22q13.31-q13.33微缺失综合征导致自闭症的遗传学分析 摘要: 目的 采用aCGH分析1例发育落后合并自闭症患儿，分析其染体异常与临床表型的相关性。 方法 首先应用外周血培养G显带分析患儿及父母染体核型，然后应用荧光PCR技术对FMR1基因和aCGH 技术对患儿进行基因组拷贝数变化的检测分析 ( copy number variations，CNVs) 。 患儿与其父外周血染体核型一致，均为46，XX/Y，t（1；13）（p36.1；p11.2），其母染体正常，患儿FMR1基因的CGG重复的基因型为30/30次， array - CGH 分析发现患儿22q13.31-q13.33存在 2.95Mb 的致病性缺失片段。结论22q13.31-q13.33微缺失区域是患儿发育落后、语言障碍、自闭症发生的关键区域。 关键词： 微缺失；自闭；聚合酶链反应；微阵列比较基因组杂交技术
The genetic analysis of autism caused by 22q13.31-q13.33 microdeletion syndrome.
Abstract: Objective: ACGH was used to analyze the relationship between chromosome abnormality and clinical phenotype in 1 cases of children with autism. Methods: First application of peripheral blood culture G banding karyotype analysis of children and parents,
先行词 then the application of fluorescence PCR technique to FMR1 gene and aCGH technology for genome copy number variations of children's testing analysis (copy number variations, CNVs).Ｒesults: Agree with her father's peripheral blood chromosome karyotype, children are 46, XX/Y, t (1; 13) (p36.1; p11.2),her mother 's chromosomes is normal. The FMR1 gene of the CGG gene was 30/30, and the CGH - array analysis showed that the 22q13.31-q13.33 of the gene in the children was the absence of 2.95Mb.
Conclusion: 22q13.31-q13.33 is a key region in the development of children with developmental lag, language disorder and autism.
Key words: microdeletion；autism；金的脚印教学设计Polymerase chain reaction；Array-based comparative genomic hybridization
染体异常通常伴有生长发育迟缓、智力低下和精神发育异常，G 显带染体核型分析技术是传统的染体检查方法，可以检测整套染体的数目和明显的结构异常，通过G显带染体分析发现染体异常是临床上最常用的技术手段，但其分辨率有限，对于片段长度小于 5Mb 的不平衡畸变则难以检出，故临床上经常遇到染体正常或平衡异常的发育落后
和智力低下，原因不明。微阵列比较基因组杂交技术（array-based comparative genomic hybridization，array-CGH 或 aCGH）是新近发展起来的一种高效的分子核型分析技术，通过一次杂交实验就能够对全基因组 DNA 拷贝数变异（copy number variants，CNVs）进行高通量、高分辨率分析，准确地检测到 DNA 拷贝数的多寡，并能将某一DNA 序列变异准
确定位到染体上，从而发现一些常规染体分析不能诊断的微缺失或微重复[1-2]。本研究对一例发育落后、自闭的患儿进行了array - CGH 分析。
文献综述怎么写
资料与方法
1 临床资料 患儿 3 岁，女，外貌表型正常，发育迟缓，1周岁10个月始会走路，语言发育障碍，至今仅能简单发音“爸爸、妈妈”，与人不能正常交流，有自闭倾向。父母身体均健康，母亲32岁足月剖宫产此患儿，生后评分正常。其母之前两次因胎停育行人工流产术。非近亲婚配，双方家族中均无同类病例，否认其它家族遗传病史。
2 实验方法
2.1 外周血培养染体G显带分析 抽取患儿及其父母外周血肝素抗凝，进行淋巴细胞培养，常规制片，G 大米淀粉显带，必要时进行C 显带等, 每例计数分散较好的30个中期分裂相细胞, 核型分析3～5个细胞, G 显带，显微镜下进行染体核型分析，异常者核型分析及计数加倍。
2.2 荧光PCR技术检测FMR1基因 取患儿取２00ul外周EDTA抗凝血， 提 取 基 因 组 ＤＮＡ ；引 物 序 列 为 ＦＸＦＯＲ ５’-ＡＧＧＣＧＣＴＣＡＧＣＴＣＣＧＴＴＴＣＧＧＴＴＴＣＣＴＴＣ - ３′和 ＦＸＸ３５’-ＦＡＭ-ＧＴＧＧＧＣＴＧＣＧＧＧＣＧＣＴＣＧＡＧＧ-３′,ＰＣＲ总反应体系试剂主要购自瑞士 Ｒｏｃｈｅ公司 ，反应于热循环仪上进行PCR扩增反应，进行毛细管电泳分析，应用ＧｅｎｅＭａ ｐ ｅｒＶ３．０软件进行数据分析 根据电泳峰位置坐标计算 ＣＧＧ 重复次数。
