第45卷第5期2222年12月
贵州医科大学学报
Vol. 45 No. 5
JOURNAL OF GUIZHOU MEDICAL UNIVERSITY
2222.17
子痫前期患者胎盘组织中sF4B 、PLGF 及IGF-1的表 达和临床意义* * ［基金项目］贵州省科技计划项目［黔科合LH 字(205 ) 7259 ］
* *通信作者 E-mail ：222812122@ qq. com
文芳，黄秀桃，刘耀文，李健伟，雷后康，周金年…
<；贵州医科大学附属医院妇产科，贵州贵阳550094)
［摘 要］目的：探讨子痫前期(PE )孕妇胎盘组织中可溶性血管内皮生长因子受体4(/43)、胎盘生长因子
(PLGF)及胰岛素生长因子B(IGFB )的表达和临床意义。方法：收集临床诊断的重度PE 孕妇25例和轻度 PE15例分别作为重度PE 组和轻度PE 组，同期30例正常晚期妊娠孕妇作为对照组；取3组孕妇胎盘组织标本，
采用免疫组织化学方法检测3组孕妇胎盘组织标本sF4W 、PLGF 及IGF-1的阳性表达水平。结果：轻度及重度
PE 组孕妇胎盘组织sFlt-1阳性表达高于对照组，且随病情加重而增加(P <0. 05)，轻度及重度PE 孕妇胎盘组织
中PLGF 、IGF-1的阳性表达低于对照组，轻度PE 组孕妇阳性表达低于重度PE 组(P<0.05)；轻度及重度PE 组 孕妇胎盘组织W4B 表达强度等级分别高于对照组(P <0. 05)，但PLGF 和IGF-1的表达强度等级分别低于对照
组(P<0.05)，且轻度组孕妇胎盘组织PLGF 和IGF-1的表达强度低于重度组孕妇(P <0.05) °结论：sF4B 、PL-
GF 及IGF-1的表达与PE 的病情轻重有关，这3项指标可能共同参与了 PE 病情的发生与发展。
［关键词］免疫组织化学；子痫前期；可溶性血管内皮生长因子受体、；胎盘生长因子；胰岛素生长因子B ；胎
盘组织
［中图分类号］R714. 0 ［文献标识码］A ［文章编号］2096-8388(2020))2-143345
DOI ：10.19367/j. 3kdi. 2096-3338.2020.12.713
Expression and Clinical Significance of sUlt-1, PLGF, and IGF-1
in Placesta of Paties-s with Preeclampsio
WEN Fany , HUANG Xiutao , LIO Yaowen , -I JimwW, LEI HouPany , ZHOU Jinnian
(Department g Gynecology and Obstetrico , tha Ajfiliatea Hospital g Guizhou Meaical University , Guiyang 550004, Guizhog , China)
［Abstrrcl - Objective : To investipaio the expression and clinicai significanco of solubio vascylar
e/dotheliai growth factor receptor-1 ( s/lt-1 ) , plxce/tai growth factor ( PLGF ) and insu/n growth factor-1 (IGF-1) in plgce/ta of yre/nani women with yreeclamysia ( PE ) - Methods : 25 casos with
severe PE and 5 casos with milb PE were colbcteh as severe PE gmup and milb PE gmup mspwt/Wy , and 30 normal b-o yre/nani women were sebcteh as the cootml gmuy. Plgce/tai tissuo
samples Uom the three gmup/ were taden , and the positive expression and intensity grado of sFlt-1 ,
PLGF , and IGF-1 in plgce/tai tissuo samplos were detecteh by immpnoPis/chemicxi method. Results :
The positive expression of sFlt-1 in plxce/tai tissuo of milb and severe PE gmup/ was highor than that of the cootml gmup , and increpseP with the aggravation of the disease ( P < 0. 09 ). The positive expression of PLGF and IGF-1 in placenta of milb and severe PE guops was bwar than that of the cootml gmup , white it was bwar in milb PE gmuy than in severe PE gmup (P < 0. 05). The
expression Uveis of sFlt-1 in plxca/ta of milb and severe PE gmup/ were highor than those of the
cootroi aroup ( P < 0. 09 ) . The expression in/nsFy of PLGF and IGF-1 in plxca/ta of milb and severe PE aroup were bwer than that of severe PE aroup ( P < 0. 49 ) , white it was bwer in milb PE
1433
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gmup than in severe PE gmup(P<7.25).Conclssion:The expression of sFh-1,PLGF,and IGF-
1is related to the seve/ty of PE,and the three indexes are/lvelved in the occurrence and diempmenl of PE.
