doi：10.3969/j.issn.1002-7386.2020.24.001-论著-RhoA/ROCK-NF-KB信号传导通路介导内脂素诱导的 常亮徐璐刘素云郭炳彦金鑫贾妍李拥军
【摘要】目的研究內脂素引起心肌细胞炎性反应相关机制。方法提取2~3dSD乳鼠原代心肌细胞，培养
后按照实验设计分组为(2)正常对照组，12、52、102ng/ml浓度的重组內脂素，干预24h；(2)正常对照组,102ng/ml
重组內脂素分别干预12、24、48、72h；(3)正常对照组、重组內脂素100n//ml、SN50(24|±mol/L)、SN50(20pnol/L)+
重组內脂素100n//mJ，干预48h；(4)正常对照组、重组內脂素100n//m、、Y27632(12pmol/L)、Y27632(10pmol/L)
+重组內脂素100n//mJ、辛伐他汀(1pmol/L)、辛伐他汀(1pmol/L)+重组內脂素120n//mJ，干预48h。(5)正常对
照组、重组內脂素120n//ml、、irtinol(240pmol/L)、sirtinol(200pmol/L)+重组內脂素120n//ml，干预24h。，并予相
应的干预。应用Real time-PCR检测心肌细胞TNF-ct mRNA表达，应用MTT法检测心肌细胞活力，Western blot法检成都胡玲门
测心肌细胞Sine蛋白表达。结果心肌细胞TNF-P mRNA表达随內脂素浓度的升高而升高,120n//ml时最高；0D
值在浓度为10n//ml时最高，50n//ml、100n//ml时降低，且100n//ml时明显低于正常对照组(P<0.05)。
100ng/ml內脂素干预心肌细胞48h时TNF-pmRNA达到峰值,0D值在12h时与正常对照组比较，差异无统计学意义
(P>0.05),24h后开始降低，与正常对照组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。应用sininol预干预心肌细胞后用
100ng/ml內脂素干预心肌细胞24h，sirtinol+重组內脂素干预组心肌细胞0D值明显低于正常对照组，高于
100ng/ml內脂素干预组(P<0.05)。心肌细胞Sirtl蛋白表达水平随着內脂素干预浓度的升高而升高，100ng/m/內
脂素干预48h后达到峰值,72h时继续升高，但是较48h组差异无统计学意义(P>0.05)。加用SN50、sininol和
Y27232预干预组的心肌细胞TNF-p mRNA水平明显低于单纯內脂素干预组，高于正常对照组(P<0.05)。结论內
脂素可以直接诱导心肌细胞炎性反应，可能与RhoA/ROCK4-NF-pB信号有关。內脂素诱导的适量SIRT1表达增加对
心肌细胞具有正性作用。
【关键词】RhoA/ROCKNF-pB信号传导通路；心肌；炎症反应；內脂素；肿瘤坏死因子a
【中图分类号】R542.0【文献标识码】A【文章编号】1002-7386(2020)24-3685-06
The action mechanism of RhoA/ROCK-NF-icB signaling pathway mediating visfatin induced cardiomyocyte inflammatory reechon in v itro CHANG Liang,XU Lu,HU Suyun,et al.Department of Cardiology，Hie Second Hospital of
Hebei Medical UniversPa，HPP,Se7reurg050000,CeOa
【Abstdct]Objechvv To investigate the action mechanism of RhoA/ROCK-NF-pB signaling pathway mebiating
visfatin induced cardiomyocyte inflammatorn reacticm i n vitro.Methods The prinarn myocardil cell/of SD such/no rats
(2〜3of age)were extracted,which,after caltureb,were divided inti nronps accrdin/t。experimeat desnn.Red time-PCR