2.3 aCGH 技术对患儿进行基因组拷贝数变化的检测分析 取0.5g检测样本基因组 DNA 和对照基因组 DNA， 使用 内切酶进行酶切， aCGH 芯片的检测分辨率为 50Kb 在芯片杂交炉( Agilent， G2545A) 中杂交 24h， 杂交后的aCGH 芯片使用芯片扫描仪( Agilent， G2505C)
扫描并通过Agilent Feature Extraction 10. 7. 3. 1 软件进行数据提取 使用Agilent Genomic Workbench Lite Edition 6. 5. 0. 18 软件对提取的数据进行变异区段分析并上传至北京博尔诚医学检验所染体数据库进行致病性分析。
结 果
外周血G显带染体分析结果：患儿染体核型46，XX，t（1；13）（p36.1；p11.2），其父染体核型46，XY，t（1；13）（p36.1；p11.2），其母为46，XX。
患儿FMR1基因的CGG重复的基因型为30/30次，结果提示患儿不携带脆性X综合征致病基因的三联密码子CGG重复扩增突变。
患儿array -CGH分析结果：患儿del（22）（q13.31；q13.33）区段48,224,528-51,178,264存在 2.95Mb 的致病性缺失片段。
讨 论
自闭症( autistic disorder) 目前普遍认为自闭症是由于脑功能障碍所致的发育障碍引起的一
组行为症候，其临床特征是社会交往障碍、言语发育障碍、兴趣范围狭窄和刻板重复的行为方式，是一种终生性疾病，较轻的患者生活可以自理，而症状较重者需要终身的医疗护理和社会援助服务。有研究报道目前除14、20 号染体未发现与自闭症相关报道外， 其余染体异常与自闭症的相关性均有报道[3]。Cook乙烯利[4]等发现自闭症患儿在染体 15q11-13 部位存在5q12 缺失， 即在15q11-13 位置上存在可能与自闭症相关的印迹基因 。脆性X染体综合症（ fragile X syndrome，FXS ）是引起自闭症和智力发育低下的一种常见X连锁遗传病。其分子机制是脆性X智力低下1基因（fragile X mental retardation 1 protein，FMR1），FMR1基因位于X 染体长臂的 27.3 上，其5' 非翻译区CGG重复序列异常重复，正常情况下该重复序列少于 55 个重复，但该重复序列在母系遗传过程中不稳定，会下一代的重复次数会增加，当重复次数在 55-200 之间时则被称为是突变基因携带者；若重复次数超过 200会发生完全突变，导致发生自闭、智力低下等病症王维凝[5]。本研究发现患儿的FMR1基因的CGG重复的基因型为30/30次，结果提示患儿不携带脆性X综合征致病基因的三联密码子CGG重复扩增突变，故此患儿自闭情况与FMR1基因突变无关。而患儿染体存在微缺失，为del（22）（q13.31；q13.33）区段48,224,528-51,178,264存在 2.95Mb 的致病性缺失片段。该区段包含10个OMIM致病基因，Decipher数据库显示与22q
13缺失综合征疾病相关，临床症状包括孤独症，语言发育落后，智力障碍等，与本研究中患儿临床表型一致。
文献报道约有4-8%的新生儿存在先天多发性畸形、发育迟缓和智力低下等出生缺陷。染体不平衡畸变是其重要原因，而染体不平衡畸变常见的是部分微缺失或重复。传统的染体检查方法-G显带染体核型分析技术不能检测出片段长度小于 5Mb 的不平衡畸变。aCGH是一项高分辨率全基因组扫描技术，它能够识别出因太小畸变在传统核型分析无法检出的异常，因此最适合于诊断染体的微缺失或重复[6]。有研究报道通过aCGH在多达15%的不明原因智力低下、先天畸形、自闭症样表型的核型正常儿童中检出致病性基因组不平衡或遗传学突变，现正在诊断胎儿及儿童遗传学异常中引起人们的兴趣[7]。本研究通过aCGH检测出患儿存在del（22）（q13.31；q13.33），分析引起此患儿临床表型的原因，指导患儿父母再次生育时可通过aCGH检测胎儿微缺失情况，帮助准确评估病情和预后。
参考文献
［1］Ｒifai L，Port- Lis M，Tabet AC， et al. Ectodermal dysplasia-like syndrome with mental retardation due to contiguous gene deletion: further clinical and molecular delineation of del( 2q32) syndrome〔J〕. Am J Med Genet A，2010，152A( 1) : 111-117.
［2］ V.Malan，S.Romana. Analyse chromosomique sur puce à ADN (CGH array) : principe et application en diagnostic prénatal〔J〕. Revue de médecine périnatale，2012，4(2)：67-73.
［3］王安莲，刘志荣。 自闭症研究现状〔J〕. 安徽预防医学杂志，2013，19(5): 367-371.
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