文章编号：1001-8689(2021)03-0262-04
收稿日期：2020-09-30
基金项目：国家科技重大专项-重大新药创制项目(No. 2017ZX9101001)
作者简介：高丛丛，女，生于1987年，博士，主要从事药物质量分析研究，E-mail:***************
*
通讯作者，
E-mail:*******************
第一作者：高丛丛，博士，毕业于北京理工大学化学院，分析化学专业。现为北京市药品检验所在站博士后，主要从事药物质量分析工作。在站期间参与国家药品评价性抽验工作，参与并完成部分化学注射剂一致性评价课题中抗氧剂评价与控制子课题的工作。 通讯作者：戴红，主任药师，北京市药品检验所副所长，国家药典委员会委员、国家药品监督管理局药品、保健食品及化妆品审评专家、国家自然科学评奖专家、仿制药研究与评价国家药品监督管理局重点实验室主任。长期从事生化药、抗生素类药物、血液制品、化学药等质量研究与评价工作，主持完成大量药典质量标准复核与质量标准提高等科研任务，参与完成多项重大课题研究，获北京市科学技术二等奖，发表专业论文近30篇、获得国家专利5
项。
gsmmodem离子谱法测定注射剂中4种常用水溶性抗氧剂的含量 高丛丛 李珉 侯金凤 车宝泉 戴红*
(北京市药品检验所，中药成分分析与生物评价北京市重点实验室，国家药品监督管理局仿制药研究
与评价重点实验室，北京 102206)
摘要：目的 建立一种离子谱法测定注射剂中四种抗氧剂亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠和焦亚硫酸钠的方法。方法 采用DionexIonPac AS11-HC(4mm ×250mm)谱柱，DionexIonPac AG11-HC(4mm ×50mm)保护柱，以25mmol/L 氢氧化钠溶液为淋洗液，流速1.0mL/min ，抑制电流52mA ，电导检测器检测，电导池温度35℃，柱温30℃。结果 亚硫酸钠、亚硫酸氢钠在0.1~100µg/mL 范围内线性关系良好，硫代硫酸钠和焦亚硫酸钠分别在0.08~100和0.05~100µg/mL 范围内线性关系良好。检测限分别为0.02、0.02、0.04和0.01µg/mL ，平均回收率在95%~102%，RSD 均小于2%。结论 本方法操作简便快速、准确、灵敏，适用于大部分注射剂中水溶性抗氧剂的检测。
关键词：离子谱法；注射剂；抗氧剂中图分类号：R978.1 文献标志码：A
Determination of the content of four antioxidants in injections
by ion chromatography
Gao Cong-cong, Li Min, Hou Jin-feng, Che Bao-quan and Dai Hong
(Beijing Institute for Drug Control, MNPA Key Laboratory for Quality Evaluation of Traditional Chinese Medicine (Traditional Chinese Medicine), MNPA Key Laboratory for Research and Evaluation of Generic Drugs, Beijing Key Laboratory of Analysis and Evaluation on
Chinese Medicine, Beijing 100035)
抗氧剂是一种普遍使用的添加剂，可以有效延缓药物氧化，增加药物的稳定性，保证药物的有效性[1]。中国药典2020版规定，注射剂中的添加剂不得影响药物疗效，使用浓度不得引起毒性或明显的刺激性[2]。注射剂中常用的水溶性抗氧剂为亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠和焦亚硫酸钠，其浓度一般为0.1%~0.2%[2]。据研究[3-6]，过量的抗氧剂会对机体产生毒性，因此控制注射剂中抗氧剂的含量对提高产品的安全性至关重要。目前，已报道了许多关于注射剂中抗氧剂的检测方法[7-11]，但这些方法仅限于一种抗氧剂的检测，本文开发了一种简便、快速的离子谱法，可测定注射剂中的4种水溶性抗氧剂，结果准确可靠，对注射剂中抗氧剂的质量控制提供了一定的参考。
1 材料与方法
1.1仪器与试药
美国戴安ICS-5000+型离子谱仪；Mettler SX105分析天平；Millipore simplicity超纯水机。硫酸钠(≥99%)、亚硫酸钠(≥98%)、亚硫酸氢钠(100%)、硫代硫酸钠(≥98%)、焦亚硫酸钠(97%~100.5%)，均购于Sigma公司。50%氢氧化钠溶液为谱纯试剂，购自Merck公司；氮气为高纯氮；实验用水为自制去离子水。
