第５７卷㊀第２期２０２１年０４月
青岛大学学报(医学版)
J O U R N A LO FQ I N G D A O U N I V E R S I T Y (M E D I C A LS C I E N C E S
)V o l ．５７,N o ．２A p
风险投资论文r i l ㊀２０２１[收稿日期]２０１９Ｇ０５Ｇ２１;㊀[修订日期]２０２０Ｇ１２Ｇ１８
[基金项目]陕西省自然科学基础研究计划项目(２０１８J M ７１２１)[第一作者]朱婧(１９８６Ｇ)，女，硕士，主治医师.[通信作者]张世平(１９８３Ｇ)，男，主治医师.E Ｇm a i l :x i ６８１０４０Ｇ
４２９９６＠１６３．c o m
朱婧，赵义康，王臻，常建华，张世平
(陕西省人民医院麻醉科，陕西西安㊀７１００００
)[摘要]㊀目的㊀探讨异氟烷(I S O )预处理对脑缺血再灌注(I /R )
损伤的影响及其机制.方法㊀用线栓法构建I /R 模型，将５０只大鼠随机分为５组：假手术组(A 组)㊁I /R 组(B 组)㊁I /R＋I S O 组(C 组)㊁I /R＋I S O＋吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(P D T C )组(D 组)和I /R＋I S O＋二甲基亚砜(D M S O )组(E 组)，每组１０只.用L o n g a 评分法评估各组大鼠神经功能损伤评分和TM S 评分,T T C 法检测脑组织梗死面积,T U N E L 法检测神经细胞凋亡率,E L I S A 法检测脑组织中肿瘤坏死因子α(T N F Ｇα)和白细胞介素１β(I L Ｇ１β)的含量,W e s t e r nb l o t 检测脑组织中B c l Ｇ２㊁C l e a v e d C a s p a s e Ｇ３和N F ＧκB p ６５蛋白的表达.结果㊀与A 组相比较,B ㊁C ㊁D 和E 组的TM S 评分㊁B c l Ｇ２表达水平均明显降低，而神经功能损伤评分㊁神经细胞凋亡率和脑组织梗死面积㊁N F ＧκB p ６５和C l e a v e dC a s p
a s e Ｇ３表达水平㊁T N F Ｇα和I L Ｇ１β含量均明显升高(P ＜０．０５).与B 组相比,C ㊁D 和E 组以上各指标有不同程度的逆转(P ＜０．０５).而C 组和D 组比较㊁C 组与E 组比较差异无显著性(P ＞０．０５).结论㊀I S O 预处理可保护脑I /R 损伤，其作用机制可能与抑制N F ＧκB 信号通路减少神经细胞凋亡和减轻炎症反应有关. [关键词]㊀再灌注损伤；脑梗死；异氟醚；细胞凋亡；炎症;N F ＧκB 信号通路;
大鼠[中图分类号]㊀R ９７７．６;R ３６４．１㊀㊀[文献标志码]㊀A㊀㊀[文章编号]㊀２０９６Ｇ５５３２(２０２１)０２Ｇ０２５５Ｇ０５
d o i :１０．１１７１２/j
m s ．２０９６Ｇ５５３２．２０２１．５７．０６８[开放科学(资源服务)标识码(O S I D )包一峰
][网络出版]㊀h t t p
s ://k n s ．c n k i ．n e t /k c m s /d e t a i l /３７．１５１７．R．２０２１０２２２．１１２６．００３．h t m l ;２０２１Ｇ０２Ｇ２２㊀１７:０７:２５E F F E C TA N D M E C H A N I S M O FI S O F L U R A N E P R E C O N D I T I O N I N G O N C E R E B R A LI S C H E M I A /R E P E R F U S I O NI N J U R YI N R A T S ㊀Z HU J i n g ,Z HA O Y i k a n g ,WA N G Z h e n ,C HA N G J i a n h u a ,Z HA N G S h i p i n g ㊀(
邵式平D e p a r t m e n to fA n a e s t h e s i o l o g y ,S h a n x i P r o v i n c i a l P e o p l e sH o s p
i t a l ,X i ᶄa n７１００００,C h i n a )[A B S T R A C T ]㊀O b j
e c t i v e ㊀T o i n v e s t i g a t e t h e e
f f e c t a n dm e c h a n i s mo f i s o f l u r a n e (I S O )p r e c o n d i t i o n i n
g o n c e r e b r a l i s c
h e m
i a /r e p e r f u s i o n (I /R )i n
j u r y ．㊀M e t h o d s ㊀T h e s u t u r em e t h o dw a s u s e d t o e s t a b l i s h a n I /R m o d e l ,a n d ５０r a t sw e r e r a n d o m l y d
i v i d e d i n t o s h a m Ｇo p e r a t i o n g r o u p (g r o u p A ),I /R g r o u p (g r o u p B ),I /R＋I S O g r o u p (g r o u p C ),I /R＋I S O＋p y r r o l i d i n e d i t h i o c a r b a m a t e (P D T C )g r o u p (g r o u p D ),a n d I /R＋I S O＋d i m e t h y l s u l f o x i d e (D M S O )g r o u p (g r o u p E ),w i t h １０r a t s i n e a c h g r o u p ．T h eL o n g
