1.1.前言1
1.2.舱体2
1.3.空气处理系统2
1.4.传递装置2
1.5.灭菌设备2
1.6.配套设备与辅助设施32020版《中国药典》中关于无菌检查法的要点3
2.1.无菌检查要求3
2.2.培养基的制备及培养条件4
2.3.培养基的适用性检查4
2.4.菌种4
2.5.菌液制备4
2.6.培养基接种5
2.7.方法适用性试验5
2.8.薄膜过滤法5
2.9.直接接种法6
2.10,结果判断6
2.11,供试品的无菌检查6
2. 12.供试品处理及接种培养基6关于无菌检查用隔离系统的结构
1.1.前言
2020版《中国药典》中对无菌检查法等做出了相关要求，并制定了配套 的无菌检查用隔离系统验证和应用指导原那么，本文对指导原那么相关要点进行了 整理，。
无菌检查试验应用隔离系统时，相关的风险管理应贯穿无菌检查用隔离系 统的设计、制造、安装、调试、确认、使用、监测、维护和周期性回顾等工作 流程中。
1.2.舱体
（1）隔离系统的舱体按制造材质，可分为硬舱隔离系统和软舱隔离系 统，硬舱隔离系统的舱体一般由不锈钢、玻璃或硬质塑料等制成，软舱隔离系 统的舱体一般由软质塑料制成。
（2）手套■袖套组件或半身操作服为安装在舱体上的部件，用于实现舱内 的试验操作，半身服覆盖操作人员的躯干，并配有透明头盔和通风装置。
1.3.空气处理系统
（1）无菌检查用隔离系统应配备可截留微生物的高效空气过滤系统（或 更高级别的过滤系统）。
（2）隔离系统按内部气流组织区分，可分为单向流隔离系统和非单向流 隔离系统。
（3）静态时内部环境的洁净度应到达A级空气洁净度的要求。
（4）无菌检查用隔离系统一般在正压下操作，内部应通过持续送风保持 足够的正压来维持内部的无菌环境。
1.4.传递装置
（1）灭菌后的培养基、稀释液和实验用品可以通过有外表灭菌功能的传 递舱直接无菌传递到操作舱内。
（2）不同的隔离系统舱体也可以通过专门设计的快速传递门（Rapid Transfer Ports, RTP）连接，以实现将实验物品在两个或多个舱体之间进行无 菌传递。
（3）RTP±未经灭菌的外表通过互锁环或法兰互相叠合，并通过密封圈 封闭，从而防止微生物进入隔离系统内。
1.5.灭菌设备中国图书馆学会
（1）隔离系统一般采用汽化的灭菌剂对内部环境进行外表灭菌，目前较 常用的火菌剂包括汽化过氧化氢、过氧乙酸等。
（2）灭菌剂发生器可集成于隔离系统中，也可独立于隔离系统，独立设 计的灭菌系统与隔离系统之间的气体管路连接，应确保其密封性。
（3）灭菌剂应通过有效过滤后进入隔离系统内，火菌结束后须对灭菌剂 进行排空。
1.6.配套设备与辅助设施
（1）监测设备
隔离系统应配置对内部洁净环境和系统运行状况进行监测、报警及记录的 设备。监测设备应确保数据得到客观真实的记录，数据记录的可靠性应符合国 家有关规定。
（2）无菌检查设备和工具
隔离系统内部安装无菌检查使用的配套设备和辅助设施，如无菌检查过程 中使用的蠕动泵、真空泵、物料装载支架、废弃物通道等。
2.2020版《中国药典》中关于无菌检查法的要点
7月2uhf日，国家药品监督管理局、国家卫生健康委发布公告，正式公布 2020年版《中国药典》，新版药典将于今年12月30日起正式实施。新版药 典对环境监测、无菌检查方法、微生物检测、灭菌验证等都做出了相关要求。 本文结合了《医疗器械无菌试验检查要点指南》中的检查内容，对新版《中国 药典》中关于无菌检查法的要点进行了整理，。
2.1.无菌检查要求
（1）无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须到达无菌检查的要 求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得 影响供试品中微生物的检出。
（2）单向流空气区域、工作台面及受控环境应定期按医药工业洁净室
（区）悬浮粒子、浮游菌和沉降菌的测试方法的现行国家标准进行洁净度确 认。隔离系统应定期按相关的要求进行验证，其内部环境的洁净度须符合无菌 检查的要求。
（3）日常检验需对试验环境进行监测。
注意：“受控环境”主要的关注指标应该是悬浮粒子、浮游菌和沉降菌受 控，其他如压差、温湿度等的指标和监测频度也应满足《药品洁净实验室微生 物监测和控制指导原那么》的要求。
2.2.培养基的制备及培养条件
（1）培养基可使用按该处方生产的符合规定的脱水培养基或商品化的预 制培养基。配制后应采用验证合格的灭菌程序灭菌。
暮2（2）制备好的培养基假设不即时使用，应置于无菌密闭容器中，在2〜25° Cufo之家网、避光的环境下保存，并在经验证的保存期内使用。
注意：新版药典将“成品培养基”调整为“商品化的预制培养基”。新版 药典不再强调“非密闭.三周”、“密闭.一年”的规定，便于企业实践掌握； 但企业应最好具备稳定的验证过程和结果，以支持封闭条件和保存周期。
1.3.培养基的适用性检查
无菌性检查每批培养基一般随机取不少于5支（瓶），置各培养基规定的 温度培养14天，应无菌生长。
注意：应考虑实践中用于无菌性检查培养的试管装灭菌培养基与无菌检验 用的三角瓶装培养基在灭菌方法验证时的两种包装的温度、F0舒玉泰等结果。
2. 4.菌种
培养基灵敏度检查所用的菌株传代次数不得超过5代（从菌种保存中心获 得的干燥菌种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存和确认，以保 证试验菌株的生物学特性。
2. 5.菌液制备
（1）接种金葡、铜绿、枯草的新鲜培养物至胰酪大豆陈液体培养基中或 胰酪大豆陈琼脂培养基上，接种生抱梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养 基中，30〜35° C培养18〜24小时。
（2）接种白念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡 萄糖琼脂培养基
上，20〜25° C培养2〜3天，上述培养物用pH7.0无菌氯化钠 —蛋白腺缓冲液或0.9%无菌氯化钠溶液制成适宜浓度菌悬液。
（3）接种黑曲霉至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基或马铃薯葡萄糖琼脂培养 基上，20〜25° C培养5〜7天或直到获得丰富的抱子，加入适量含 0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的pH7.0南湖半岛花园无菌氯化钠■蛋白月东缓冲液或0.9%无菌氯 化钠溶液,将泡子洗脱。
（4）采用适宜的方法吸出抱子悬液至无菌试管内，制成适宜浓度的抱子悬液。
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