wts used te detect the expressicm levels of TNF-pmRNA in cardiomyocytes,MTT wts used te detect the viability of cardiomyocytes,ane Western blot wts used te ietect the expressicm levels of Sinl protein in cardiomyocytes.Results The expressicm levels of TNF-p mRNA in cardiomyocytes were increased with thv increase of lipoprotein concexUation,which wts
the highest c1120n//mlthe O D value wss highest c1the concexUation of12n//ml/whica wss decreaseX c150n//ml aO
12011//ml，which in the concexUation of120n//ml was significanUy lowva than that in control hropp(
P<0.05).TNF-p
锚杆机mRNA reached a peak ai12011///1111in cardiomyocytes after48-hopa intervextion,aO the OD value was noi significanUy
dinerext from that in control hropp after12-hour intervexUon(P>0.05),bet which was decreaseX after24-hour intervexUon，
which was significanUu dinerext from that in control hropp(P<0.05).After the preintervexUon of cardiomyocytes with
SIRT1,thex the cardiomyocytes were interfereX by120n/Zml lipoprotein for24h,the OD value in simvastatin+recombinani
lipiPonv11606x001/^卩 was significanUu loweo than that in cop U p I /^卩and higheo than that in10011//ml
项目来源：国家自然科学基金面上基金项目(编号:81575345)；国家自然科学基金青年科学基金项目(编号：81405417)；河北省自然科学基金项目(编号:H2212226339)；河北省科技支撑计划项目(编号：13477726)
作者单位：655006石家庄市2可北医科大学第二医院心内科
通讯作者：李拥军,255005石家庄市，河北医科大学第二医院心内科；
E-mail：lyjbse51@178
nneeeeenenon/eoep(P<0005)0Moeeoeeeeheeppeessnon levels of Sirtl protein were increased with the increase of the concextration of lipolipin，and the peak of 10011//ml lipoprotein was at48h after11x611001，whnahaonenneeieonnaeeaseae74h beeeheeeweeeno significant differences,as compared with those in48h (P>0.05).In addition the levels of TNF-p mRNA in preintervextion with SN50,sirtinol and Y47634weeesn/nntnaanhy oweehhanhhosenn npnionep