a s c o r i n g m e t h o dw a s u s e d t o e v a l u a t e t h e n e u r o l o g i c a l d e f i c i t s c o r e o f e a c h g r o u p ;t h eT T Cm e t h o dw a s u s e d t om e a s u r e
b r a i n i n f a r
c t a r e a ;t h eT U N E L m e t h o dw a s u s e
d t om
e a s u r e t h e a p o p t o s i s r a t e o
f n e u r a l c e l l s ;t h eE L I S A m e t h o dw a s u s e d t om e a s u r e t h e c o n Ｇt e n t o f t u m
o r n e c r o s i s f a c t o r Ｇα(T N F Ｇα)a n d i n t e r l e u k i n Ｇ１β(I L Ｇ１β)i nb r a i n t i s s u e ;W e s t e r nb l o tw a s u s e d t om e a s u r e t h e p r o t e i n e x p r e s s i o no f B c l Ｇ２,c l e a v e d c a s p a s e Ｇ３,a n dN F ＧκB p ６５i nb r a i n t i s s u e ．㊀R e s u l t s ㊀C o m p a r e dw i t h
g r o u p A ,g r o u p sB ,C ,D ,a n d E
h a d s
i g n i f i c a n t r e d u c t i o n s i nT M S s c o r e a n d t h e e x p r e s s i o n l e v e l o f B c l Ｇ２a n d s i g n i f i c a n t i n c r e a s e s i n n e u r o l o g i c a l d e f i c i t s c o r e ,a p
Ｇo p t o s i s r a t e o f n e u r a l c e l l s ,b r a i n i n f a r c t a r e a ,e x p r e s s i o n l e v e l s o fN F ＧκB p ６５a n d c l e a v e d c a s p
a s e Ｇ３,a n d l e v e l s o fT N F Ｇαa n d I L Ｇ１β(
P ＜０．０５)．C o m p a r e dw i t h g r o u p B ,g r o u p sC ,D ,a n dEh a d v a r y i n g d e g r e e s o f r e v e r s a l o f t h e a b o v e i n d i c e s (P ＜０．０５)．T h e r e w e r e n o s i g n i f i c a n t d i f f e r e n c e s b e t w e e n g r o u p C a n d g r o u p Da n d b e t w e e n g r o u p C a n d g r o u
p E (
P ＞０．０５)．㊀C o n c l u s i o n ㊀I S O p r e Ｇt r e a t m e n t c a n p r o t e c t t h e b r a i n a g a i n s t I /R i n j u r y ,p o s s i b l y b y i n h i b i t i n g t h eN F ＧκB s i g n a l i n g p a t h w a y t o r e d u c e n e u r a l c e l l a p o p t o Ｇs i s a n d a l l e v i a t e i n f l a mm a t o r y r e s p
o n s e ．[K E Y W O R D S ]㊀r e p e r f u s i o n i n j u r y ;b r a i n i n f a r c t i o n ;i s o f l u r a n e ;a p o p t o s i s ;i n f l a mm a t i o n ;N F Ｇk a p p aBs i g n a l i n gp a t h w a y
;r a t s
㊀㊀脑缺血再灌注(I /R )
损伤是一种由多种因素引起的病理过程，与脑细胞凋亡和炎症反应等密切相
关[１Ｇ３]
.N F ＧκB 信号通路是一种与细胞凋亡和炎症反应关系密切的经典信号传导途径[
４Ｇ６
]
.有研究发现，异氟烷(I S O )
预处理可通过抑制脑细胞凋亡和减弱炎症反应等机制改善脑I /R 损伤[７Ｇ８
].但N F Ｇ
κB 信号通路是否与I S O 的保护机制有关尚不清楚.
