替加环素对不同耐药基因型耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌的敏感性研究

刘立荣;李向阳;瞿玲娜;唐玉霞;曹景宏;颜小萍

【摘要】目的：探讨替加环素对不同耐药基因型耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（CRE）的敏感性。方法采用改良Hodge试验（MHT）筛查厄它培南耐药的肠杆菌科细菌，采用纸片扩散法检测替加环素的抑菌环直径，采用聚合酶链反应（PCR）测定CRE的β-内酰胺酶基因种类。结果68株CRE中有48株（70.6%）MHT初筛阳性，其中40株（83.3%）携带能水解碳青霉烯类抗菌药物的超广谱β-内酰胺酶基因（KPC、NDM-1、IMP-8、IMP-4，以KPC为最多，占67.5%）。68株菌株中有54株对替加环素敏感，12株中介，2株耐药，总敏感性为97%。MHT筛查试验阳性和阴性菌株对替加环素的敏感性差异无统计学意义（χ2=3.599，P>0.05）。结论替加环素对CRE显示出优异的抗菌活性，其抗菌作用不受β-内酰胺酶的影响。%ObjectiveTo investigate the sensitivity of carbapenem-resistantEnterobacteriaceae(CRE)with different resistant genotypes against tigecycline.MethodsThe isolates ofEnterobacteriaceae against ertapenem were screened by modified Hodge test(MHT),the diameters of tigecycline inhibition zones were determined

by K-B method, and beta-lactamase gene of CRE was determined by polymerase chain reaction(PCR).ResultsA total of 68 isolates of CRE were screened by MHT,and there were 48 positive isolates,accounting for 70.6%. In the 48 positive isolates, there were 40 isolates(83.3%) carrying hydrolyzed carbapenem antibiotics extended-spectrum beta-lactamase gene, includingKPC,NDM-1,IMP-8 andIMP-4.KPC was the most,accounting for 67.5%. In the 68 isolates of CRE,54 isolates were sensitive,12 isolates were intermediary,2 isolates were resistant,and the total sensitivity was 97%. There was no statistical significance for the sensitivity of positive and negative isolates in the 68 isolates of CRE by MHT(χ2=3.599,P>0.05).ConclusionsTigecycline for CRE exhibits excellent antibacterial activity. Antibacterial effect of tigecycline is not influenced by enzyme activity.

【期刊名称】《检验医学》

【年(卷),期】2016(031)005

【总页数】4页(P383-386)中医可以哪些男科疾病

生态系统的稳定性【关键词】耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌;替加环素;敏感性

【作者】刘立荣;李向阳;瞿玲娜;唐玉霞;曹景宏;颜小萍

【作者单位】台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;温州医科大学附属第二医院检验科，浙江温州 325027;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523;台州市中西医结合医院检验科，浙江台州 317523

【正文语种】中文

【中图分类】R378.2

近年来，产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科细菌所占的感染比例逐年增高［1］。由于碳青霉烯类药物在临床大量使用，导致耐碳青霉烯类肠杆菌科细菌（carbapenem-resistant Enterobacteriaceae，CRE）成为医院感染的重要病原菌［2］，给临床的抗感染带来极大困难。替加环素是新一代甘氨酰环素类抗菌药物，其作用机制是通过与核糖体30S亚基结合，抑制蛋白质的合成［3］。体外药物敏感性试验结果表明替加环素对万古霉素耐药肠球菌、青霉素耐药肺炎链球菌、甲氧西林耐药葡萄球菌以及多数革兰阴性杆菌的抗菌效

果良好［4］。替加环素也是目前少数对CRE有抗菌活性的抗菌药物之一［5］。我们采用改良Hodge试验（modified Hodge test，MHT）筛查厄它培南耐药的肠杆菌科细菌，分析替加环素对CRE的体外药物敏感性以及CRE的β-内酰胺酶基因种类，为替加环素的临床使用提供实验室依据。