treated group,which were s ignificantly higher than those in controJ group(P<0.05).Conclusion The visfatin can directly induce the inaammatory reaction of cardiomyocytes,which may be related te RhoA/ROCK2-NF-KB signaling.And the visfatin indpced increase of SIRT2expression has positive effects on cardiomyocytes.
【Key words]RhoA/ROCK-NF-NB signalinn pathway；myocardial；inCammatory realtion visfatin；tumor necrosis factor alpha
据不完全统计，全球每年死于心血管疾病和卒中的人数约占所有死亡的2/3。如何通过有效的手段降低心血管疾病发病率与病死率，已经成为重大公共卫生问题⑴。病理性心肌肥大是心血管疾病发病率和病死率增加的独立性危险因素，可导致心肌重构，心肌收缩功能下降，在细胞层面主要表现为心肌细胞表面积增大，伴有细胞凋亡、心肌纤维化等不可逆过程，与心脏猝死、冠心病和心力衰竭关系密切。其具体病理机制仍有待进一步阐明。近年来有大量研究报道，炎症在循环系统疾病中发挥重要作用，多种效应的炎性细胞因子如肿瘤坏死因子(TNF-n)、白介素-10(IL-10)可诱导心肌肥大反应［4］0内脂素最初是从活化的外周血淋巴细胞中分离出来的，与B淋巴细胞的成熟相关，又称前B细胞克隆增强因子。内脂素不仅是脂肪细胞特异的蛋白，还是一个重要的前炎性因子。已有报道显示，肥胖、代谢综合征、糖尿病、高血压等疾病患者的血浆内脂素水平升高，且与促炎因子水平密切相关，体外实验证实，胞外内脂素可通过Nampt活性促进血管炎症［3］。闫伟等⑷研究认为，内脂素在肥胖、胰岛素抵抗、2型糖尿病等代谢性疾病中充当一种炎性标记物及致内膜损伤性物质，还参与心血管疾病的细胞增殖、单核巨噬细胞激活与招募、血管炎症及细胞外基质重构的病理过程，参与冠心病的发病过程，并与冠状动脉病变严重程度密切相关⑷。本研究前期表明，心肌细胞内脂素mRNA和蛋白表达在An；□诱导的心肌细胞肥大中的增加，并呈剂量和时间依赖性的增加⑸。炎性细胞因子级联反应在心力衰竭、动脉粥样硬化的发生发展具有重要作用。目前，笔者尚未见有关内脂素与心肌细胞炎性反应在心肌肥大中的研究。本实验拟通过体外实验观察外源性内脂素干预下的小鼠心肌细胞中炎性因子的变化，结果如下。
2材料与方法
2-1实验动物清洁级2~3d龄SD乳鼠，雌雄不限，河北医科大学实验动物中心提供。
21主要试剂多聚甲醛固定液、辛伐他汀，美国Sigma公司产品；多聚左旋赖氨酸，购自美国AMRESC0公司；重组大鼠内脂素为Abeam公司；NF-k B抑制剂SN50、ROCK抑制剂Y27632、SirtinoP均为美国san t h crez公司产品；SP免疫组化试剂盒，美国Zymed Laaoratorics公司产品;DMEM培养基、H型胶原酶干粉，为GILCO公司产品；D-Hanis平衡盐溶液、胎牛血清，购自北京索来宝科技有限公司；胰蛋白酶干粉，为美国HycPna公司产品；双抗培养基，美国英杰生命技术有限公司产品;5-漠脱尿苷、ROCK4兔抗鼠一抗、RhoA兔抗鼠一抗、、LB a兔抗鼠一抗、p65兔抗鼠一抗，均为SANTA CRUZ公司(美国)产品；总RNA 提取试剂(TO zo I法)，购自北京SBS公司；琼脂糖，北京北方同正生物技术发展有限公司；四甲基偶氮唑蓝，美国HyClone公司；SYBR Greer核酸染料，美国复能基因有限公司。
2.1主要仪器NIKON倒置显微镜，日本/Nikon(尼康公司)；恒温振荡器THZ-C，江苏太仓试验设备厂; TDLN2台式高数离心机，上海安亭科学仪器厂; MCO276型CO2培养箱，日本SANYO公司；StedOne美国ABI StepOne™实时荧光定量PCR仪,ABI公司。
21方法
2-4.2心肌细胞提取及培养：新生大鼠仰卧固定, 75%乙醇皮肤消毒后，剪开皮肤，暴露皮下组织，在无菌条件下开胸摘取心脏。取心尖区心室肌组织2mm3放入平皿中，加入4ml0.46%胰消化酶于恒温振荡器(32°C~37°C)搅拌5min后，静置2min，自然沉淀，弃上清。沉淀再次消化，反复2次后，取上清于无菌离心管中，加入含有12%胎牛血清的低糖DMEM4mi终止胰酶作用，重悬后离心，弃上清。反复3次。结束后，收集离心后的心肌细胞，充分重悬、过滤，转入培养皿中。利用差速贴壁法分离出心肌细胞，收集细胞悬液，常规使用5-CrdU抑制成纤维细胞的干扰。将上述方法得到的细胞悬液细胞计数后置于培养箱中37C孵育90min备用。