1.2谱条件
谱柱：A S11-H C(4m m×250m m)；保护柱：AG11-HC(4mm×50mm)；抑制器：ASRS 600 4mm，抑制电流52mA；检测器：电导检测器；稀释剂(稳定剂)：0.1%甲醛水溶液(V/V)；淋洗液：25mmol/L氢氧化钠溶液；流速1.0mL/min；检测池温度：35℃，柱温：30℃；进样量：25µL。
1.3对照品贮备溶液的制备
临用新制，取亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠适量，精密称定，用稀释剂溶解并稀释成约含1mg/mL抗氧剂的溶液，作为对照品贮备液。
1.4供试品溶液制备
临用新制，精密量取供试品溶液1mL或1支(注射用样品)，用稀释剂溶解并稀释至100mL，作为供试品溶液。
2 结果与讨论
2.1系统适用性试验
溶液中可能会存在的干扰离子如氟化钠、氯化钠、溴化钠、硝酸钠、硫酸钠、磷酸钠及其他抗氧剂如甲醛合次硫酸氢钠、苹果酸、枸橼酸钠等，与亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、硫代硫酸钠混合，
作为系统适用性溶液。取上述溶液25µL注入离子谱仪，记录谱图见图1。由图1可知，在该谱条件下，SO
3
2-和SO
4
2-之间的分离度为2.25，与其他各离子之间分离度也符合要求。
2.2方法学验证
2.2.1检测限、定量限
精密量取适量对照品贮备液，用稀释剂以逐步稀释法进行稀释。按信噪比为3:1测定检测限；按信噪比10:1测定定量限，结果如表1所示，分别为亚硫酸钠0.02/0.05µg/mL，亚硫酸氢钠0.02/0.05µg/mL，硫代硫酸钠0.04/0.08µg/mL，焦亚硫酸钠0.01/0.05µg/mL。2.2.2线性关系考察
精密量取对照品贮备液适量，加稀释剂稀释至一定浓度(亚硫酸钠为0.1、0.5、2、10、40、80和100μ
g/mL，亚硫酸氢钠为0.1、1、5、20、40、80和100μg/mL，硫代硫酸钠为0.08、0.1、0.5、2、10、40、80和100μg/mL，焦亚硫酸钠为0.05、0.1、0.5、2、10、40、80和100μg/mL)的系列对照品溶液，分
Abstract Objective A method for the determination of four antioxidants Na
2SO
3造船工艺
, NaHSO
3
, Na
2
S
2
O
3
,
and Na
2S
2
O
5
in injections by ion chromatography has been established. Methods DionexIonPac AS11-
HC(4mm×250mm) and DionexIonPac AG1-HC (4mm×50mm) were used to analyze samples with the eluent of 25mM sodium hydroxide solution. The flow rate was 1.0mL/min. The ASRS600 4mm self-Regenerating Suppressor was adopted with the suppressor current set at 52mA. The conductivit
y pool was maintained at 35℃ and the column temperature was at 30℃. Results The calibration curves of four antioxidants were all in good linearity, of which
Na
2SO
3
and NaHSO
3
were within the range from 0.1 to 100µg/mL, Na
2
S
2
O
3
was within 0.08 to 100µg/mL, and 0.05
to 100µg/mL for Na
2S
2
O
5
. The detection limits were 0.02, 0.02, 0.04, and 0.01µg/mL, respectively. The average
recoveries were between 95%~102%, andthe relative standard deviation (RSD) values were<2%. Conclusion The method is simple, rapid, accurate, and sensitive, which is suitable for the detection of water-soluble antioxidants in most injections.
