1、（2011年江苏卷）33．（8分）请回答基因工程方面的有关问题：
图中引物为单链DNA片段，它是子链
合成延伸的基础。
①从理论上推测，第四轮循环产物中含有
引物A的DNA片段所占的比例为 。
②在第 轮循环产物中开始出现两条
脱氧核苷酸链等长的DNA片段。
(2)设计引物是PCR技术关键步骤之一。
某同学设计的两组引物（只标注了部分碱基序列）都不合理（如下图），请分别说明理由。
①第1组： ；
②第2组： 。
(3) PCR反应体系中含有热稳定DNA聚合酶，下面的表达式不能正确反映DNA聚合酶的
功能，这是因为 。
(4)用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb
即1000个碱基对)，请在答题卡的指定位置画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。
2、（11年北京卷）同业竞争31.（16分）
T-DNA可能随机插入植物基因组内，导致被插入基因发生突变。用此方法诱导拟南芥产生
突变体的过程如下：种植野生型拟南芥，待植物形成花蕾时，将地上部分浸入农杆菌（其中的T-DNA上带有抗除草剂基因）悬浮液中以实现转化。在适宜条件下培养，收获种子（称为T1代）。墨西哥海军陆战队
（1）为促进植株侧枝发育以形成更多的花蕾，需要去除 ，因为后者产生的
会抑制侧芽的生长。
（2） 为筛选出已转化的个体，需将T代播种在含 的培养基上生长，成熟后自交，收获种子（称为T代）。
（3） 为筛选出具有抗盐性状的突变体，需将T代播种在含 的培养基上，获得所需个体。
（4）经过多代种植获得能稳定遗传的抗盐突变体。为确定抗盐性状是否由单基因突变引起，需将该突变体与 植株进行杂交，再自交 代后统计性状分离比。
（5）若上述T-DNA的插入造成了基因功能丧失，
从该突变体的表现型可以推测野生型基因的存在导致植物的抗盐性 。
（6）根据T-DNA的已知序列，利用PCR技术可以扩增出被插入的基因片段。交流使人生更美好
其过程是：提取 植株的DNA，用限制酶处理后，再用 将获得的DNA片段连接成环（如右图）以此为模板，从图中A、B、C、D四种单链DNA片断中选取 作为引物进行扩增，得到的片断将用于获取该基因的全序列信息。
3、（2011年安徽卷）31.（21分）Ⅱ.（9分）家蚕细胞具有高效表达外源基因能力。将人干扰素基因导入家蚕细胞并大规模培养，可以提取干扰素用于制药。
(1)进行转基因操作前，需用___________酶短时处理幼蚕组织，以便获得单个细胞。 (2)为使干扰素基因在家蚕细胞中高效表达，需要把来自浮游生物网cDNA文库的干扰素基因片段正确插入表达载体的_________和___________之间。
(3)采用PCR技术可验证干扰素基因是否已经导入家蚕细胞。改PCR反应体系的主要成分应该包含：扩增缓冲液（含Mg2+）、水，4种脱氧核糖苷酸、模板m13引物DNA、_____________和_______________。
(4)利用生物反应器培养家蚕细胞时，的细胞会产生接触抑制。通常将多孔的中空薄壁小玻璃珠放入反应器中，这样可以_________________增加培养的细胞数量，也有利于空气交换。
4、（11天津理综卷）某致病基因h位于X染体上，该基因和正常基因H中的某一特定序列BclI酶切后，可产生大小不同的片段（如图1，bp表示碱基对），据此可进行基因诊断。图2为某家庭病的遗传系谱。
下列叙述错误的是（ ）
A h基因特定序列中Bcl 1酶切位点的消失是碱基序列改变的结果
B II-1的基因诊断中只出现142bp片段，其致病基因来自母亲
C II-2的基因诊断中出现142bp，99bp和43bp三个片段，其基因型为XHXh
D II-3的丈夫表现型正常，其儿子的基因诊断中出现142bp片段的概率为1/2.