2.4.4分组及干预方法：按上述方法心肌细胞原代培养48h后，换无血清培养液体再培养24h后，将细胞每5孔分为2组，换培养基的同时进行分组，分别加入不同的干扰因素进行实验。①正常对照组，10、55、120ng/ml浓度的重组内脂素，干预24h;②正常对照组,100ng/ml重组内脂素分别干预12、24、48、72h；③正常对照组、重组内脂素20ng/mi、SN50(22pnoPL)) SN50(22»moPL)+重组内脂素120ng/mi，干预46h；
④正常对照组、重组内脂素20ng/mi、Y27632
(12pmol/L)、Y27632(12pmol/L)+重组内脂素
102nh/ml、辛伐他汀((pmol/L)、辛伐他汀(1pmol/L) +重组内脂素H a/ml，干预48h;⑤正常对照组、重
组内脂素122ng/ml、sirtinol(222pmol/L)、silinot (202pmol/L)+重组内脂素H nh/ml，干预22h。1.4.3Real-time PCR法检测心肌细胞TNF-p mRNA 表达：分别吸取细胞培养板中培养液,TVzot裂解细胞提取心肌细胞总RNA，用分光光度计测定所抽提RNA 的浓度和纯度，使用前调整浓度为1pg/p。取上述总RNAl~5p/按照说明书进行逆转录合成cDNA (42°C5。min,95°C5min)。取逆转录转录产物按试剂盒说明书进行Real-timx PCR反应。RT-PCR产物4p l，加上样缓冲液1P进行1.5%琼脂糖凝胶电泳，凝胶成像后用凝胶图像分析系统进行吸光度扫描。结果分析以GAPDH为内参基因，采用相对定量2p A Ct计算TNF-p mRNA相对表达量。
1.4.4MTT法检测心肌细胞活力：吸去培养基,PBS 洗3次，心肌细胞以1x125/ml密度种植于99孔细胞培养板中，每孔加入5m/ml MTT溶液，培养箱内继续孵育4h，之后每孔加入100p l的DMSO，震荡2ml。用Bio-Rad552型酶标仪，在442nm波长检测其光吸收值(OD)。
1.4.5Western blot法检测心肌细胞Sli2蛋白表达：收集胰酶消化的心肌细胞，用细胞裂解液于冰上裂解30ml，并抽提总蛋白，BCA试剂盒测定蛋白质含量。将蛋白加入2倍的上样缓冲液,102C煮沸5ml，使蛋白变性12002r/min离心5min，收集上清进行SDS-PAGE电泳，染，电转至PVDF膜，封闭液(5/脱脂奶粉溶于102ml TBST)室温封闭1h，分别加入特异性一抗,4°C孵育过夜,TBST洗膜，加相应二抗室温孵育2h,ECL显后扫描，拍照，用GDS-8002凝胶成像分析分析目的条带的吸光度值，以GAPDH为内参。
1.5统计学分析应用SPSS13.0统计软件，计量资料以斤土s表示，应用单因素方差分析及StuCexi-Newmaa-Kexls'检验进行组间的两两比较,P<
2.05为比较差异有统计学意义。
2结果
2.0TNF-p mRNA表达结果24h后心肌细胞TNF-
a mRNA表达量随内脂素浓度(12、52、102nh/ml)的升高而升高,1020/1111浓度时最高。随后，用12!1//皿内脂素干预心肌细胞12、24、48、72h，检测显示，心肌细胞TNF-p mRNA表达随着干预时间的延长而升高，且以干预48h后达到峰值,72h后较48h时略有升高，但差异无统计学意义(P>2.25)。见表1、2。
n=6，丘土s 表1不同浓度内脂素对心肌细胞TNF-p mRNA表达的影响
组别TNF-p mRNA
正常对照组
内脂素(nh/ml)
1
10 1.033土0.139
50 2.083土0.222*
1000.560土0.032*注：与正常对照组比较，*P<0.01
表4102a/ml内脂素不同作用时间对心肌细胞
TNF-p mRNA表达的影响n=6,x土s 组别TNF-p mRNA
正常对照组
120a/ml内脂素
1
三教九流图12a 1.332土0.155*
24a0.560土
48a 3.675土。^厶。*
72a 3.812土0.296*
注：与正常对照组比较，*P<0.01
