avalon总线
组织芯片(tissue chip)又称组织微阵列（tissue microarray TMA）。它是将数十至上千个小组织按照设计，整齐地排放在一张载玻片上制成组织切片的技术。这一技术由美国国立癌症研究院的Kononen等[1]于1998年在Nature Medicin上首次报道。它是继基因芯片、蛋白质芯片之后出现的又一种重要的生物芯片技术。由于现有组织芯片设备昂贵且操作繁琐、取样点样本精度低等缺点，影响了组织芯片技术在病理诊断和研究中应用。我们参阅大量资料，自行设计工具，成功制作了高质量组织芯片。根据工作需要，我们选择比较乳腺癌组织芯片和普通切片中免疫组化的差别，来判断组织芯片的有效性，以期能用组织芯片技术提高工作效率。1材料与方法 1.1供体蜡块的选择收集湖北省肿瘤医院病理科2005年12月~2006年6月诊断为乳腺癌并做过受体检测的病例160例，复查组织切片，包括苏木素-伊红(HE)和雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、c erBb2受体染切片，一些组织蜡块太薄的病例被排除，最终有124例入选本实验，均为4%甲醛固定、石蜡包理的组织。其中浸润性导管癌101例，浸润性小叶癌14例，大汗腺癌1例，化生性癌1例，髓样癌7例。 1.2组织芯片的构建 1.2.1简易工具的制作(1）打孔针和取样针的制作打孔针和取样针均可以用带实芯针的穿刺针自己磨制。一套针有四件，两个空心针及配套的两个实心针芯。针径可以是0.6~2.0mm，须注意打孔针径比取样针径小1号（即打孔针的外径与取样针的内径一致），以便取样组织的直径和打孔孔径一致，以防组织芯孔与受体组织连接不紧脱落。我们使用的取样针直径是1.6mm，打孔针和取样针的外周套彩塑料膜以标记针进入蜡块的深度，打孔针打孔的深度要比取样针深1.0mm。有人报道是采用微雕开窗标记刻度技术，我们认为不可取，因为针用久不锋利时要磨，会影响刻度[2]。（2）通量定位模板的制作根据自己的需要，可以使用不同直径的针制作不同通量的模板（最好用透明材料），孔间距可以为1.0mm到2.0mm，建议刚开始操作不熟练时间距大一点（2.0mm），四周留白距离大一点（3.0mm），以防止打孔打歪或石蜡块断裂，影响效果。模板的四周最好是三周都有挡板，模板的内径大小和受体腊块相同，以便模板卡在受体蜡块上，操作起来很轻松。我们使用的通量模板有两种：①通量阵列5×7，取样直径2.0mm，间距2.0mm；②通量阵列7×9，取样直径1.5mm，间距1.5mm；蜡块大小统一为30.0mm×25.0mm，厚度15.0mm，便于管理。
1.2.2TMA制作方法(1）受体蜡块的制作及打孔①可以使用熔点在60℃～62℃普通切片纯净石蜡制作，依据自己的需要设
黔西南论坛
老奴丸>传送带设计计制作规格与模板大小一致的各种包埋框；②倒入融化的液体石蜡，在蜡块的表面加上普通塑料包埋底盒，以便切片时固定蜡块和编号，也可直接用标签纸蜡封编号（切片时有可能使底盒与蜡块脱落，但蜡块依然很规整不影响切片）。浇注熔化石蜡后开始计时，40～50min后（具体时间可能因为室温的不同而不同）蜡块成型并且处于未完全固体化状态，剥离包埋框，开始打孔；③打孔时先将定位模板卡住受体蜡块固定，然后用对应型号的打孔针通过定位模板上的阵列孔打孔，深度为6.0mm。打孔需快速进行，否则蜡块变冷变硬时容易发裂，此时也可以放入摊片机水箱中（水温46℃）水浴加热3
