临床生化常用的原及检测波长
报刊征订Toos 545nm白马湖之冬
苯酚（对氯苯酚）505nm
NAD（P）H指示系统，波长340nm，项目：ALT、AST、GLUC己糖激酶法、C K、UREA、LDH等。
煤气化技术苯衍生物类，波长400-410nm，如ALP、GGT、CHE等。
过氧化物酶指示系统，项目：TG、TCH、HDL-C、LDL-C、UA等。
可见光波长及其互补：可见光波长及其相应被吸收的颜依次为：红（630～700nm）、橙（600～630nm）、黄（570～600nm）、绿（500～570nm）、蓝（435～500nm）、紫（400～435nm）。
★540nm：
1. 双缩脲测蛋白：所有蛋白质分子都含有肽键。在碱性溶液中，肽键与铜离子结合，生成蓝紫化合物，在540nm处吸光度与肽键的数量呈正比关系，可以计算蛋白质含量。
2. 染料结合法测脑脊液蛋白：在柠檬酸存在的酸性条件下，伊红Y燃料离解成阴离子型，染料的黄消退，使试剂空白吸光度降低；另外，蛋白质多肽链中的精氨酸、组氨酸、赖氨酸和氨酸残基，离解生成带－NH3+基团，与染料阴离子的羧基和酚基借静电吸引而结合成红蛋白燃料复合物，其540nm处吸光度大小与蛋白质浓度呈比例。
★628nm：
1. 溴甲酚绿法测血清白蛋白：在PH4.2的缓冲液中，白蛋白分子带正电荷，与带负电荷的溴甲酚绿（BCG）生成蓝绿复合物，在波长628n m处有吸收峰。复合物的吸光度与白蛋白浓度成正比。 ★603nm：
1. 溴甲酚紫法（BCP）测血清白蛋白：BCP溶于PH5.2的醋酸缓冲液中，呈黄。当它与白蛋白结合后转变为绿的符合物，在波长603出有最大吸收峰。
★650nm：
1. 磷钨酸法测黏蛋白：以0.6mol/L过氯酸沉淀血清中蛋白质时，黏蛋白不被沉淀，仍存留在滤液中，再加磷钨酸使黏蛋白沉淀，然后以酚试剂测定沉淀物中蛋白质的含量。
2. 米吐尔直接显法测血清无机磷：利用无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成磷钼酸铵复合物，用还原剂对甲氨基酚硫酸盐（米吐尔）还原生成钼蓝。在试剂中加入吐温－80以抑制蛋白质的干扰。 ★604nm：
1. 邻苯三酚红钼络合显法测脑脊液总蛋白：邻苯三酚红与钼酸络合形成红复合物（吸收峰475n m）。该复合物在酸性条件下与蛋白质形成复合体，其吸收峰移至604nm。用比法求蛋白质含量。
★530nm：
1. 比浊法测脑脊液蛋白：脑脊液中蛋白质与磺基水杨酸－硫酸钠试剂作用产生沉淀，所形成的浊度在530nm处进行吸光度测定，与同样处理的标准液比较测得蛋白含量。
★415nm：
中华精英联盟
1.亲和层析法测H bA1c：用于分离糖化与非糖化Hb的亲和层析凝胶柱，是交联间－氨基苯硼酸的琼脂糖珠。硼酸与结合在H b分子上葡萄糖的顺位二醇基反应，形成可逆的五环化合物，致使样品中的糖化Hb选择性地结合在柱上，而非糖化Hb则被洗脱。然后用山梨醇解离五环化合物以洗脱糖化H b，在415nm分别测定解析液的吸光度，计算糖化Hb的百分率。
★550nm：
1. 糖化血清蛋白测定：血清葡萄糖能与白蛋白及其他血清蛋白分子N末端的氨基发生非酶促糖化反应，形成高分子酮胺结构。此酮胺结构能在碱性环境中与硝基四氮唑蓝（NBT）发生还原反应，生成甲？，以1－脱氧－1－吗啉果糖（DMF）为标准参照物，在550nm处进行比。
★340nm：
1. 血清前白蛋白测定：血清中的PA与抗PA抗体在液相中反应生成抗原抗体复合物，使反应液呈现浊度。当一定量抗体存在时，浊度与血清中P A的含量呈正比，利用340nm处的散射比浊或投射比浊技术，与同样处理的P A标准比较，求得样品种PA含量。
2. 尿微量白蛋白测定：尿液中的白蛋白与抗人白蛋白特异性抗体在缓冲液中反应生成抗原－抗体复合物，产生浊度，与尿中白蛋白浓度呈正比，利用透射比浊法测定340n m处吸光度，与同样处理的标准品制备的标准曲线比较，求得尿液中的白蛋白浓度。