2.0内脂素对心肌细胞活力的影响用不同浓度(12、52、102a/ml)的内脂素干预心肌细胞24h结果显示，0D值在内脂素浓度为12ng/ml时最高，52、122ng/ml时降低，且122a/ml时低于明显低于正常对照组(P<2.25)。用22ng/ml内脂素分别干预心肌细胞12、24、48、72h，检测显示h组心肌细胞OD 值与正常对照组比较差异无统计学意义,24h后开始降低，与正常对照组比较差异有统计学意义(P< 2.05)。应用SIRT2特异性阻断剂sininol(202pmol/L)预干预心肌细胞，24h后检测显示，siniaot (222pnol/L)+重组内脂素干预组心肌细胞0D值明显低于正常对照组，高于22ng/ml内脂素干预组(P<2.25)。见表3~50
表3不同浓度内脂素对心肌细胞活力的影响
n=6,X土s 组别0D值
正常对照组
内脂素
0.281土0.051
10n//ml0.505土0.063*
50n//ml0.553土0.085
100a/mi0.577土0.043*注：与正常对照组比较，*P<0.01
表422a/ml内脂素不同作用时间对心肌细胞活力的影响
n=6,X土s 组别0D值
正常对照组
120a/ml内脂素
0.288土0.031
12a0.278土0.054
24a0.213土0.062*
48a0.211土0.066*
72a0.201土0.051*
注：与正常对照组比较，*P<0.01
2.3内脂素对心肌细胞SIRT1蛋白表达的影响心肌细胞Sim2蛋白表达随着内脂素浓度的增加和干预
表5 Sirtinol 对心肌细胞活力的影响 n =5, x±s
组别OD 值
正常对照组0.761 土 0.451内脂素组
0.575 土 0.043 *Sikinni 组
0.776 土 0.431Sikinni +内脂素组
0.737 土。.。彳。*
注：与正常对照组比较，*P<0.01
时间的延长升高,100 ng/ml 内脂素干预48 h 时最高,
72 h 时仍高于正常对照组，但较48 h 组比较差异无统
计学意义(P>0.05)o 见表6、6，图2o
表6不同浓度内脂素对对心肌细胞Sir 2蛋白表达的影响
n =6，丘 土 s
组别
正常对照组 内脂素
10 n/3mi 50 n/3mi
20 "//帕
Sik 2蛋白表达0.464 土 0.012
0.369 土 0.412 *0.412 土 0.404 *
0.643 土 0.440*
注：与正常对照组比较，*P<0•01
表6 lOOn/ml 内脂素不同作用时间对心肌细胞
Sik 2蛋白表达的影响
n =6, X ± S
组别
正常对照组 100 n/ml 内脂素12 h 22 h
Sir 2蛋白表达
0.275 土 0.012
0.363 土 0.034*
0.651 土 0.032#注：与正常对照组比较，*P<0•05,#P<0•01
46 h 0. 804 土 0.046#72 h
0. 896 土 0.033#
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湖南电力客户服务中心72h
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YnfatiiuonreiianiiDii
A B
图2内脂素对心肌细胞SIRT 2蛋白表达的影响
注：与正常对照组比较,12 ng/mi,55 n/ml 和HO ng/mi 内脂素处
理2 h 心肌细胞中Sik 2蛋白表达及120 n/mi 内脂素处理12,22,48
和74 h 心肌细胞中Sik 2蛋白表达，* P <5.55,#P<5.42
2.4 RhoA/R0CK4和NF-c B 通路在内脂素诱导的心
肌细胞炎性反应中的作用分别应用辛伐他汀、
Y27632和SN50预干预心肌细胞，随后应用100 n/ml
内脂素干预心肌细胞46 h 后，检测心肌细胞TNF-c
mRNA 水平。结果显示，加用SN50、辛伐他汀和 Y27636预干预组的心肌细胞TNF-c mRNA 水平明显
低于单纯内脂素干预组，高于正常对照组(P<0. 45) o
见表6、9，图2。
表8 SN50对心肌细胞TNF-c mRNA 的影响
n =6 ，丘 土 s
组别TNF-c mRNA
正常对照组
2
内脂素组 3.776 土0.335 *
SN5。组
1.⑶ 土 0.
