一、名词解释：（10～20%）
基因工程 基因工程工具酶 限制性内切酶 限制性内切酶得Star活性 PCR引物
PCR扩增平台期 DNA芯片 基因组文库 cDNA文库 转化 限制与修饰系统
原位杂交：将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上，然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术，该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。 粘性末端：双链DNA被限制性内切酶切割后，形成得两条链错开几个碱基，而不就是平齐得末端。
Northern印迹杂交：将RNA进行变性电泳后，再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术，可用于检测目得基因得转录水平。
转位：一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。
基因工程：在体外，用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA，继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞，最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程，又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。 目得基因：基因工程中，那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。
连接器：人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段，连接到目得基因得两端，便于基因重组中得切割与连接。
转化：受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。
停滞效应：PCR中后期，随着目得DNA扩展产物逐渐积累，酶得催化反应趋于饱与，DNA扩增产物得增加减慢，进入相对稳定状态，即为停滞效应，又称平台期。
逆转录PCR：以mRNA为原始模板进行得PCR反应。
PCR: 即聚合酶链式反应。在模板，引物，4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下，特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。
α-互补（α-complementation）：指在M13nac噬菌体DNA或PUC质粒序列中，插入了lac启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽），该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。
感染（infection）特指以λ噬菌体、粘粒与真核细胞病毒为载体得重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力得病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当得细胞，并在细胞内扩增。其中，由噬菌体与细胞病毒介导得遗传信息得转移过程又称为转导（transduction）。
47、转染（transformation）指真核细胞主动摄取或被动导入外源DNA片段而获得新得表型得过程。
二、填空题（20%）
1、DNA片段重组连接得方法主要有 平端连接、粘端连接、同聚尾连接、加接头连接 。
2、感受态细胞就是指 具有摄取外源DNA分子能力得细胞。
3、λ噬菌体蛋白对重组DNA体外包装时，包装长度为野生型λDNA得75~105%。
5、PCR反应体系含有耐热得TaqDNA聚合酶，化学合成得寡核苷酸引物，四种dNTP，合适得缓冲液体系。
6、核酸探针包括： cDNA探针；基因组DNA探针；寡核苷酸探针与RNA探针。
7、部分酶切可采取得措施有：(1)____________(2)___________ (3)___________等。(1)减少酶量；(2)缩短反应时间；(3)增大反应体积
8、DNA聚合酶I得Klenow大片段就是用_____________切割DNA聚合酶I得到得分子量为江民通行证76kDa得大片段，具有两种酶活性： (1)____________； (2)________________得活性。
枯草杆菌蛋白酶；(1)5'-3'内蒙古教育合成酶得活性；(2)3'-5'外切核酸酶
9、为了防止DNA得自身环化，可用_____________去双链DNA__________________。碱性磷酸酶；5’端得磷酸基团
10、基因工程中有3种主要类型得载体： _______________、_____________、______________。质粒DNA；病毒DNA；质粒与病毒DNA杂合体
11、pBR322就是一种改造型得质粒，它得复制子来源于 ，它得四环素抗性基因来自于 ，它得氨苄青霉素抗性基因来自于 。pMBl； pSCl01；pSF2124(R质粒)