～5min，使蜡块受热变软而不易发裂。（2）待取位点标记及供体蜡块的制作这是技术创新的关键。由于多数取材组织是四方形的，很少是不规则的，使我们在显微镜下阅片后很难回到蜡块上的某一点精准取材，常用方法是在玻片上画圈标记，再回到组织蜡块上目测位点，这种方法由于取样位点象限不好确定而需要多处取样，exco
这大大增加了我们的工作量和成本。我们的解决方法是坐标定位法准确定位：①在取材时用大头针在蜡块的左上象限1/3处打孔做标记（也可在已成形的蜡块上用小针打孔标记），作为XY轴的原点。②我们阅片时以此打孔点位为原点，分别在显微镜下测出我们要取材的位点在水平轴（X 轴）和垂直轴(Y轴)上的坐标距离，再返回到蜡块上相应的坐标位点做标记，取样。从而实现点对点的精确位点取样，仅一次就可成功。(３）供体蜡块的取样①供体蜡块取样前需加热，方法有烤箱加热和水浴加热，我们认为水浴更方便，且易于控制。水温46℃～48℃，加热5～10min；
男生女生金版投稿②依据前面测量的坐标到需要取材的位点，用采样针在供体蜡块欲取出部位上打孔采样，深度
5.0mm（比受体蜡块孔浅1.0mm），深度先在针上用彩塑料膜标记，采样时需缓慢用力，防止供体蜡块裂开，到达要求的深度后要旋转两周以便针芯充满。③在阵列蜡块（受体蜡块）上到要填入的位点，用实心针芯缓缓推出，准确植入，使组织芯的平面和蜡块的基本一致。④为了更方便准确的取样，我们制作了简单的取样定位工具，制作方法：在两个内空的矩形直角边上刻上精确刻度，取样时
用两个矩形相对的直角两边组成一个中空矩形，按照前面显微镜下测量的距离和方向，以打孔点为矩形的一个直角的顶点，对角顶点就是要取样的位点的精确位置。以上创新方法我们取名为二维坐标定位矩形模板取样法。（４）阵列位点信息录①在植入组织芯时在左上象限非对角线上的某一个位点要空出
，以便识别阵列的方位。有报道采用植入脑组织来定位，我们实践后认为还是不植入方便，因为：一方面不植入组织芯的阵列，我们肉眼就可以确定方位，而植入脑组织的阵列要在显微镜才能确定；二是脑组织在摊片时有时容易散开，从而增加确定方位难度。②信息记录采用二维记录方式，精确记录每一位点的信息。水平方向从左到右每个点坐标标记为A、B、C、…，垂直方向每个点坐标标记为1、2、3…，这样每个位点都有由一个由字母和数字组成的坐标，如（A3），（B5），（G2）等等。可以在登记本上记录每个位点的信息，很方便的建立组织芯片库。(５）阵列蜡块的处理阵列制作完毕后，将阵列蜡块含有组织的一面平放在一玻璃板上，置于56℃恒温箱内，每5min观察一次，待蜡块和玻璃板中间出现液体状的石蜡把蜡块取出，置于冰箱内冰块上冷却。有报道是在常温下冷却，我们实践和比较后认为冰箱内冷却效果更好，因为：常温下冷却蜡块必须底面（有组织芯片的面）朝上，这时液体石蜡容易流出，使蜡块的边角变钝，这样影响边角的组织芯的切片。(6）切片冰腊块好后以4μm厚切片，裱贴于经2% 3氨丙基三乙氧硅烷(APES)丙酮液处理过的载玻片上。微阵列蜡块的切片用德国徕卡一次性刀片在徕卡切片机上切片，与常规组织切片基本相同，但是因为蜡块内的组织块多，
在裱片时操作要轻，速度掌握适宜，否则容易离断或组织阵列偏移，另外，还要注意水温，过低切片展不开，过高易拉长，拉断，保持在48℃左右较合适。用一次性切片刀比用普通厚钢刀切片质量要好。共制作腊块4个，各切片3张共12张切片，每张切片留一个为定位用空白点，其余62个为有效组织位点。372例免疫组化只做了12张玻片。工作量相当于以前免疫组化的3％。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议