因此，本研究旨在探究I S O 对I /R 损伤的影响以及
对N F ＧκB 信号通路的调控作用.本研究利用N F Ｇ
κB 信号通路抑制剂，通过观察I S O 对I /R 大鼠脑细胞凋亡㊁炎症反应及N F ＧκB 信号通路相关蛋白表达的影响，探讨I S O 保护脑I /R 损伤的作用机制是否
㊀
２５６青㊀岛㊀大㊀学㊀学㊀报㊀(医㊀学㊀版)５７卷
与N FＧκB信号通路有关.现将结果报告如下.１㊀材料与方法
１．１㊀实验材料
S D雄性大鼠(体质量２６０~３００g,２~３周龄)购于空军军医大学实验动物中心,I S O购于美国B a x t e r公司.细胞裂解液㊁硝酸纤维素膜㊁显影液㊁定影液和B C A蛋白浓度测定试剂盒购于上海碧云天生物技术研究所,N FＧκB p６５兔多克隆抗体购于美国M I L L I P O R E公司,B细胞淋巴瘤/白血病Ｇ２(B c lＧ２)㊁甘油醛Ｇ３Ｇ磷酸脱氢酶(G A P D H)和剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶３(C l e a v e d C a s p a s eＧ３)兔多克隆抗体和兔源二抗购于美国C e l l S i g n a l i n g公司.N FＧκB信号通路抑制剂吡咯烷二硫代氨基甲酸铵(P D T C)购于美国S i g m a公司，肿瘤坏死因子α(T N FＧα)和白细胞介素１β(I LＧ１β) E L I S A试剂盒购于德国R&D G e r m a n y公司.１．２㊀实验方法
１．２．１㊀I/R模型的制备㊁I S O预处理与实验分组I/R模型的制备：以腹腔注射３０g/L钠的方法麻醉大鼠，固定大鼠去除颈前毛，并以体积分数０．７５乙醇溶液对颈部皮肤进行消毒.在颈正中做切口，分离右侧颈总动脉以及颈内外动脉，将尼龙线栓(直径０．３８mm)从颈外动脉残端插入颈内动脉(约长２０mm)直至有阻力感.在缺血９０m i n后，拔出线栓，进行再灌注２４h.I/R大鼠模型制备成功的判断参照L O N G A等[９]的标准.预处理方法: I S O组在I/R前进行I S O预处理，将大鼠置于自制密闭的实验舱中，头端分别连接进气孔和连接麻醉气体监测仪.维持箱内温度３５~３７ħ，经麻醉机输送体积分数０．０１５的I S O气体至实验舱内，并调节氧体积分数为０．７０左右，逐渐升高麻醉气体浓度，根据D a t e x气体检测仪调节实验舱内I S O浓度为体积分数０．０１５时，维持以上浓度稳定１５m i n后放入大鼠进行预处理.连续５d吸入体积分数０．０１５的I S O气体，每天１h.吸入I S O气体过程中分别监测脉搏氧分压(S p O２)和脉率.末次预处理２４h 后行I/R.
实验分组：将５０只大鼠随机分为５组，每组１０只.①假手术组(A组)：分离血管后不插入线栓.
②I/R组(B组)：参照I/R模型的制备方法制备脑中动脉闭塞/再灌注(M C A O/R)大鼠模型，在缺血９０m i n后再灌注.③I/R＋I S O组(C组)：在缺血前６０m i n给予体积分数０．０２的I S O诱导３０m i n，之后行I/R.④I/R＋I S O＋P D T C组(D组)：缺血前６０m i n给予体积分数０．０２的I S O诱导３０m i n，并于侧脑注射１０μL的N FＧκB信号通路特异性抑制剂P D T C(以二甲基亚砜(D M S O)溶解,０．３m g/ k g)，然后再行I/R.⑤I/R＋I S O＋D M S O组(E 组)：缺血前６０m i n给予体积分数０．０２的I S O诱导３０m i n，并于侧脑注射１０μL的D M S O，再行I/R.１．２．２㊀神经功能损伤和T M S评分㊀采用L o n g a评分法对缺血再灌注后２４h的各组大鼠进行神经功能评估.神经功能损伤评分：无神经损伤记为０分，左前肢出现伸展障碍记为１分，向左打圈记为２分，行走时向左侧倾斜记为３分，意识昏迷记为４分，死亡记为５分；评分越高神经功能损伤程度越严重. T M S评分：各组大鼠在再灌注后２h进行T M S评分，参照L O N G A等[９]报道的方法对大鼠抓屏㊁抓绳和平衡木等３个项目的检测，评分越高表明神经运动功能越好.
１．２．３㊀T T C法检测梗死面积㊀在各组大鼠处理结束后，脱臼处死大鼠.取脑组织，并做厚度为２mm 的冠状组织切片，以１０g/L的T C溶液染１５~２０m i n，其中呈红的为正常脑组织，呈白的为梗死区域脑组织.以４０g/L多聚甲醛进行固定.采用I m a g eＧP r oP l u s６．０软件对染切片进行分析.梗死面积(％)＝白区域面积/(白区域面积＋红区域面积)ˑ１００％.