Key words Ion chromatography; Injection; Antioxidant
别进样25μL ，以浓度c 为横坐标，以峰面积(A )为纵坐标，得到线性回归方程如表1所示。由线性回归方程可知，亚硫酸钠、亚硫酸氢钠在0.1~100μg/mL 之间线性关系良好，硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠分别在0.08~100μg/mL 和0.05~100μg/mL 内线性关系良好。2.2.3 加样回收率
精密量取对照品贮备液适量，以不含上述4种抗氧剂的注射剂为空白基质，稀释至浓度为5µg/mL 的溶液，以此浓度作为100%浓度并同法配制3份；同法配制80%低浓度和120%高浓度各3份，取25µL 注入离子谱仪，按外标法以峰面积计算抗氧剂的含量，计算回收率和相对标准偏差，结果如表1所示。由结果可知，4种抗氧剂平均回收率均在95%~102%之间，RSD 在2%以内，符合要求。2.2.4 仪器精密度试验
精密量取40µg/mL 对照品溶液25μL ，连续进样6次，记录峰面积，RSD 分别为0.17%(亚硫酸钠)、0.70%(亚硫酸氢钠)、0.61%(硫代硫酸钠)、0.45%(焦亚硫酸钠)，符合精密度要求。2.2.5 稳定性试验
精密量取5µg/mL 对照品溶液，分别于0，1，2，4，6，8和10h 进样测定，记录峰面积，RSD 分别为 0.76%，0.28%，0.94%和0.27%，无明显变化趋势。结果表明亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠对照品溶液在10h 内基本稳定。
表1 方法的线性范围、线性方程、相关系数、检测限/定量限和平均回收率/RSD
Tab. 1 Linear range, linear equation, correlation coefficient, detection limit/quantitative limit and average recovery /RSD of the methods
抗氧剂名称线性范围(µg/mL)
线性方程相关系数R ²检测限/定量限(µg/mL)
平均回收率/RSD(%)
Na 2SO 30.1~100A =0.0725c -0.06270.99940.02/0.0597.79/1.79NaHSO 30.1~100A =0.0944c -0.10720.99930.02/0.0597.03/1.23Na 2S 2O 30.08~100A =0.1172c -0.08760.99910.04/0.0896.09/0.90Na 2S 2O 5
0.05~100
A =0.0961c -0.063
0.9996
0.01/0.05
97.34/0.99
表2 系统耐用性试验条件及SO 32-与SO 42-分离度Tab. 2 Test conditions of system durability and separation
degree between SO 32-and SO 42-流速(mL/min)柱温/℃淋洗液浓度/(mmol/L)
与SO 42-分离度
1(本条件)3025 2.300.83025 2.411.23025 2.1712525 2.2313525 2.3113020 2.711
30
30
1.84
20.0
15.010.05.00-2.0
0 5.0 10.0 15.0 20.0 25.0 30.0 35.0 37.4
1-3.187
3-4.9502-3.927
4-5.783
6-7.8577-9.1208-9.700
10-26.833
11-31.280
9-18.627
5-7.107
μS
t /min
1：F -；2：甲醛合次硫酸氢钠；3：Cl -；4：苹果酸；5：SO 32-；6：SO 42-；7：Br -；8：NO 3-；9：PO 43-；10：S 2O 32-；11：C 6H 5O 73-
佳木斯工学院
图1 离子标准品谱图
Fig. 1 Chromatogram of each ion reference
汇率指数2.2.6 系统耐用性试验
上海卫生和计划生育委员会取2.1项下混合溶液25μL ，分别在改变流速、柱温及淋洗液浓度的条件下进样，考察各离子之间的分离度，结果如表2所示。由结果可知，本方法在流速±20%，柱温±5℃，淋洗液浓度±5mmol/L 范围内，SO 32-与SO 42-及相邻离子之间分离度均符合要求(>1.5)，表明该方法的耐用性良好。2.2.7 样品测定
依“1.4”项下方法制备8种共16批样品的供试品溶液，注入离子谱仪，分别测定，计算含量。结果如表3所示，其中未标注含抗氧剂的注射剂(氟康唑氯化钠注射液、甲硝唑葡萄糖注射液、注射液头孢他啶、甲磺酸左氧氟沙星注射液、利奈唑胺葡萄糖注射液)中未检出上述4种抗氧剂；标注含抗氧剂的注射剂如硫酸庆大霉素注射液、长春西汀注射 参 考 文 献
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表3 样品测定结果
Tab. 3 Results of sample determination
样品名称批号测定结果氟康唑氯化钠注射液B424705未检出甲硝唑葡萄糖注射液Y2004204未检出注射用头孢他啶
131-20190501131-20190502131-20190503132-20190602132-20190701132-20190702未检出
甲磺酸左氧氟沙星氯化钠注射液
G202005061未检出利奈唑胺葡萄糖注射液
700191206700191103未检出硫酸庆大霉素注射液1912329焦亚硫酸钠含量1.055mg/mL 盐酸多巴酚
丁胺注射液
1909114219091143
亚硫酸氢钠含量0.5357mg/mL 亚硫酸氢钠含量0.5777mg/mL 长春西汀注射液
A7C092A A70090A
焦亚硫酸钠含量1.556mg/mL 焦亚硫酸钠含量1.532mg/mL
液，检出焦亚硫酸钠，盐酸多巴酚丁胺注射液检出亚硫酸氢钠，其含量在国家标准内。3 结论
本研究建立了离子谱法测定注射剂中水溶性抗氧剂的方法，可以分离常见的阴离子，专属性强，操作简便、快速，准确，可用于测定四种常用水溶性抗氧剂(亚硫酸钠、亚硫酸氢钠、硫代硫酸钠、焦亚硫酸钠)。应用范围广，具有较高的灵敏度，可用于注射剂样品抗氧剂的分析，也可用于其他剂型抗氧剂的筛查。
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