１ｘ０．９５３１０．６３２４（０．４４４０～０．８２０８）ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝５．１３５９＋２．４２３４ｘ０．９５０８０．８７８９（０．５９３３～１．１６４４）ＢＪＢ
ｙ＝７．０５５０＋２．８１３８ｘ０．９９９５０．１８６１（０．１１４１～０．２５８１）发酵液萃余物ＢＪＢｙ＝４．０６９９＋２．１５６３ｘ０．９８２１２．７０００（１．７８２３～３．６１７７）菌丝体甲醇提取物
ＧＦＢ－Ｇ１５ｙ＝４．０６４４＋１．００１６ｘ０．９８８６８．５９１５（５．０３６４～１２．１４６６）ＢＪＢ
ｙ＝４．４１７３＋０．８０８１ｘ
０．９８５８
５．２６１０（２．６６７１～７．８５５０）
３ 讨论与结论
目前对地枫皮内生真菌的研究较少，已知地枫
皮的根、茎、叶中具有大量的内生真菌［２８］
，其中一些
杨淑荣内生真菌对植物病原菌和动物病原菌有较为广泛的抑菌性，所以研究广西特植物地枫皮的有利于抗菌植株的培养和生物抗菌剂的研发。
ms-dos目前对广西地不容内生真菌的研究已初具规模，研究发现其块茎中有多种内生真菌具有很强的
抗菌性且有较强的普适性［
２９］
。现已有以广西地不容为原料的生物杀菌剂研发。
随着罗汉果种植的加大，如何防治罗汉果土传病害成为当务之急。目前大多用化学防治，但是随后带来的环境污染不可忽略。所以对罗汉果土传病害的生物杀菌剂的研发迫在眉睫。
在拮抗试验中供试广西地不容和地枫皮内生
真菌对３种罗汉果病原真菌有抑制活性普遍偏低。为了节省时间，减少不必要的步骤，先要初步判断７种植物内生真菌对３种病原真菌是否有抑菌活性，所以采用了平板对峙法。但拮抗试验中抑制效果不好的菌株并不能说明其没有抑菌活性，可能是本试验方法的局限性造成的，比如由于培养时间太短，抑菌物质尚未产生等。所以应该进一步测定内生真菌发酵产物对病原真菌的抑制活性，从而筛选优良的抑菌菌株。
有大量的研究证明，植物内生菌发酵产物的乙
酸乙酯萃取物有广泛的抑菌活性［
２７－２９］
。本试验结果也显示，６种植物内生真菌ＤＢＲ－３、ＤＢＲ－５、ＤＢＲ－１５、ＤＦＰ－Ｇ－７、ＤＦＰ－Ｇ－９、ＤＦＰ－Ｐ－７．１的发酵液乙酸乙酯萃取物具有很好的抑菌活性，在质量浓度为２ｇ／Ｌ时，其对３种罗汉果病原真菌ＢＪＢ、ＧＦＢ－Ｇ１０、ＧＦＢ－Ｇ１５的抑制率均在５０％以上（除
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议