一、实验目的
1.熟悉尿药法实验的取样方法及注意事项。
2.掌握尿药法计算消除速度常数及生物利用度的方法。
二、实验原理
药物的体内过程是由吸收、分布、代谢、排泄等过程组成的，大多数药物均有部分的原形经尿排除，常可用血药法和尿药法来估测药物在体内的速度过程变化规律及生物利用度。 采用血药法测定药物在体内的速度过程变化规律及生物利用度时，由于多次采血，不易接受，对于药物大部分以原形从尿中排除的情况下，尿药浓度高于血药浓度，测定方法易建立，取样方便，本实验采用尿药法测定核黄素的生物利用度。
单室模型单剂量口服给药的尿排泄速率法基本公式为
ka>>k, t 较大时，e-Kat → 0。以曲线后项dxu/d t的对数对t回归可得一条直线。
由公式可见，若以ln dxu/d t对t作图，可得到一条二项指数曲线，从其后段直线的斜率可求出一级消除速度常数k。
由于尿中原形药物排泄速度的瞬时变化率是不可能用实验方法求算的。通过实验可求出平均排泄速度，设在一时间Δt内药物的排泄量为ΔXu，则平均排泄速度记为ΔXu/Δt，这样上式可改写如下：
集尿经历的时间通常只需半衰期的3~4倍即可。
由于实验中采用平均排泄速度代替瞬时排泄速度，求得的消除速度常数K会出现一些误
差。但若以恒定的时间间隔集尿，其时间间隔不大于一个药物的半衰期，则仅发生2%以内的偏差。
生物利用度是生物药剂学的一个重要参数，它反映药物在体内吸收的程度与吸收速率。可分为相对生物利用度与绝对利用度。当药物的口服制剂与静脉注射剂相比，则可得到绝对生物利用度。
测定生物利用度常用方法除用血药法外还可用尿药法，尿药法即从累积尿药量来计算生物利用度。
生物利用度是指服药后药物吸收进入大循环的速度和程度，以静脉注射为参考标准得到是绝对生物利用度用其他制剂为参考标准得到的是相对生物利用度。
核黄素的异咯嗪环上具有活泼的双键，能接受和放出氢原子，在连二亚硫酸钠（保险粉）的作用下，能还原为无的双氢核黄素，利用这一性质，可由加入保险粉的前后测得吸收度的差值，计算尿中核黄素的含量（444 nm）。
三、仪器与材料
1.仪器 ：721分光光度计
2.材料 ：核黄素及片剂、保险粉、冰醋酸
四、实验内容
（一）尿样收集
1.服药前一天收集24小时尿液。每次收集尿液后量体积，取20ml于阴凉避光处保留，其余倒掉。
2.服药前排空小便。早餐后立即吞服核黄素片（5 mg/片）6片，记录服药时间。
3.服药后，在第2、4、6、8、10、12小时取尿样，用量筒量取并记录尿样体积，留20 ml倒入盛有0.2 ml冰醋酸的刻度试管内，摇匀，于阴凉避光处保存。
以下操作步骤，均须注意避光。
（二）标准曲线制备
精密称取核黄素10 mg 于100 ml量瓶中，加0.02 mol/L的醋酸液稀释至刻度，摇匀。精密吸取标准溶液0.1、0.3、0.5、1.0、2.0、3.0 ml ，分别置于10 ml的量瓶中，用酸化蒸馏水（每100 ml蒸馏水中含1 ml冰醋酸）稀释至刻度，摇匀，以酸化蒸馏水作为空白，在444 nm测定吸收度。然后在每管中加保险粉约3 mg，摇匀，在一分钟内测定吸收度，两次吸收度差值即为核黄素吸收度，以A对C进行回归，求出标准曲线。
（三）尿液中核黄素含量的测定
取尿样20 ml，测定照标准曲线项下方法，“以酸化蒸馏水作为空白”起，依法测定，根据标准曲线计算尿药浓度。
五、试验结果与讨论
1.原始记录
受试者： 服药时间：
药物： 批号： 剂量：
服药前一天空白尿液总体积：
表1.空白尿液测定数据
试管号 | A1（未加保险粉） | A2（加保险粉） | ΔA | Cu(μg/ml) |
空白 | | | | |
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24小时空白尿液中排泄核黄素的总量：
平均2小时排泄核黄素的量为：
表2. 服药后尿样的原始记录
试管号 | 集尿时间 | 集尿间隔（h） | 尿量(ml) |
1 | | | |
2 | | | |
3 | | | |
4 | | | |
5 | | | |
6 | | | |
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表3.尿药测定结果
试管号 | A1（未加保险粉） | A2（加保险粉） | ΔA | Cu(μg/ml) |
空白 | | 水隔离泵 | | |
1 | | | | |
2 | | | | |
3 | | | | |
4 | | | | |
5 | | | | |
6 | | | | |
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表4.尿药法数据分析
| dnf王刚 t (h) | Δt (h) | t中 (h) | ΔXu (mg) | ΔXu/Δt | lnΔXu/Δt |
空白 | | | | | |
1 | | | | | |
2 | | | | | |
3 | | | | | |
4 | | | | | |
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6 | | | | | |
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2.绘制尿药排泄速率-时间半对数图。
3.以曲线后段直线部分计算斜率,从而计算消除速率常数k及生物半衰期t1/2。
4.计算Xu∞及尿排泄百分率。
5.计算核黄素片的绝对生物利用度.据文献报道,核黄素静脉注射后尿中总排泄量为给药剂量的97%。
六.思考题
1.以尿药速率法计算动力学参数和生物利用度与血药浓度法相比,有何优缺点？
2.尿药速率法计算生物利用度误差的主要来源有哪些？
七.实验注意事项
1.每次收集尿液后饮200 ml水以维持一定尿量。
2.服药前一天至实验结束应控制食谱，不吃富含核黄素的食物，如蛋类、牛奶、奶糖等，不得服用含B族维生素的药品。
核黄素对照品 | | 1g | 用于标准曲线母液的配制，试验前由试验助理配好足量母液，称样量标记于量瓶上。同学作标准曲线时直接取样稀释至自己的量瓶中即可。 |
冰醋酸 | 500ml | 2瓶 | 试验前发放用于酸化尿液的部分，配量取用移液管及吸耳球或其他合适量取器具。 |
保险粉 | 500g | 1瓶 | 征服者f313>历史首位!拜登得票数突破8000万保持密封，防止氧化与吸湿，给学生用时分取少量置一可盖盖、方便取出称量的容器内。试验助理需全程监督，保证使用安全。 |
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