总RNA提取
1. 取50－100四川行政财贸管理干部学院
西北风呼啸的中午 mg（新鲜或－70℃及液氮中保存的组织均可）置1.5ml匀浆器中，加入1ml TRIzol充分匀浆，室温静置10 尉氏县水立方
min。 语义网络分析
2. 加入0.2 ml氯仿，振荡15s，静置10 min。
3. 4℃离心，12000 g×15 min，取上清置另一1.5ml离心管中。（宁少勿多）
4. 加入0.5ml异丙醇，将管中液体轻轻混匀，室温静置10min。
5. 4℃离心，12000g×10 min，弃上清。
6. 加入1ml 75％乙醇，轻轻洗涤沉淀。4℃离心，7500g×5 min，弃上清。（DEPC处理的水配制）
7. 晾干，加入适量的DEPC H 2 O溶解（65℃促溶10～15 min）。
8. 快速电泳检测RNA完整性。
图1：稀土作为战略资源的特殊价值完整的RNA与降解的RNA之间的比较。 分别取2微克的降解总RNA及完整总RNA与Ambion的RNA Millennium Markers™一同进行1.5%的变性琼脂糖凝胶电泳。在完整RNA样品中可以清楚地观察到18S和28S核糖体RNA。而降解的RNA则表现为较低分子量的弥散。 纯RNA：1.7 ＜OD260/280＜2.0（＜1.7时表明有蛋白质或酚污染；＞2.0时表明可能有异硫氰酸残存）。纯 RNA的内丹修炼的四个
过程OD260/230比值为2.5，若比值小于2.0标明样品被碳水化合物（糖类），盐类或有机溶剂污染。（OD260/OD230与OD260/OD280均用于判断RNA纯度） 注意事项：
1.样品量和TRIzol的加入量一定要按照步骤1的比例，不能随意增加样品量或减少TRIzol量，否则会使内源性RNase的抑制不完全，导致RNA降解。1 ml 的 Trizol 最多只能裂解 100 mg 的组织。Trizol 里面是含有 RNA 酶抑制剂的，如果组织过量，Trizol 无法完全浸润组织无法完全裂解组织，多余组织内的 RNA 酶等物质会导致 RNA 的降解。这是 RNA 降解的很重要的原因。
2.实验过程中必须严格防止RNase的污染。
3.所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6h或更长时间。
4.塑料器皿可用0.1％DEPC水浸泡或用氯仿冲洗。
5.配制的溶液应尽可能的用0.1％DEPC在37℃处理12h以上，然后用高压灭菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的 试剂 ，应当用DEPC处理过的无菌双蒸水配制，然后经0.22um滤膜过滤除菌。
6.完整的总RNA在进行变性凝胶电泳时会产生清晰的28S和18S rRNA条带（真核样品）。28S rRNA条带的强度应当大致为18S rRNA条带的两倍。这种2:1的比率（28S：18S）是判断RNA完整性的一个很好的指标。目前有一种快速简单的方法可以替代传统的凝胶分析方法，这种方法可以同时对RNA样品进行定量及质量评估。Agilent 2100 Bioanalyzer (Agilent Technologies)是第一款商业化的提供RNA样品状态细节信息的微流体仪器。
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