5、（11年四川卷）北极比目鱼中有抗冻基因，其编码的抗冻蛋白具有11个氨基酸的重复序列，该序列重复次数越多，抗冻能力越强，下图是获取转基因抗冻番茄植株的过程示意图，有关叙述正确的是（ ）
A过程①获取的目的基因，可用于基因工程和比目鱼基因组测序
B多个抗冻基因编码区依次相连成能表达的新基因，不能得到抗冻性增强的抗冻蛋白，
C过程②构成的重组质粒缺乏标记基因，需要转入农杆菌才能进行筛选
D应用DNA探针技术，可以检测转基因抗冻番茄植株中目的基因的存在及其完全表达
6、（11年浙江卷）ada（酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是（ ）
A. 每个大肠杆菌细胞至少含一个重组质粒
B. 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点
C. 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada
D. 每个人的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子
7、（11年重庆卷）31. （16分）拟南芥是遗传学研究的模式植物，某突变体可用于验证相关的基因的功能。野生型拟南芥的种皮为深褐（TT），某突变体的种皮为黄（tt）,下图是利用该突变体验证油菜种皮颜基因(Tn)功能的流程示意图。
（1）与拟南芥t基因的mRNA相比，若油菜Tn基因的mRNA中UGA变为ＡＧＡ，其末端序列成为“－ＡＧＣＧＣＧＡＣＣＡＧＡＡＣＵＣＵＡＡ”，则Tn比ｔ多编码 个氨 基酸（起始密码子位置相同，ＵＧＡ、ＵＡＡ为终止密码子）。
（２）图中①应为 。若②不能在含抗生素Ｋａｎ的培养基上生长，则原因是 .若③的种皮颜为 ，则说明油菜基因与拟南芥T基因的功能相同。
（3）假设该油菜基因连接到拟南芥染体并替换其中一个t基因，则③中进行减数分裂的细胞在联会时的基因为 ；同时，③的叶片卷曲（叶片正常对叶片卷曲为显性，且与种皮性状独立遗传），用它与种皮深褐、叶片正常的双杂合体拟南芥杂交，其后代中所占比列最小的个体表现为 ；取③的茎尖培养成16颗植珠，其性状通常 （填 不变或改变）。
（4）所得的转基因拟南芥与野生型拟南芥 （填是或者不是）同一个物种。
8、（11年广东卷）27.（16分）
登革热病毒感染蚊子后，可在蚊子唾液腺中大量繁殖，蚊子在叮咬人时将病毒传染给人，可引起病人发热、出血甚至休克。科学家用以下方法控制病毒的传播。
（1）将S基因转入蚊子体内，使蚊子的唾液腺细胞大量表达S蛋白，该蛋白可以抑制登革热病毒的复制。为了获得转基因蚊子，需要将携带S基因的载体导入蚊子的
细胞。如果转基因成功，在转基因蚊子体内可检测出 、 和 。
（2）科学家获得一种显性突变蚊子（AABB）。A、B基因位于非同源染体上，只有A或B基因的胚胎致死。若纯合的雄蚊（AABB）与野生型雌蚊（aabb）交配，F1体中A基因频率是 ，F2体中A基因频率是 。
（3）将S基因分别插入到A、B基因的紧邻位
置（如图11），将该纯合的转基因雄蚊释放
到野生体中，体中蚊子体内病毒的
平均数目会逐代 ，原因是 。
9、（11年山东卷）35.（8分）
人类疾病的转基因动物模型常用于致病机理的探讨及药物的筛选。利用正常大鼠制备遗传性高血压转基因模型大鼠的流程如图所示。
（1）卵母细胞除从活体输卵管中采集外，还可以从处死的雌鼠________中获取。
（2）图中的高血压相关基因作为__________，质粒作为_________,二者需用________切割后连接成重组载体，该过程与质粒上含有________有关。
（3）子代大鼠如果________和__________，即可分别在水平上说明高血压相关基因已成功表达，然后可用其建立高血压转基因动物模型。
（4）在上述转基因大鼠的培育过程中，所用到的主要胚胎工程技术是___________、早期胚胎培养和胚胎移植。
10、（10浙江卷）在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是（ ）
A.用限制性核酸内切酶切割烟草茶叶病毒的核酸
B.用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体
C.将重组DNA分子导入原生质体
D.用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞
11、（10全国2）下列叙述符合基因工程概念的是（ ）
A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因
B．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干扰素的菌株
C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株
D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上
desire for survival
12、（10广东卷）新技术的建立和应用对生物学发展至关重要。下列技术（或仪器）与应用匹配正确的是（ ）
A.PCR技术——扩增蛋白质
B.杂交瘤技术——制备单克隆抗体
C.光学显微镜——观察叶绿体的基粒
D.花粉离体培养——培育单倍体植物
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