13、DNA重组连接得方法大致分为四种：(1)_________________ (2)_______________ (3) _____________(4)_ ______________________。(1)黏性末端连接； (2)平末端连接； (3)同聚物接尾连接； (4)接头连接法
14、差示杂交(differential hybridization)技术需要__________________________。两种不同得细胞体能够表达不同得基因，即在一个体中能够表达一些基因，而在另一个细胞体中不能表达这些基因
16、将含有外源基因组一个酶切片段得质粒称之为含有一个___________，各种此类质粒得集合体称之为构建了一个_________________。基因组DNA克隆； 基因组DNA文库
17、根据Northern杂交得结果可以说明：_____________________________。外源基因就是否进行了转录
18、在________________技术中，DNA限制性片段经凝胶电泳分离后，被转移到硝酸纤维素膜(或尼龙膜)上，然后与放射性得DNA探针杂交。Southern印迹
19、可用T4 DNA聚合酶进行平末端得DNA标记，因为这种酶具有____________与_______得活性。5’→3’合成酶；3’ →5’外切核酸酶
20、根据外源片段提供得遗传表型筛选重组体，必需考虑三种因素： (1)_______________ (2)__________________(3)_________________。(1)克隆得就是完整得基因；(2)使用得就是表达载体；(3)不含内含子
21、放射免疫筛选得原理基于以下三点：
(1)抗体能够被吸附到固体支持物上；(2)同一个抗原可以同几种抗体结合； (3)抗体能够被标记
22、黏粒(cosmid)就是质粒—噬菌体杂合载体，它得复制子来自 、COS位点序列来自 ，最大得克隆片段达到 kb。质粒；λ噬菌体； 45
23、限制性内切核酸酶就是按属名与种名相结合得原则命名得，第一个大写字母取自_______，第二、三两个字母取自_________，第四个字母则用___________表示。属名得第一个字母；种名得前两个字母；株名
24、第一个分离得限制性内切核酸酶就是___________；而第一个用于构建重组体得限制性内切核酸酶就是_____________。EcoK；EcoRl
25、切口移位(nick translation)法标记DNA得基本原理在于利用_________得_______与______得作用。DNA聚合酶I：5'一3'外切核酸酶；5'一3'合成酶
26、就克隆一个基因(DNA片段)来说，最简单得质粒载体也必需包括三个部分：_______________、_____________、______________。另外，一个理想得质粒载体必须具有低分子量。研发支出
复制区： 含有复制起点；选择标记： 主要就是抗性基因；克隆位点： 便于外源DNA金华职业技术学院图书馆得插入
27、pUCl8质粒就是目前使用较为广泛得载体。pUC系列得载体就是通过
与 两种质粒改造而来。它得复制子来自 ，Amp 抗性基因则就是来自 。pBR322与M13；pMBl；转座子
28、噬菌体之所以被选为基因工程载体，主要有两方面得原因：一就是 ； 二就是 。它在细菌中能够大量繁殖，这样有利于外源DNA得扩增；对某些噬菌体(如λ噬菌)得遗传结构与功能研究得比较清楚，其大肠杆菌宿主系统得遗传也研究得比较详尽
29、Northern印迹与Southern印迹有两点根本得区别：
(1)__________________________________________________________________
(2)_________________________________________________________________。
(1)印迹得对象不同：Northern就是RNA，Southern就是DNA；(2)电泳条件不同，前者就是变性条件，后者就是非变性条件
30、限制与修饰就是宿主得一种保护体系，它就是通过对外源DNA得 限制 与对自身DNA得 修饰 来实现得。
31、II型限制酶既具有 识别位点 得专一性，也具有 切割位点 得专一性。它作用时需要 Mg2+ 离子作辅助因子。
32、个体之间DNA限制酶片段长度存在差异称 限制性片段长度多态性（RFLP）。
33、人工感受态得大肠杆菌细胞在温度为___________时吸附DNA, ___________时摄人DNA。0︒C；42︒C
34、野生型得λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体，原因就是：(1)
(2) (3) 。(1)分子量大，(2)酶得多切点，现有人口(3)无选择标记
35、形成平末端得方法有： 用产生平末端得限制酶切，用S1核酸酶切除粘末端 ，用DNA聚合酶填平粘末端。
36、回收DNA片段时，在确定DNA条带位置时，应使用 长 波长紫外灯，以最大限度减少对DNA得照射损伤。
37、基因工程受体菌得基因型常为r-m-rec-, r-表示 限制缺陷型， m-表示 修饰缺陷型 ，rec-
表示 重组缺陷型。
38、CaCl2法制备感受态细胞转化DNA时，DNA以 DNA-Ca2+ 复合物形式吸附于细胞表面。
39、TaqDNA聚合酶具有 ，缺乏 因此无 。5‘→3‘聚合酶活性， 3’→5‘外切酶活性，校正功能
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