SN50 +内脂素组
2.821 土 0.221 *#
注：与正常对照组比较，*P<0.01；与内脂素组比较,#P<0.01遇罗锦
表9 辛伐他汀、Y47632对心肌细胞TNF-c mRNA 的影响
n =6 , X 土 s
组别TNF-c mRNA
正常对照组
1
内脂素组
3.295 土0.435 *
辛伐他汀组
1.093 土 0. 111辛伐他汀+内脂素组
2.016 土0.222 *#
Y27632 组
1.154 土0.119Y27632 +内脂素组
2. 111 土0. 193 *#
注：与正常对照组比较，*P<0.41；与内脂素组比较,*P<0.01
A B
有一种新型节能灯
图4 RhoA/ROCK2和NF-c B 通路内脂素诱导的心肌细胞炎性反应的
影响；与正常对照组比较，* P<0.42；与内脂素组比较,#P <0.42
3讨论
内脂素是由内脏脂肪细胞分泌的一种脂肪细胞因
子，是由FuPuhao 等⑷于2205年发现，人体内脏白 脂肪组织含有大量巨噬细胞，巨噬细胞是参与炎性反
应的主要细胞。因此，有研究认为内脂素可能是一个 重要的前炎性因子，在炎性反应中发挥重要作用。高 浓度的IL-C 参与了炎症的发生发展，冠状动脉的粥样
硬化的病理特征是冠状动脉管壁的慢性炎症反应,IL-
是其发生发展过程的重要促炎因子，冠心病患者血 浆IL-C 水平与内脂素水平正相关［7］0肥胖是通过脂
肪细胞分泌的促炎细胞因子如TNF n 、ILN 与全身性 炎症密切相关。在肥胖和2型糖尿病(T2DM )患者 中，在内脏和皮下脂肪组织都有强烈的促炎活性因子。
内脂素可显著诱导单核细胞中CDN0、CD40以及
ILAM-1 (CD54)的表达，从而激活T 细胞，来诱导和调
节免疫功能［6］0庞欣欣［9］研究显示，肠黏膜炎症疾病 中有大量内脂素的表达，推测内脂素作为炎性介质可
能参与肠黏膜损伤的过程，从而影响肠黏膜屏障。且
LPS 刺激时，沉默TLR4.TLR2和IL-1R2同样会引起
炎性因子的表达下降，进一步说明LPS 介导的炎性反
应中，内脂素的表达与TNF-p jn-ip和in-p等炎性因子表达有关⑼。Hex等［10］用内脂素处理HepG2细胞后，通过实时聚合酶链反应（RT-PCR）和HepG2细胞的免疫细胞化学染评估炎性细胞因子IR-P,TNF-p 和IR-i p mRNA的表达，结果显示,222和456ng/ml，浓度干预的HepG2细胞中IL-6,TNF-p和IL-10mRNA 的表达显著增加，进一步检测显示内脂素能通过HepG2细胞中的STAT3和NF-pB途径诱导促炎性细胞因子IL-6,TNF-p及IL-ip生成。最新研究已经表明，炎症是动脉粥样硬化发生的基础，而内脂素在炎症和动脉粥样硬化中起作用。Darab等［11］检测结果显示，升高的血清内脂素可能通过促进炎症参与ACS的发病机制，在急性冠脉综合征中其水平与炎症状态相关。心肌肥大已被公认为是猝死、心力衰竭等心血管事件强有力的独立危险因素。介导心肌肥大的信号转导通路有多条，各个通路之间可能存在错综复杂的联系。TNF-p是炎性细胞因子之一，具有多种效应，已经被证实在心肌肥大和重构过程中具有重要作用g o 据报道，TNF-p能够通过激活的PRIKRPR-Ca2+途径、抑制细胞内钙
及钙调节的钙调蛋白激酶诱导乳鼠心肌肥大g o在本研究中发现，内脂素可以诱导心肌细胞TNF-pmRNA表达增加，并有剂量和时间依赖性升高。推测内脂素可以直接诱导心肌细胞炎性反应。