3. 己糖激酶法测血清葡萄糖：在己糖激酶（HK）催化下，Glu和ATP发生磷酸化反应，生成葡萄糖－6－磷酸（G-6-P）与ADP。前者在葡萄糖－6－磷酸脱氢酶（G－6－PD）催化下脱氢，生成6－磷酸葡萄糖醛酸（6－PG），同时使NADP 还原成NAD PH。反应式如下：
葡萄糖+ATP —HK—> G6P+ ADP
G6P + NADP —G6PD—> 6PG + NADPH + H+
NADPH的生成速率与葡萄糖浓度呈正比。NADPH在波长340nm有吸收峰，检测吸光度升高速率，计算血清葡萄糖浓度。
4. 葡萄糖脱氢酶法测血清葡萄糖：葡萄糖脱氢酶（GDH）催化葡萄糖脱氢，氧化生成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸－&－内酯）。
B－D－葡萄糖+NAD+—GDH—>D－葡萄糖酸内酯+NADH
向反应液中加入变旋酶可缩短反应达平衡时间，反应过程中NA DH生成量与葡萄糖浓度成正比关系。
5. 血浆乳酸测定：在NAD存在下，乳酸脱氢酶催化乳酸氧化成丙酮酸，同时生成NAD H：
L－乳酸+ NAD+ —LDH—> 丙酮酸+ NADH + H+
在PH9.8时，平衡偏向乳酸氧化成丙酮酸。加入肼或氨基脲与丙酮酸生成复合物，使丙酮酸不断从反应体系中移去，进一步促进反应向右移动，从而驱动反应的完成。分光光度计波长340nm，监测吸光度的升高速率，计算乳酸含量。
6. 全血乳酸测定：在NAD+存在下，LDH催化乳酸，氧化成丙酮酸。加入硫酸肼捕获产物丙酮酸，并促进反应完成。反应完成后生成的NADH与乳酸为等摩尔关系，在340nm下测定NADH的生成量，计算乳酸的含量。
7. 血浆丙酮酸测定：乳酸脱氢酶催化丙酮酸还原成乳酸，反应如下。
丙酮酸+ NADH + H+—LDH—> L－乳酸+ NAD+
分光光度计波长340nm，监测NADH吸光度下降速率，计算样品中丙酮酸浓度。本法适用于各种任选式自动分析仪。
8. 全血丙酮酸测定：原理同血浆丙酮酸测定，PH7.5条件下利于上述反应（生成乳酸方向）
9. 血清（B－羟丁酸）B－HB测定：在有NAD存在时，B－羟丁酸在B－羟丁酸脱氢酶（B－HBDH）催化下，生成乙酰乙酸（AcAc）和NADH。在波长340n m 处，监测反应中吸光度的上升速率，可以计算血清中B－羟丁酸的浓度。
B－HB + NAD —B-HBDH—> AcAc + NADH + H+
10. 钾的酶法测定：磷酸烯醇丙酮酸（PEP）与二磷酸腺苷（ADP）在钾依赖性丙酮酸激酶（PK）催
化下，生成丙酮酸和三磷酸腺苷（ATP）。再在乳酸脱氢酶催化下，所生成的丙酮酸和NADH反应，生成乳酸和NA D。反应中NADH的消耗量与样品种钾离子浓度呈正比。因此，在340nm处监测吸光度下降速率，可以计算钾离子含量。反应式如下：
PEP + ADP —K+, PK—> 丙酮酸+ ATP
丙酮酸+ NADH + H+ —LDH—> 乳酸+ NAD+
11. 酶法测定血浆（血清）碳酸氢根及总二氧化碳：血浆（清）中的碳酸氢根在磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC）催化下和磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）反应，生成草酰乙酸和磷酸；草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH）催化下，生成苹果酸，同时NADH被氧化成NAD+。在分光光度计340nm处，吸光度下降速率与样品中HC O3-含量成正比。反应式如下。
磷酸烯醇式丙酮酸+ HCO3- —PEPC—> 草酰乙酸+ 磷酸
草酰乙酸+ NADH + H+ —MDH—> 苹果酸+ NAD+
