自身抗体检测进入定量时代

——流式荧光技术应用

自身抗体检测是自身免疫病诊治中的重要工具，随着早期诊断、规范化的开展，自身抗体检测在疾病诊断、监测及预后评估中发挥的作用也日益受到重视，目前，自身抗体检测方法已不同程度实现了定量或半定量。随着检测技术的发展，高通量定量检测技术已成为自身抗体检测的重要手段和发展趋势。与定性检测相比，定量检测某些自身抗体不仅可以更好地辅助诊断AID，而且可以更有效地反映病情、预测疾病的发生和预后、监测效果。因此，尽管自身抗体定量检测仍存在诸多挑战，但毫无疑问自身抗体已进入定量检测时代。

黑龙江省医院放射免疫特检科紧跟检测技术的发展，率先于2015年末引进国际先进的全自动流式荧光检测仪（bioplex 2200，国内第4台），使放免科的抗核抗体谱、抗中性粒细胞抗体谱，磷脂谱率先实现了定量检测。

开展检测项目

大氮肥

分类	检测指标	临床疾病
ANA谱（抗核抗体）	dsDNA（抗双链DNA）	红斑狼疮
	核糖体蛋白	系统性红斑狼疮
	核染质	红斑狼疮，混合性结缔组织病
	SS-A（60KD）	干综合燥征,52KD与60KD的区分有助于指导临床区别用药
	SS-A（52KD）	干综合燥征,52KD与60KD的区分有助于指导临床区别用药
	SS-B	干燥综合征
	Sm（细胞核中的RNA结合蛋白）	红斑狼疮
	SmRNP（ RNA结合蛋白和核糖核蛋白结合蛋白）	红斑狼疮，混合性结缔组织病
	RNP A	混合性结缔组织病，红斑狼疮电子产品设计与制作
	RNP 68	混合性结缔组织病，红斑狼疮
	Scl-70（ DNA拓朴异构酶-1）	弥漫型硬皮病
	Jo-1（组氨酰-tRNA合成酶）	多肌炎
	Centromere B（抗着丝粒B抗体）	硬皮病、红斑狼疮
	ANA*
CCP	CCP（抗环瓜氨酸肽）	类风湿性关节炎早期标志青少年与法
血管炎	GBM（抗肾小球基底膜抗体）	血管炎
	MPO（髓过氧化物酶）	血管炎
	PR3（蛋白酶3）	血管炎
抗磷脂综合征	aCL（抗心磷脂抗体）	抗磷脂综合征
抗磷脂综合征	aβ2GPI（抗β2糖蛋白I抗体）

技术介绍

sqlite3

Luminex技术，又称流式荧光法（Flow fluorescence technique）、液相芯片（Liquid phase chip）等。是Luminex公司研发的xMAP（multi-analyteprofiling）多重解决方案，包括开放式结构的多重分析技术平台，被广泛应用于制药开发、临床诊断和生物研究。Luminex技术整合了荧光编码微球、激光检测、应用流体学、最新的高速数字信号和计算机运算法则等多项技术，真正实现了“高通量”检测，并荣获2005年度国际临床诊断技术革新奖。是唯一得到美国FDA批准的，也是唯一被纳入美国临床实验室质控网络的高通量诊断技术。被国际业界专家评价为临床诊断的趋势性技术之一。

1、融合多种先进技术

2、微球技术

每种磁珠表面含有不同荧光分类分级染料（CL1和CL2），可以被用来确定磁珠分析物。

3、高效的结合效率

磁珠悬浮反应体系提供了三维立体的抗原抗体结合方式，使得抗原抗体结合效率比常规产品提高了10倍以上

4、流式技术

（1）638纳米红激光可激发磁珠表面分类分级染料（CL1和CL2），这种复合信号可以被用来确定磁珠分析物。（2）绿532 nm激光激发荧光探针，这种信号检测要与分类激光产生数据相联系。

5、严格的CV控制

每种微球计满200个，计算这200个微球的平均发光值作为该种微球对应检测指标的最终检测值，等同于每个指标用ELISA重复做200次。并严格控制非识别微球的技术量，当未识别微球数目超过所有计数微球的30%时，该测试pass掉。

6、严密的全程质量监控系统

传统的质量控制采用平行质控，所谓平行质控就是质控品伴随检测样本同批进行。这种质控方式说白了就是用实验系统一贯的稳定状况来评价一批实验。其实质控只能确定我做的质控品是否在控制范围，在做质控的前后样本时有没有出现偶发性的状况导致质量问题，它无法监控。Bioplex 2200质控系统采用了并行质控，即在每个测试样本中都跟随3个质控指标，内质控ISB,空白对照质控RBB，样本检测质控SVB。三个质控微球的功能分别是，I

SB:检测仪器检测系统和试剂状况，如果ISB微球检测值不在控，该测试pass掉；RBB微球检测样本非特异结合情况，如果RBB微球测量值过高，仪器会给出警告；SVB微球检测血清或血浆中游离 XIIIb因子，其浓度变化可以展示不同检测样本间最小波动,如样本加样量足或样本存在其他异常，仪器会给出报警。

方法学比较

与绝大部分实验室采用半定量的免疫印迹法比较，流式荧光技术在保证高通量的前提下，有更高的敏感性和特异性，定量检测有更精准的反应病情变化，便于疗效观察和预后评估。

	机器人巡检流失荧光法	免疫印迹法（膜条）/酶联免疫法（ELISA）
自动化程度	全自动	半自动
快速、高通量	Bioplex2200采用类似流式荧光检测的原理，可以在每分钟完成10万个磁珠的检测，从实验开始最迟第45分钟可出第一个标本的结果，接下来每36秒出下一个样本的结果，所以1小时最多可完成100个标本、1300个指标（ANA谱）的检测。	目前市场上常见的自动化膜条仪一次检测最大通量都在50个标本以下，并且完成一次检测耗时在2.5小时以上； ELISA由于方法学限制，需要每次攒积样本达到90个（96孔板）以上操作才符合经济成本，并且每个孔只能检测1个指标，完成1个96孔板检测的时间最快也在2小时以上。
检测灵敏度、准确性高	BioPlex 2200平台样本中的特性抗体与磁珠上包被的抗原是在液相中滚动反应结合，每种磁珠高达800个，接触面积大且反应更加充分，并且每种指标每次检测扫描至少200个磁珠，相当于200次重复检测验证，结果加权计算，所以灵敏度及准确度更高。	ELISA及膜条检测是基于液相-固相的反应，存在抗原包被有效量不够，反应接触面小的缺点，从而造成结合不够充分，灵敏度及准确度相对低
稳定性	杨政宁BioPlex 2200配套试剂批内差（CV值）<><>	市场上的膜条和ELISA试剂批间差（%CV）都在20%左右甚至更高，批内差（%CV）在10%~15%（CV值越小，说明差异越小）
定量	BioPlex2200通过专业标准品制定标准曲线可以实现精确定量或半定量检测，目前在自身抗体检测方面有国际标准品的只有dsDNA（抗双链DNA）项目，在该项目的检测上BioPlex2200平台及配套试剂和WHO W/o标准品的相关系数（检测匹配度）超过99.9%，为目前市场上匹配度最高的数据	ELISA及膜条产品目前多数为定性检测。在半定量检测上膜条法目前是通过膜条反应后显与标准比卡颜比对，定量结果误差较大。
急诊检测	支持对急诊样本随时检测。仪器运行过程中随时有急诊样本可以“插队”检测，45分钟出结果。	不支持急诊样本检测。只能等上一轮实验结果后再进行检测。

本文发布于:2024-09-23 02:27:15，感谢您对本站的认可！

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