[Key words]immunoOismchemistm;preeclampsiv(PE)；soluUle vascular endotheDal growth factor receptor1(s/U-I);placental growth factorf PLGF)；insulin growth factor1((GF-1)；placental tissues
子痫前期(preecmmpsm,PE)是妊娠期特有疾病，一般在妊娠22周后患者可出现血压升高、蛋白尿、水
肿，并伴头痛、眼花、胸闷、心慌、气促、恶心、呕吐和上腹不适等临床表现，严重影响了母婴健康，亦是导致孕产妇和围产儿死亡率升高的原因之一［「2。目前，临床对PE的病因及发病机制均尚未完全阐明，研究发现当胎盘从母体娩出后,PE所致的相关临床症状就减轻，甚至消失［5］，因此，胎盘异常在PE发病机制中的起着非常关键的作用。可溶性血管内皮生长因子受体-1(soluUle vascular endothelial growth factor receptor1,sFh-1)认为是抗血管生成因子，在PE孕妇的血循环中显著升高，可拮抗血管内皮生长因子3vascular endothelial growth factor,VEGF)和胎盘生长因子(placental growth factor,PLGF)等各种促血管生成的作用，并造成广泛的血管内皮损伤，是导致患者出现高血压、蛋白尿及水肿的主要抗血管形成因子，同时参与了PE的发生发展W-3。目前的研究表明，sFh-1可以作为PE的预测指标⑷。PLGF是在妊娠期起重要作用的蛋白，研究认为PLGF可以单独或与其他指标联合检查可用于预测早孕期PE的发生［］。胰岛素样生长因子(insplin growth factor-1,61-1)是一种胎盘蛋白，在胚胎和胎盘的发育方面有重要作用,PE孕妇胎盘中IGF-1较正常孕妇降低［］。相关研究表明，在PE患者胎盘组织中PLGF和IGF-1的表达均低，并且随患者病情加重有下降的趋势，胎盘组织中两者的表达呈正相关⑼，但尚未见s F/-1、PLGF及IGF-1同时用于PE孕妇的胎盘组织相关研究。故本研究通过分析PE孕妇胎盘组织中s FU-I、PLGF及IGF-1的表达水平和临床意义，探讨与PE的关系，为临床早期诊断该疾病提供了依据。
1对象与方法
1.1对象、主要试剂和仪器
1.1.1对象收集224年7月1日一274年5月31日本院产科住院分娩的重度PE孕妇25例作1434为重度PE组，轻度PE孕妇19例作为轻度PE组, PE的诊断标准参照文献：10］，要求此次妊娠为单胎、剖宫产分娩、且凝血功能正常。排除标准：妊娠合并糖尿病、肾脏病、心脏病、高血压等慢性疾病病史，既往有不明原因的习惯性流产、死胎、死产、胎儿畸形等不良孕产史，长期服用药物史及吸烟史等，本次怀孕合并急、慢性感染性疾病及证实胎儿有畸形。同时取正常晚期孕妇32例作为对照组。所有研究对象为自愿参加本研究，且签署知情同意书。
1.1.2主要试剂和仪器一抗sFh-4PLGF及IGF-1抗体(美国Abeam公司)，PBS缓冲液(pH 7.3)、枸椽酸修复液(pH6.7)、二氨基联苯胺(dia-minoUedzidine；DAB)、磷酸盐缓冲液(phosphate buffer saline,PBS)、乙二胺四乙酸二钠盐(ethymne diamine tetraacetic acid,EDTA)及显试剂盒(北京中杉金桥公司3。
1.2方法
1.2.1胎盘标本制作所有孕妇剖宫产术中胎盘娩出后，肉眼检查胎盘，若胎盘表面无明显病理改变，避开胎盘母体面的出血区与钙化区，取约200emX200emX200em全层胎盘组织，予009%氯化钠冲洗掉表面血液，4%的福尔马林固定24h，经脱水、石蜡包埋，用于免疫组织化学检测。