12.紫外分光光度法测血清无机磷：血清中无机磷在酸性溶液中与钼酸铵反应生成的磷钼酸铵复合物，直接在340n m或325n m波长处测定吸光度。
13. 速率法测定血清AL T：在ALT速率法测定中，酶偶联反应式为：
L-丙氨酸+a-酮戊二酸—AL T—> 丙酮酸+L-谷氨酸
丙酮酸+NADH+H+—LDH—> L-乳酸+NAD+
上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性成正比，可在340nm波长处检测吸光度下降速率（-△A/min），计算出ALT的活力单位。
★600nm：
1. 染料结合法测尿微量白蛋白：将尿标本实现用Sephad ex G-50凝胶过滤，除去尿中素及其他干扰成分。将流出物加BP B染料，使之与白蛋白结合显，经与同样显的白蛋白标准液比较，可求得尿中白蛋白含量。
2. 甲基麝香草酚兰比法测血清镁：血清中镁、钙离子在碱性溶液中能与甲基麝香草酚兰染料结合，生成蓝紫的复合物，加入EGTA（乙二醇双-N,N,N,N-四乙酸，简称EGTA）可掩盖钙离子的干扰。
★505nm：
1. 葡萄糖氧化酶法测血清葡萄糖：葡萄糖氧化酶（GOD）催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸（D－葡萄糖酸&内酯），并产生过氧化氢：
Glu + 2H2O + O2 —GOD—> 葡萄糖酸+ 2H2O2
在原性氧受体（如联大茴香胺、4－氨基安替比林偶氮酚）的存在下，过氧化物酶催化过氧化氢，氧化原物质，生成有化合物。于505nm处比即可测的葡萄糖浓度。
★405nm：
1. 钠的酶法测定：邻硝基酚-B-D-半乳糖苷（ONPG）在钠依赖性B-半乳糖苷酶催化下生成邻－硝基酚和半乳糖。邻－硝基酚的生成量和样品中钠离子浓度呈正比。邻－硝基酚在碱性环境中呈黄，可在405nm波长处监测吸光度的升高速
度，计算钠的浓度。
★460nm：
1. 硫氰酸汞比法测血清氯化物：标本中的氯离子与硫氰酸汞反应，生成极难解离的，并释放出相应当量的硫氰酸离子。后者与试剂中铁离子结合生成泽很深的橙红硫氰酸铁，吸收峰在460nm，泽强度与氯化物的含量成正比。
Hg（SCN）2 2Cl - ——> HgCl2 + 2SCN-
3CN- + Fe3+ ——> Fe（SCN）3 （橙红）纳米微粒
★610nm
甲基麝香草酚兰比法测血清总钙：血清中钙离子在碱性溶液中与甲基麝香草酚兰结合，声称蓝的络合物。加入适量的8-羟基喹啉，可消除镁离子对测定的干扰，与同样处理的钙标准液进行比较，以求得血清总钙的含量。
★575nm
邻－甲酚酞络合酮比法测血清总钙：邻－甲酚络合酮是金属络合指示剂，同时也是酸碱指示剂，在碱性溶液中与钙及镁螯合，声称紫红螯合物。作钙测定时，在试剂中加入8-羟基喹啉以消除标本中镁离子的干扰。
★640nm
硫酸亚铁磷钼蓝比法：用三氯醋酸沉淀蛋白，向无蛋白滤液中加入钼酸铵试剂，与无机磷结合生成磷钼酸铵，在以硫酸亚铁为还原剂，还原成蓝化合物（钼蓝），进行比测定。
★510nm
1962饥荒
Calmagi te染料比法测定血清镁：血清中镁在碱性条件下与Ca lmagit e染料生成紫红络合物，颜的深浅与镁的浓度成正比。溶液中的EGT A可消除钙的干扰，使用表面活性剂可使蛋白胶体稳定，不必去除血清中蛋白质而直接测定镁。★562nm
血清铁和总铁结合力测定：与转铁蛋白结合的血清铁在酸性介质中从转铁蛋白中解离出来，再被还原剂还原成二价铁，后者与亚铁嗪生成紫红化合物，在562nm处有吸收峰，可作比测定。直接测定法应纠正血清本身的度，故应设血清空白。
总铁结合力（TIBC）是指血清中转铁蛋白能与铁结合的总量。将过量铁标准液加到血清中，使之与未带铁的转铁蛋白结合，多余的铁被轻质碳酸镁粉末吸附除去，然后测定血清中总铁含量，即为总铁结合力。
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