病理组织的固定

病理组织的固定
测试44凡需要进行病理组织学检查的标本(器官或组织),于离体(活体或尸体)后,应尽快置放(浸泡)于装有足够量固定液的容器中固定。固定液量应为被固定标本体积的5~10倍。置放标本的容器大小视标本和固定液的体积而定,应适当大一些。临床科室切取的标本置放于容器中固定后,应尽快送交病理科继续固定。未能及时、充分固定的干涸或腐败标本不能再进行固定和用于制做切片。
常规固定液为4%中性甲醛(10%中性福尔马林),应预先多量配制贮存,以备随时使用。小标本的固定时间为4~6小时,大标本为18~24小时或更久。
根据病理学特殊检查(特殊染和组织化学染、免疫组织化学染和原位核酸分子杂交染、电镜观察等)的需要,应选用其他适宜的固定液进行固定[参见后述的“㈦固定液的常用种类和制备”]。
器官、组织固定的基本方法
1.食管、胃、肠、胆囊、膀胱等空腔器官:依规范方法剪开后,按其自然状态平铺于硬纸
板上(重点暴露黏膜面或内表面的病变处),并用大头针将标本边缘处固定于纸板上,然后放入4%中性甲醛中固定(黏膜面或内表面朝向容器的液面,并覆盖薄层脱脂棉)。
2.肝、脾:由器官背面,沿其长轴每间隔1.5~2.0cm纵向平行剖开,切成数片。将每片肝或脾轻轻地平放于装有4%中性甲醛的容器中,容器底面衬以脱脂棉。应避免标本弯曲和相互间的叠压。
3.肺叶:放入固定液中的肺叶漂浮于液面,需在肺表面覆盖薄层脱脂棉。必要时从支气管注入适量4%中性甲醛。
4.肾:沿肾外缘中线朝肾门方向作一水平切面(深达于肾盏),再行固定。
5.淋巴结:先用4%中性甲醛固定1小时后,再沿其长轴切成数片(厚2 ~3mm),继续固定。
6.骨组织:先锯成小片(若是长骨应作横向锯片),在4%中性甲醛中固定24小时后,再进行脱钙。
7.微小组织或液体沉淀物:先用拭纸或滤纸妥为包裹(需用大头针扎牢),然后放入专用小盒内进行中性4%甲醛固定,以防检材遗失。
8.凡进入固定程序的标本必须连带其正确无误的病理检验号(病理号)。
多数固定液对人体有害,需要防护,必须在封闭的通风条件下进行操作。
浙江大学校医院陈文备采果器㈥组织块的切取和固定:①由较大标本切取用于制作切片的组织块(取材)时,应与标本的断面平行,组织块厚度一般为0.3 cm(不应>0.5cm),面积一般在1~1.5×1~1.5以内。②切取组织块的形状,在充分包括肉眼病变的前提下尽量规则些(例如方形、矩形、三角形等);由一个标本切取的多块组织的形状有所不同,便于蜡块与其相应切片的核对。 ③固定组织块的固定液量,一般应为组织块总体积的5~10倍以上。④室内常温(25℃左右)下的固定时间为3~24小时;低温(4℃)下的固定时间应延长。⑤固定组织块的容器要大一些。⑥组织块固定期间需要间断地轻摇或搅动固定液以利于固定液的渗入。
副乳腺㈦常用固定液
1.4%中性甲醛(10%中性福尔马林)固定液
锂合金甲醛(40%) 100 ml
无水磷酸氢二钠 6.5g
磷酸二氢钠 4.0g
蒸馏水 900ml
2.乙醇-甲醛(酒精-福尔马林,AF)固定液
甲醛(40%) 100ml
95%乙醇 900ml
[说明]一般组织块经乙醇-甲醛固定1~2小时后,即可移入95%乙醇内脱水。
3.Carnoy固定液
无水乙醇 60ml
氯仿 30ml
冰醋酸 10ml
[说明]组织化学染的常用固定液,组织经Carnoy液固定1~2小时后,即可移入无水乙醇
中脱水。
4.Zenker固定液
5.0g
重铬酸钾 2.5g
牛津大学校长硫酸钠 1.0g
蒸馏水(加至) 100ml
[说明]配制本液时,先将溶于蒸馏水中、加温至40~50℃溶解后,再加入重铬酸钾,最后加入硫酸钠,贮存待用。使用前加入5ml冰醋酸,混合。组织块需固定12~24小时。切片染前,需进行脱汞沉淀处理。
5.Bouin固定液
饱和水溶液(约1.22%) 75ml
甲醛(40%) 25ml
冰醋酸 5ml
[说明]本液临用时配制。组织块置于Bouin液固定12~24小时即可(小块组织只需固定数小时)。经Bouin液固定的组织被染成黄,可用水洗涤12小时后进入乙醇脱水(兼脱)。不必将组织中的黄除净(残存于组织中的无碍染)
6.过碘酸-赖氨酸-多聚甲醛固定液(PLP)
A液:赖氨酸 1.827g
蒸馏水 50ml
0.1mol/L磷酸盐缓冲液(pH7.4) 50ml
B液:8%多聚甲醛水溶液 100ml
[说明]本液临用时配制:取A液3份、B液1份,混合后,加入过碘酸钠,使液体终浓度为
2%。组织块在4℃下固定36~54小时。本液对细胞结构和抗原性保存较好。
7.B5(醋酸钠--甲醛)固定液
无水醋酸钠 1.25g
6.0g
蒸馏水 90ml
[说明]将以上物质混合、溶解,使用前加入甲醛10ml。本液多用于固定淋巴组织。染前应进行脱汞沉淀处理。如不加甲醛称为B4固定液(蒸馏水为100 ml)。
8.丙酮固定液
冷丙酮(4℃)固定液用于酶组织化学染。细胞标本的免疫组化染也常用冷丙酮固定1
0分钟。

本文发布于:2024-09-22 06:40:35,感谢您对本站的认可!

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