1.2.2免疫组织化学检测及结果判断采用免疫组织化学Envsiou二步法检测胎盘组织中sFh-1、PLGF及IGF-1的表达，其中阴性对照用PBS代替一抗。制备切片厚约0^m，经苏木精-伊红染法(hematoxylin-cosin staininy,HE)染判断切片的质量。免疫组化步骤如下：65°C恒温烤箱烤片1h，二甲苯脱蜡32min；梯度酒精水化至水，采用EDTA抗原修复液高温高压修复；分别加一抗sFae 4PLGF及IGF-1抗体(稀释比例分别为为1:207、1：187和1：47)，置于湿盒中0C冰箱过夜；次日，加二抗充分反应，DAB显。复染细胞核用苏木素32s，脱水于梯度酒精上进行；用二甲苯透明，中性树胶封片，染方法按试剂盒说明进行。各组孕
2期文芳等子痫前期患者胎盘组织中s F/W、PLGF及IGF-1的表达和临床意义
妇胎盘组织中s F/W、PLGF及IGF-1的免疫组织化学结果判定如下[1]，随机选取高倍视野5个，联合染的强度和阳性细胞百分比进行计分，其中染强度不着为0分、浅黄为1分、棕黄为2分及棕褐为8分，阳性细胞百分比小于5%为0分、6%〜25%为1分、26%〜56%为2分、阳性细胞百分比>56%为3分，然后取2者得分乘积为最终分数，规定0分为阴性<-),、〜7分为“+”，3〜4分为“++”，5〜2分为“+++”。免疫组织化学结果由2名高年资病理医师采用双盲法独立检测，取平均值++”及“+++”视为阳性表达。
12统计学分析
数据分析采用SPSS21.9统计软件。计数资料采用率表示，分类资料采用/检验和^,0)-Wallis检验进行分析，以P<0.05有统计学意义。
2结果
2.1sFIt-l、PLGF及IGF-1表达
sFItW、PLGF及IGF-1在胎盘滋养层细胞中主要表达于细胞质，染呈浅黄、棕黄或者棕褐样颗粒染(图1)o轻度及重度PE组孕妇胎盘组织s F/W阳性表达高于对照组，且随病情加重而增加(P<0.05)；轻度及重度PE孕妇胎盘组织中PLGF、IGFW的阳性表达低于对照组，且轻度PE 组孕妇阳性表达低于重度PE组(P<0.05，表1)o
sFlt-1
PLGF
IGF-1
对照组轻度PE组重度PE组图18组孕妇胎盘组织sFItW、PLGF及IGF-1的表达(Envision,x240) Fig.1The expression of shtt-1,PLGF,and IGF-1in placenta-tissues of8ym/ps
of hreynant women(Envision,x240)
2.2sFIt-l、PLGF和IGF-1表达
轻度及重度PE组孕妇胎盘组织s F/W表达强度等级均高于对照组(P<0.05)，但轻度与重度PE组孕妇比较差异无统计学意义(P>0.05)；轻度及重度PE组孕妇胎盘组织PLGF和IGF-1的表达强度等级均低于对照组(P<0.05)，且轻度组两项指标的表达强度低于重度组孕妇(P< 0.05，表2)o
235
贵州医科大学学报45卷
表1各组孕妇胎盘组织sFh-1、PLGF及
IGF-1的阳性表达：n(%)]
Tad.6CompaFsou of the positive expression rale of
sFh-1,PLGF,and IGF-1in placedtal tissues of3
gmups of pregnant women[n(%)]
指标阳性对照组轻度PE组重度PE组
表达(n=30)(n=15)(n=25)
s/G-I5(10.6)1)(73.3)5322(83.0)⑴⑵
PLGF24(80.0)6(40.0)5319(43.0)⑴⑵
IGF-12)(70.0)4(22.7)538(32.0)⑴⑵
注：t(3与对照组比较，P<0.05；53与轻度PE组比较,
P<0005。
表2各组孕妇胎盘中sFh-1、PLGF
和IGF-1表达[n(%)]
Tad.2CompaFsou of the intensity of sFh-1,PLGF
and IGF-1in placental tissues of3gmups
of pregnant women[n(%)]
指标表达对照组
(n=30)
轻度PE组
(n=15)
重度PE组
(n=25
s/G-I-25(8303)4(2606)3(120
