简介：
过氧化氢酶(Catalase，CAT)又称触酶，是一类以铁卟啉为辅基的结合酶，由四个相同亚单位组成的四聚体酶，共含4分子的亚铁血红素作为辅基，分子量约为24KD。CAT能将细胞代谢产生的毒性物质过氧化氢迅速清除，可与GSH-Px共同保护巯基酶、膜蛋白、过氧化氢解离。
Leagene 过氧化氢酶(CAT)检测试剂盒(钼酸铵比法)其检测原理是血清或血浆等样本中在最佳酶反应条件下，反应后剩余的H2O2与钼酸铵形成稳定的黄复合物，其黄深浅与酶活性成反比，通过分光光度计或酶标仪检测吸光度。该酶的检测对于研究自由基代谢平衡，抗衰老和肿瘤发病机制具有一定的价值。50该试剂盒可检测23-25个样本。该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。
组成：
编号 名称 | TO1071 50T | T01071 100T | Storage |
试剂(A): H2O2基液 | 5ml | 10ml | 4℃ |
试剂(B): CAT Assay buffer | 52ml | 104ml | 4℃ 避光 |
试剂(C): MO显液 | 50ml | 100ml | 4℃ 避光 |
使用说明书 | 1份 |
| | | |
自备材料：
1、 蒸馏水、生理盐水
2、 比杯
3、 给据邮件分光光度计
操作步骤(仅供参考)：
1、 配制H2O2基液：本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2浓度约为。由于过氧化氢不是非常稳定，使用前需自行测定过氧化氢的实际浓度。把浓度约为的基液用本试剂盒提供的CAT Assay buffer稀释，使H2O2基液中的H2O2浓度约为。分光光度计测定A240(一般情况下，新配制的H2O2基液A240在0.45左右，经过3个月以后A240在0.42左右)，H2O2浓度(mM)=22.94×A240。进而计算出本试剂盒提供的H2O2基液中的H2O2的实际浓度。然后再根据实际的过氧化氢浓度，配制MH2O2基液。
1 细胞或组织样品：取恰当细胞或组织进行裂解，可以采用Leagene Western及IP细胞裂解液，如果有必要需进行适当匀浆，低速离心取上清，冻存，用于CAT的检测。
2 血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备，用生理盐水稀释后，可以直接用于本试剂盒的测定，尿液通常也可以直接用于测定，冻存，用于CAT的检测。
3 全血样品：收集适量的全血(whole blood)至一抗凝管内，颠倒混匀。取l全血冻融一次，用CAT Assay buffer1000倍后进行CAT检测。
4 血液中的红细胞裂解液：用抗凝管收集血液，颠倒混匀。取至少全血离心,弃上清，沉淀用预冷的生理盐水洗涤。用约倍细胞体积的预冷的去离子水，例如Milli-Q纯水，重悬细胞沉淀。使用前用CAT Assay buffer稀释后进行CAT检测。
5 高活性样品：如果样品中含有较高活性的CAT，可以使用CAT Assay 舆情管理buffer稀释。
6 (选做)样品准备完毕后可以用BCA蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度，以便于后续计算单位蛋白重量组织或细胞内的CAT含量。
3、 CAT检测：按照下表设置空白管、自身对照管、测定管，溶液应按照顺序依次加入，并注意避免产生气泡。如果样品中的酶活性过高，可以减少样品用量或适当稀释后再进行测定。样品的检测最好能设置平行孔。
如果使用分光光度计，反应体系设置如下：
加入物(ml) | 空白管 | 自身对照管 | 测定管 |
CAT Assay buffer | 0.1 | — | — |
待测样品 | — | — | 0.1 |
65mM H2O2基液(37℃预温5min) | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
立即混匀，水浴，准确孵育。 |
待测样品 | — | 0.1 | — |
MO显液 | 1.0 | 1.0 | 1.0 |
| | | |
如果使用酶标仪(不推荐)，反应体系设置如下：
加入物(ml) | 空白管 | 第二代测序 自身对照管 | 测定管 |
CAT Assay buffer | 0.01 | — | — |
待测样品 | — | — | 0.01 |
65mM H2O2基液(37bmw族℃预温5min) | 0.1 | 0.1 | 0.1 |
立即混匀， 37℃，准确孵育。 |
待测样品 | 老电工老王和李小燕— | 0.01 | — |
MO显液 | 中国气动网0.1 | 0.1 | 0.1 |
| | | |
4、分光光度计检测吸光度，分光光度计比杯光径0.5cm。如果没有分光光度计，亦可用酶标仪检测，但如果有条件，尽量采用分光光度计检测。蒸馏水调零，读取各管吸光度值。一般应数小时内检测完毕。
计算：
CAT活性单位的定义：在37℃ 1min催化水解1μmol过氧化氢量为一个CAT酶活力单位。根据酶活性定义，计算出样品中的CAT活性。
血清、血浆、尿液中CAT活力计算公式：
血清样品CAT活力(U/ml)=｛(A自身对照-A测定)/A空白｝×650×N
组织、细胞中CAT活力计算公式：
组织样品CAT活力(U/mg)=｛(A自身对照-A测定)/A空白｝×650/待测样品血红蛋白浓度(mg/ml)
式中：
A自身对照=自身对照的吸光度值
A测定=待测样品的吸光度值
A空白=空白的吸光度值
N=待测样品检测前的稀释倍数
注意事项：
1、 本试剂盒亦可用酶标仪进行检测，但检测的样本数相应增多。如果有条件，尽量采用分光光度计检测。
2、 待测样品中不能含有CAT抑制剂，同时需避免反复冻融。
3、 CAT Assay buffer如果出现浑浊或絮状物，应弃用。
4、 完整的红细胞以及未稀释的溶血液中的过氧化氢酶置于4℃一周仍然很稳定，稀释后的溶血液中CAT容易失活。
5、 尽量避免冰冻样品造成溶血，否则过氧化氢酶活性会下降10%-15%。
6、 血清样品室温下3天内活性下降64.7%，4℃下下降10.5%，-20℃保存30天活性仅下降3.5%。因此，待测样品均应-20℃或-70℃保存。
7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
有效期：12个月有效。
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议