186
中西医结合心血管病杂志
Cardiovascular Disease Journal of integrated traditional
Chinese and Western Medicine工夫在诗外
莫里森公式
2019 年 1月 B 第 7 卷第 2 期
寒韩
Jan. B 2019 V ol. 7 No. 2
李 菲*，张雪纯，张镱山，宋宝丽
（郑州大学临床医学系，河南郑州 450052）
【摘要】目的 通过对苯丙酮尿症（Phenylketonuria，PKU）患者苯丙氨酸羟化酶（phenylalanine hydroxylase，PAH）基因突变的分析，为苯丙酮尿症的产前诊断、遗传咨询、和采取干预措施提供一定的科学依据。方法 应用PCR产物直接测序法对123例PKU患者PAH基因第1～13外显子及其两侧内
网络交友含子进行序列分析。结果 在123例患者的246个PAH等位基因中检测出了216个PAH基因突变位点，总检出率为87.8%（216/246），其中外显子3、6、7、10、11和12检出率相对较高。共发现59种突变，包括42种错义突变、8种剪接突变、5种无义突变、2种移码突变、2种同义突变。高频突变位点主要是p.R243Q（23.15%），p.R111X （8.33%），EX6-96A＞G（7.87%），p.R413P（7.87%）、p.V1399V（6.48%）。结论 PKU患者具有明显的突变热点（R243Q、R111X、EX6-96A＞G、R413P、V1399V）和突变热点区域（外显子3、6、7、10、
11、12）。通过PAH基因直接测序可对大部分的PKU家系进行产前诊断。
【关键词】苯丙酮尿症；苯丙氨酸羟化酶；基因突变；产前诊断
l6563
【中图分类号】R589 【文献标识码】A 【文章编号】ISSN.2095-6681.2019.2.186.03
苯丙酮尿症是一种氨基酸代谢异常的常染体隐性遗
传病[1]。主要由于苯丙氨酸羟化酶基因突变导致PAH活性降低或丧失，使苯丙氨酸不能转化为酪氨酸，导致血液中苯丙氨酸（phenylalanine，Phe）浓度增高并在神经系统和血液中蓄积。PKU患者如未及时，将由于过量的Phe及其代谢产物的神经毒性作用而导致严重的智力障碍、精神发育迟滞和继发性癫痫等。PKU的发病率有种族和地区差异[2-6]，我国约为1/11144[7]，且PAH基因突变具有
相对突变热点及突变热点区域，因此可以通过对PKU患者进行基因诊断分析，了解各种突变的种类和分布，了解所研究的人中PAH基因相对突变热点和突变热点区域，进而对产前诊断和提供一定科学依据。
1资料与方法
1.1 一般资料
230例PKU患者，来自郑州大学第一附属医院产前诊断中心遗传咨询门诊，其中，男123例，女107例，年龄16天～37岁。230例患者来自230个无关家庭，所有患者的父母均非近亲结婚。这230例患者前血苯丙氨酸浓度Phe＞480 μmol/L，平均（915.52±513.66），通过Phe负荷试验和尿蝶呤分析结合临床症状排除了四氢生物喋呤缺乏症。
1.2 方法
1.2.1 DNA提取和PCR扩
抽取患者的外周血并用EDTAK2抗凝，-20℃储存。200名正常DNA来自实验室积累的健康无血缘关系个体。采用北京天根D315DNA分离试剂盒提取采集的抗凝外周血样品中的DNA。参照文献[2]设计PAH基因第1～13外显子的引物。常规PCR扩增条件：95℃5 min热变性，94℃变性30 s，55～62℃
复性30 s，72℃延伸45 s，共30个循环，72℃延伸10 min。PCR反应在美国ABI公司Verteri梯度PCR仪上完成。PCR产物用2%琼脂糖检测。
长泾中学1.2.2 DNA序列分析
采用PCR产物直接测序法对样品中DNA进行序列分析。PCR产物的纯化和DNA序列分析由上海生物工程科技有限公司应用美国ABI公司3730XL全自动DNA序列分析仪完成。所有PCR产物均采用正反向测序。
2结果
2.1 PAH基因突变的检出率
通过对123例PKU患者PAH基因外显子和内含子分析，在246条染体中共检测到216个突变（表1），总检出率为87.8%。所有患者均检测到突变基因，其中93个人检测出2个突变位点，占75.6%。30个人检测出一个突变位点。
2.2 PAH基因突变种类
检测到的216个突变分属59种突变，其中错义突变42种、剪接突变8种、无义突变5种、移码突变2种、同义突变2种。
2.3 PAH基因突变分布特点
患者突变主要分布在第3，6，7，10，11，12外显子，其中第7外显子检测到的突变最多，共12次。其次为第11外显子，共9次。第12、10、3、6外显子分别为7、6、5、5次。
2.4 PAH基因高频突变位点
突变频率最高的是p.R243Q，共检测到50次，p.R111X 检测到18次，EX6-96A＞G检测到17次，p.R413P检测到17次，p.V1399V检测到14次。见表1。
表1 123例PKU患者PAH基因突变构成
编号碱基改变氨基酸改变位点突变性质等位基因比例
1 c.47_48delCT p.S16Terfs第1外显子移码突变10.46%
2 c.158G＞A p.R53H第2外显子错义突变4 1.85%
3 c.168G＞A p.E56E第2外显子同义突变10.46%
4 c.212G＞A p.R77H第3外显子错义突变10.46%
5 c.242C＞A p.T81N第3外显子错义突变10.46%
6 c.301G＞A p.D101N第3外显子错义突变10.46%通讯作者：李菲，邮箱：1162225982@qq
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议