刘子蔚+4(1303)7(4606)10(400
++1(304)3(2000)7(280
+++0(000)1(6.8)t(35(20.0)333 PLGF-6(2000)9(6000)13(520
+15(5000)5(3303)9(360
++7(2303)1(607)3(120
中国对日宣战+++2(607)0(0.0)530(0.0)3153 IGF-I-9(3000)1)(77.3317(680
+17(5607)4(22.2)7(280
呼唤绿荫
++3(1000)0(0.0)1(40
+++1(303)0(0.0)3330(0.0)33153注：⑴与对照组比较，P<0.05；⑵与轻度PE组比较，P <0005。
3讨论
由于PE可能会导致母儿的不良妊娠结局，故近年来PE成为妊娠期高血压疾病的研究重点［4］，相关研究认为PE的病因起源于胎盘，因早期各种因素引起胎盘缺血缺氧，胎盘缺血时分泌各类胎盘因子，广泛作用于母体血管内皮细胞，使母体肝脏、肾脏等全身多器官功能损伤，出现不良妊娠结局［5-/］。sFh-1具有酪氨酸激酶活性，能与内皮细胞表面受体VEGFR-1和VEGFR-2结合形成异源二聚体，可以通过抑制VEGF和PLGF的生物学活性，致血管生成障碍和血管内皮细胞损伤，从而1436抑制了血管生成［)。大量研究表明sFh-1可直接参与血管形成和胎盘绒毛浸润［4-&。有研究发现产后48h内sFh-1水平明显下降，提示过量的sFll-1可能来源于胎盘⑼。本研究检测胎盘中sF/-1的表达情况，结果显示,PE组孕妇胎盘组织sF/-1阳性表达率比正常妊娠组升高，差异有统计学意义(P<7.65)，跟既往相关报道一致，说明sF/-1在PE患者胎盘中的高表达在PE的发病过程中起着重要的作用。但是本研究中轻度PE组与重度PE 组比较，差异无统计学意义(P>7.75)，与既往研究报道不一致［2「25。分析导致这一结果的原因，考虑为本次研究样本量较小。根据文献报道,sFh-1参与PE的可能机制是sFh-1损伤血管内皮细胞后子宫内膜细胞及其它血管收缩，胎盘组织缺血缺氧，大量的活性细胞因子得到合成和释放，最终发生妊娠期高血压疾病，从而加重PE患者的病情［2］。
PLGF对滋养层细胞和VEGF功能具有调节作用U5〕。PLGF与酪氨酸酶受体结合后，可促进早孕时滋养细胞的增殖，增加血管通透性，促进新生血管生成「⑷。本研究显示病例组胎盘组织中PLGF 表达显著低于对照组，提示PLGF在PE患者胎盘组织中表达量很低。推测导致这一结果的原因可能为sFh-1与PLGF结合后刺激血管生成，从而出现了PE的相关临床表现。
IGF-1可促使血管内皮细胞释放凝酶原激活物，从而改善胎盘功能，刺激滋养细胞侵入、迁移以及舒张血管，参与血压调节［5。相对正常孕妇而言,PE孕妇胎盘中IGF-1的表达降低，这些改变与PE这种疾病密切相关［7］。本研究结果显示PE组孕妇胎盘组织中IGF-1表达较对照组明显下降，重度PE组较轻度PE组孕妇胎盘组织中IGF-1表达下降(P<7.75)，说明IGF-1与PE病情的严重程度有关。推测PE患者IGF-1在胎盘组织中表达下降的可能机制为PE时患者全身小动脉痉挛、胎盘缺血缺氧、供血不足，出现胎盘功能障碍，使得胎盘分泌的生长激素减少，因为妊娠期间IGF-1受血液循环中胎盘生长激素的调节，所以IGF-1的合成与分泌，导致IGF-1表达降低。
综上所述，胎盘组织中sFh-1、P1GF及IGF-1的表达与PE发生发展过程有直接关系，研究sFh-1、PlGF、IGF-1在PE发病中的作用，可为早期诊断和PE提供思路。
12期文芳等子痫前期患者胎盘组织中sF/B、PLGF及IGF-1的表达和临床意义
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(2020-09-01收稿，2020-11-04修回)
中文编辑：严征；英文编辑：丁廷森
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