（一）实验目的
湖州织里镇 初步掌握巴氏杆菌病的微生物学诊断步骤和方法。
了解巴氏杆菌病的病理变化。
（二）实验准备
染液：美兰染液、瑞氏染液、革兰氏染液（草酸铵结晶紫、革兰氏碘液、95%酒精、沙黄水溶液）、
用具：搪瓷盘、碘酊棉、75%酒精棉、组织镊、手术刀（带柄）、普通剪刀、塑料洗瓶、纱布、酒精灯、载玻片、吸水纸（载玻片大小）、铂耳、显微镜、擦镜纸、染废液缸、甲苯、镜油、血培养基平板、巴氏杆菌病死鸡
（三）实验步骤
江杨清 1、分离培养（划线培养）
① 无菌解剖病死鸡暴露胸腹腔，露出其心、肝、肺等。
② 用火焰灼烧手术刀片，烫肝脏表面，并迅速划小口。
③ 用无菌铂耳钩取肝组织，划线分离于血琼脂平板上，37℃/24hr培养后，观察菌落形态。惰政
stewart 2、触片制作
① 肝组织触片（美兰染）
取一小块肝组织，并用吸水纸吸一下，在洁净的载玻片上轻轻地作2～3个压迹制成肝触———→固定后，滴加适量美兰染 液———→水洗——→吸干或自然干燥。
用无菌铂耳钩取2－3铂耳心血于洁净载玻片上，均匀涂成直径
约1cm2的涂面，制成心血涂片后———→盖上一块玻片大小清洁滤纸片 在其上轻轻滴加瑞氏染液，至略浸过滤纸并保持湿润
加等量蒸馏水 掀去滤纸片 直接用自来水冲洗 吸干或自然干燥。
③ 革兰氏染（纯培养）
现代汉语语音学
在洁净载玻片上醮取三铂耳生理盐水，用灭菌铂耳勾取少许细菌，并在生理盐水上涂成1cm2涂面 在干燥固定好的涂片上
水洗 水洗 水洗
水洗 吸干或自然干燥。
3、仔细观察病死鸡的病理变化（心、肝、肺等），并将台面收拾干净后，取出显微镜。
理化指标 4、观察细菌形态
镜检
打开光圈 黄圈10×调视野 玻片涂（触）面滴加镜油
白圈100×直接观察
（四）结果分析
* 在油镜下观察：氏杆菌（多杀性巴氏杆菌）呈卵圆形，两极浓染，为革兰氏阴性（纯培养为红）。
* 在鲜血琼脂上，氏杆菌菌落呈浅灰半透明的露珠状，较平坦，不溶血。
（五）注意事项
（1）血培养基制备式所采鸡血必须无菌，否则以产生杂菌
（2）在心血涂片进行瑞氏染时,要盖上一块玻片大小清洁滤纸片,以防染液中的杂质进入涂片上,影响镜检效果。
（六）思考题
试述氏杆菌病的微生物学检查程序。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议