NF-pB是细胞内重要的核转录因子，几乎存在于所有细胞中。通常情况下，NF-pB以p52-p65异二聚体的形式与其抑制性蛋白结合存在于细胞浆内呈非活化状态，但其可以被多种刺激因子刺激活化，一旦激活，从细胞浆进入细胞核内，与一些炎性细胞因子基因的启动子结合，启动这些细胞分子的基因转录，进而产生一系列炎性反应。因而,NF-pB也是炎性因子转录调控的主要因子。IL-6和ILAMP基因启动子上均含有NF-pB结合位点，NF-pB是其表达的直接调控因子。NF-pB参与了病理性心肌肥厚的形成，能够放大炎症信号、激活凋亡因子、诱导动脉粥样斑块生成「⑷0四逆汤可以有效改善由异丙肾上腺素诱导所致的病理性心肌肥厚，其机制可能与抑制TLR5/NF-cB炎症信号通路，下调TNFc、IL-6炎性因子有关［2］o检测显示，不稳定性心绞痛患者外周血白细胞NF-pB活性显著增强，并能促进TNF-p、、LN的表达水平［12］o RhoA/ ROCK通路参与细胞肌动蛋白骨架的调节、细胞的收缩、黏附、增生、分化及基因的表达等，近年来越来越多的证据表明，其在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要作用，包括内皮细胞的结构功能改变到斑块的形成与破裂。动脉粥样硬化炎性反应多个阶段均有RhoA/ROCK通路的参与。在糖尿病引起的心肌纤维化中, RhoA/ROCK通路通过调控其下游效应分子，直接或间接激活巨噬细胞及TNF-p等炎性因子的表达及成纤维细胞，导致动脉粥样硬化、加重心肌缺血损伤后内皮细胞的炎性反应，或导致心室壁僵化加速心肌纤维化［I225］0本部分研究发现，分
别应用RhoA/ROCK-NF-pB信号通路抑制剂SN52、辛伐他汀和Y27232预干预内脂素作用的心肌细胞，检测显示，预干预组的心肌细胞TNF-pmRNA表达明显低于22ng/ml内脂素干预，因此推测RhoA/ROCK-NF-pB信号通路介导内脂素诱导的心肌细胞炎性反应。
TNF-p对心肌细胞具有负性肌力作用，会降低心肌细胞的活力。细胞内钙稳态调节是影响心肌正常兴奋-收缩耦联功能的最重要因素。而TNF-p能够抑制肌浆网酶活性及收缩期细胞内钙水平的增高，导致心肌细胞内Ca0+离子水平下降，从而使心肌细胞收缩力降低。在心肌缺血再灌注损伤中，血清TNF-p水平的表达与心肌收缩功能呈明显负相关，高水平的TNF-p可激活肽水解酶及蛋白水解酶降解关键性收缩蛋白，包括肌钙蛋白，导致缺血后心肌功能不良［2］o TNF-p可以诱导心肌内NO产物增多，而高浓度的NO能直接损伤心肌细胞，抑制心肌收缩力TNF-p还可以促进炎性细胞因子IL-1、IL-6的表达，产生间接的负性肌力作用。本研究发现,2a/ml内脂素干预心肌细胞24h，心肌细胞MTT产物的0D值在内脂素浓度最高，之后降低,22a/ml内脂素干预心肌细胞24h后心肌细胞0D值明显下降，而且随着干预时间的延长，越来越低，心肌细胞出现功能异常。提示较低浓度的内脂素可以引起心肌细胞的活力增加，心肌细胞在高浓度、长时间的内脂素干预活力的下降心肌细胞在低浓度内脂素干预下不仅炎性因子表达明显增加，但心肌细胞活力降低，这一结果说明，还有一些活性物质具有提高心肌细胞活力，减弱炎性因子负性肌力的作用。
Son基因家族是一类NAD+依赖型组蛋白去乙酰化酶，在各种物种、组织和细胞均有表达，通过参与转
录沉默、DNA修复等生物过程，在心血管系统疾病、衰老及能量代谢等疾病中发挥作用。目前研究发现，哺乳动物有SIRT1~SIRT7共7种Sir/同源蛋白，其中,Sl1与糖尿病、阿尔茨海默病、冠心病等病理机制相关。动物实验证实，结扎冠状动脉导致的心脏心力衰竭、左心室失代偿性肥大狗模型,Sl1表达上调，加速心肌病的发展。Sinf的激活可能参与异丙肾上腺素诱导的小鼠心肌肥大。高血压大鼠模型中SIRT1表
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