一、CRE来源

选取台州市中西医结合医院分离的68株CRE，包括25株肺炎克雷伯菌、14株大肠埃希菌、16株阴沟肠杆菌、10株产气肠杆菌、2株黏质沙雷菌、1株产酸克雷伯菌。每例患者只收集1次菌株，以保证菌株的不重复性。按照美国临床实验室标准化协会（the Clinical and Laboratory Standards Institute，CLSI） M100-S24文件中的折点判定标准：亚胺培南MIC≥2.0 mg/L或美罗培南MIC≥2.0 mg/L，厄它培南MIC≥0.5 mg /L，判定为CRE。质控菌株为大肠埃希菌（ATCC 25922）。培养基为M-H琼脂（美国Oxoid公司），替加环素纸片（15 μg，美国Oxoid公司）光电吊舱

二、方法

1.筛查试验采用MHT筛查CRE，结果判断标准及操作方法参照CLSI M100-S24文件［6］。阴性对照为大肠埃希菌（ATCC 25922）；阳性对照为经基因确定产KPC-2酶的肺炎克雷伯菌。

2.纸片扩散法参照《新型甘氨酰环素类抗菌药物替加环素的体外药敏试验的操作规程》（2009年）和《替加环素体外药敏试验操作规程专家共识》［7］的方法及折点判定标准：抑菌环直径≥16 mm为敏感（S），≤12 mm为耐药（R），13～15 mm为中介（I）。

3.β-内酰胺酶基因测定使用BioFlux细菌全基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA，A260nm/A280nm比值为1.8～2.0，浓度稀释至20 ng/μL。聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）引物由上海桑尼公司合成。阳性扩增产物送北京六合华大公司测序。采用PCR扩增碳青霉烯酶和ESBL基因，均进行30个循环。相关引物见表1。

三、统计学方法

采用SPSS 18.0软件进行统计分析。计量资料采用s表示，组间比较用t检验；计数资料采用率表示，组间比较用χ2检验；等级资料采用秩和检验（Wilcoxon两样本比较法）。以P＜0.05为差异有统计学意义。

一、 MHT筛查

68株CRE中有48株（70.6%）MHT初筛阳性，20株（29.4%）阴性。

二、68株CRE对替加环素的敏感性

68株菌株中敏感54株、中介12株、耐药2株，总敏感率为97%。MHT阳性和阴性菌株对替加环素的敏感性差异无统计学意义（χ2=3.599，P＞0.05）。见表2。

爱英优选甲氨基阿维菌素三、48株MHT阳性菌株超广谱β-内酰胺酶基因及测序结果

48株MHT阳性菌株中有40株（83.3%）检出携带能水解碳青霉烯类抗菌药物的超广谱β-内酰胺酶基因，其中KPC 27株（67.5%）、NDM-1 8株（20.0%）、IMP-4 4株（10.0%）、IMP-8 1株（2.5%）。除2株菌株外，其余携带不同超广谱β-内酰胺酶基因的菌株均对替加环素高度敏感。见表3。

由于抗菌药物广泛且不规范使用，临床抗菌药物的耐药状况日趋严峻，尤其是CRE的出现，已成为临床抗感染面临的严峻挑战，严重影响患者的。CRE对目前临床上用

于革兰阴性杆菌感染的碳青霉烯类抗菌药物不敏感，导致临床在此类细菌感染时处于“无药可用”的艰难境地［8］。CRE主要以产气肠杆菌、阴沟肠杆菌、大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌为主，而且阴沟肠杆菌的分离率逐年增加［9］。本研究68株CRE中肺炎克雷伯菌25株、大肠埃希菌14株、阴沟肠杆菌16株、产气肠杆菌10株、黏质沙雷菌2株、产酸克雷伯菌1株，与文献报道［9］一致。

