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发酵过程中无机磷的利用

发布时间：2009-03-09　来源：生物网文章标签：生物论坛

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目的要求

（1）了解发酵过程中无机磷的作用。

（2）掌握定磷法的原理和操作技术。

实验原理

酵母能使蔗糖和葡萄糖发酵产生乙醇和二氧化碳。此过程与无机磷将糖磷酸化有关。

本实验利用无机磷与钼酸形成的磷钼酸络合物能被还原剂α－1，2，4－氨基萘酚磺酸钠还

原成钼蓝的原理来测定发酵前后反应混合物中无机磷的含量，用以观察发酵过程中无机磷的消耗。

试剂和器材

试剂
蔗糖；5％三；3mol/L硫酸和2.5％钼酸铵等体积混合液。

磷酸盐溶液：称取Na2HPO4济宁pm2.5·12H2O 120.7g(或Na2HPO4·2H2O 60g)和KH2PO4 20g溶解于

蒸馏水中，定容至1000mL，在冰箱中贮存备用。临用前稀释适当倍数。

标准磷酸盐溶液：将磷酸氢二钾（KH2PO4）在110℃烘箱中烘干2小时，冷却后准确称取0.1098g，用蒸馏水溶解，定容到1000 mL，成为每毫升溶液含25μg无机磷的标准磷酸盐溶液。

α－1，2，4－氨基萘酚磺酸溶液：将0.25gα－1，2，4－氨基萘酚磺酸，15g亚硫

酸氢钠及0.5g亚硫酸钠溶于100 mL 蒸馏水中。使用前稀释三倍。

二、材料

新鲜啤酒酵母。

三、器材

试管1.5×15cm（×15）；移液管0.2mL（×2），0.5mL（×2），1mL（×2），5mL（×3）；锥形瓶50mL（淘书吧×1）；水浴锅；研钵；滤纸；分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

取9商场现代化支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

管号	0	1	2	3	4	5
标准磷酸盐溶液(mL)	0	0.2	0.4	0.6	0.8	1.0
含磷量(μg)	0	5	10	15	20	25
蒸馏水(mL)	3.0	2.8	2.6	2.4	2.2	2.0
钼铵酸－硫酸混合液(mL)	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5
α－1，2，4－氨基萘酚磺酸钠溶液(mL)	0.5	0.5	多媒体课件制作工具 0.5	0.5	0.5	0.5
充分混匀后，37℃水浴保温10min
A600

绘制标准曲线：以A600为纵坐标，含磷量为横坐标，在坐标纸上绘制标准曲线。

二、酵母发酵

称取2 ~ 4g新鲜酵母和1g蔗糖，放入研钵内仔细研碎。加入5mL蒸馏水和5mL磷酸盐溶液研磨均匀。将匀浆转移至50mL 锥形瓶中并立即取出0. 5mL均匀的悬浮液，加入到已盛有3.5mL三溶液的试管中，摇匀作为试样1。将锥形瓶放入37℃恒温水浴中，每隔30分钟取出0. 5mL悬浮液，立即加入已盛有3. 5mL三溶液的试管中，摇匀。共取三次，作为试样2，3，4。将每个试样过滤后，得无蛋白滤液备用。

三、无机磷的测定

取五只干燥洁净的试管，编号后按下表加入各种溶液：

管号	1	2	3	4	5
发酵时间(min)	0	30	60	90	—
无蛋白滤液(mL)	0.1	0.1	0.1	0.1	—
蒸馏水(mL)	2.9	2.9	2.9	2.9	2.9
钼铵酸－硫酸混合液(mL)	2.5	2.5	2.5	2.5	2.5wave是什么格式
α－1，2，4－氨基萘酚磺酸钠溶液(mL)	0.5	0.5	0.5	0.5	0.5
充分混匀后，37℃水浴保温10min
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