CRE对碳青霉烯类抗菌药物的耐药机制主要有2类：一类是有编码水解碳青霉烯类抗菌药物的碳青霉烯酶基因；另一类是由于膜孔蛋白表达量或结合蛋白缺少而降低对抗菌药物的摄取，合并有水解碳青霉烯类抗菌药物的β-内酰胺酶的表达［10-17］。CRE分离出的碳青霉烯酶属于Ambler分类的A、B及D类内酰胺酶。其中，属于A类的KPC酶是最具有临床意义的β-内酰胺酶。超广谱β-内酰胺酶主要由肠杆菌科中的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌产生。按照其质粒上的编码基因同源性产生的差异，主要包括TEM、SHV和非TEM非SHV 3种类型，其中CTX-M型酶是非TEM非SHV中广泛流行的酶类。检测CTX-M 型酶的阳性率是实现超广谱β-内酰胺酶检测的重要途径。因此，本研究采用PCR扩增bla（CTX-M）片段的方法检测CRE产超广谱β-内酰胺酶的情况。

替加环素是一种半合成的四环素类抗菌药物，是通过在米诺环素9位分子上添加叔丁基甘氨酞胺基团而衍生的一种新型抗菌药物［18］，克服了主动外排tet（A-E）以及获得性的核糖体保护tet（M）2个主要的耐药机制。因此，细菌对替加环素产生耐药性的几率较小。只有当细菌发生突变时才有可能对替加环素产生耐药。替加环素对多重耐药的革兰阴性杆菌抗菌效果良好，是一种高效的广谱抗菌药物［19］。替加环素的作用机制主要是通过结合细菌30S核糖体，阻碍转运RNA进入，导致氨基酸无法进行肽链的合成，达到阻碍合成细菌蛋白、抑制细菌生长的目的。其可用于复杂性皮肤和皮肤软组织感染、复杂性腹腔内感染、社区获得性细菌性肺炎等［20］。

本研究68株CRE均对碳青霉烯类抗菌药物耐药，有48株（70.6%）MHT阳性，其中40株（83.3%）携带有能水解碳青霉烯类抗菌药物的超广谱β-内酰胺酶基因，包括KPC、NDM-1、IMP-4、IMP-8，这些耐药基因产生的酶可对多种抗菌药物产生耐药，其中KPC最多（67.5%），表明产KPC碳青霉烯酶是肠杆菌科细菌对碳青霉烯类抗菌药物的主要耐药机制之一。由于产KPC碳青霉烯酶的菌株对碳青霉烯类抗菌药物耐药的同时还对多种抗菌药物耐药，并可通过质粒进行耐药基因的传递，因此其质粒上还可能存在多种β-内酰胺酶基因，如超广谱β-内酰胺酶基因和AmpC基因，导致细菌多重耐药。

综上所述，替加环素对CRE有较好的体外抗菌活性，其体外敏感性较高，是除多黏菌素以外最有效的抗菌药物。MHT阳性和阴性菌株对替加环素的敏感性无差异，提示替加环素的抗菌作用不受产酶的影响。本研究中出现的2株替加环素耐药菌株具体耐药原因尚不清楚，由于替加环素的体外药物敏感性试验结果会受到诸多因素的影响［20］，因此还需要进一步研究。

【相关文献】

［1］何超，康梅，陈知行，等. 多重耐药鲍曼不动杆菌对替加环素敏感性降低的机制研究［J］. 现代预防医学，2012，39（10）：2513-2515.

［2］杨均均，黄文祥，史芳静，等. 耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌流行特征及耐药基因分析［J］. 中国抗生素杂志，2012，37（5）：343-347.

寻梦奇地［3］贺毅，吴伟元，陆坚，等. 替加环素、米诺环素、多黏菌素B对碳青霉烯类敏感性降低和不敏感鲍曼不动杆菌体外抗菌活性［J］. 中国感染与化疗杂志，2014，14（1）：42-46.

［4］盛滋科，王明贵. 临床多重耐药肠杆菌科细菌对替加环素的体外敏感性分析［J］. 中国感染与化疗杂志，2014，14（2）：131.

［5］张冀霞，王占伟，王启，等.替加环素对临床常见多重耐药菌的体外抗菌活性研究［J］.中华检验医学杂志，2013，36（4）：308-312.

本文发布于:2024-09-21 19:37:26，感谢您对本站的认可！

本文链接：https://www.17tex.com/xueshu/355184.html

上一篇：黄芪多糖提取方法研究概况

下一篇：《医学微生物学》细菌的分布与外界因素对细菌的影响实验