１．２．４㊀T U N E L法检测神经细胞凋亡㊀采用４０g/ L多聚甲醛对各组大鼠脑组织固定后，以石蜡进行包埋切片.根据T U N E L试剂盒说明书步骤进行染.其中，呈绿荧光的为阳性细胞.在４００倍光镜下随机选取５个视野统计阳性细胞数，以阳性细胞数与总细胞数的比值表示神经细胞的凋亡率.１．２．５㊀W e s t e r nb l o t检测海马组织中N FＧκB p６５㊁B c lＧ２和C l e a v e dC a s p a s eＧ３蛋白的表达㊀向各组脑组织匀浆中加入细胞裂解液提取总蛋白，经B C A法定量总蛋白后，将蛋白样品上样至S D SＧP A G E凝胶中进行电泳.待完全分离后，结束电泳.恒流转至硝酸纤维素膜后，加入１ʒ１０００的特异性一抗(N FＧκB p６５㊁B c lＧ２和C l e a v e dC a s p a s eＧ３)４ħ下孵育２h.次日，加入１ʒ２０００的辣根过氧化酶标记的二抗室温孵育２h.暗室内显影曝光后，以G A P D H为对照，采用凝胶成像系统扫描分析.１．２．６㊀E L I S A法检测脑组织中T N FＧα和I LＧ１β的
㊀
２期朱婧，等．异氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制２５７
含量㊀取各组大鼠的脑组织制备匀浆，严格参照E L I S A试剂盒说明书步骤检测各组大鼠脑组织中T N FＧα和I LＧ１β的含量.
１．３㊀统计学处理
采用S P S S２２．０软件进行统计学分析，计量资料数据以 xʃs形式表示，多组组间数据比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用S N KＧq检验分析.以P＜０．０５为差异有统计学意义.
２㊀结㊀㊀果
２．１㊀各组神经功能的比较
镶嵌图形测验与假手术组比较，其余４组的神经功能损伤评分明显升高，而T M S评分明显降低(F＝３８．６２６㊁４０４．１３０,P＜０．０５)；与I/R组相比,I/R＋I S O组㊁I/ R＋I S O＋P D T C组和I/R＋I S O＋D M S O组的神经功能损伤评分均明显降低，而T M S评分明显升高(q＝７．７７６~１５．２３１,P＜０．０５)；与I/R＋I S O组相比,I/R＋I S O＋P D T C组的神经功能损伤评分明显降低，而T M S评分明显升高(q＝４．０３０㊁１２．１２４, P＜０．０５)，但I/R＋I S O＋D M S O组无显著差异(q＝０．４０３㊁０．５０１,P＞０．０５).见表１.
２．２㊀各组大鼠神经细胞凋亡率与脑组织梗死面积的比较
I/R组㊁I/R＋I S O组㊁I/R＋I S O＋P D T C组和I/R＋I S O＋D M S O组大鼠神经细胞凋亡率和脑组织梗死面积较假手术组均明显升高(F＝１１１．９５２㊁２７２．９１０,P＜０．０５).I/R＋I S O组㊁I/R＋I S O＋P D T C组和I/R＋I S O＋D M S O组大鼠神经细胞凋亡率和脑组织梗死面积较I/R组均明
显降低(q＝１１．３６１~１９．２３７,P＜０．０５)；并且,I/R＋I S O＋P D T C组明显低于I/R＋I S O组(q＝５．２４８㊁９．２１１, P＜０．０５)，而I/R＋I S O＋D M S O组与I/R＋I S O组比较差异无显著意义(q＝１．０４０㊁１．３４８,P＞０．０５).见表２.
２．３㊀各组大鼠海马组织中N FＧκB p６５、B c lＧ２以及C l e a v e dC a s p a s eＧ３蛋白表达的比较
与假手术组大鼠相比，其余４组中N FＧκB p６５和C l e a v e dC a s p a s eＧ３蛋白的表达水平均明显升高，而B c lＧ２蛋白的表达水平均明显降低(F＝４３．９２９~１１４．７５０,P＜０．０５).同时，与I/R组相比，除假手术组外的另外３组中N FＧκB p６５和C l e a v e dC a s p a s eＧ３蛋白表达明显降低,B c lＧ２蛋白表达明显升高(q＝９．１９２~１２．３２８,P＜０．０５)；并且，在I/R＋I S O＋P D T C组中上述变化幅度明显小于I/R＋I S O组(q＝５．５２７~９．９００,P＜０．０５)，而I/R＋I S O组与I/ R＋I S O＋D M S O组无显著差异(q＝０．８５０~１．４１４, P＞０．０５).见图１和表３.
表１㊀各组神经功能评分比较(n＝１０, xʃs)
入目三分组别神经功能损伤评分T M S评分
A组０．２２ʃ０．１５８．８４ʃ０．６７
B组５．５８ʃ０．２４∗４．２５ʃ０．２８∗
C组４．０６ʃ０．１８∗＃６．４８ʃ０．３５∗＃
D组２．８５ʃ０．１２∗＃ә７．５８ʃ０．５４∗＃ә
E组４．１１ʃ０．１５∗＃６．３７ʃ０．４２∗＃
㊀㊀注：与A组相比,∗P＜０．０５；与B组相比,＃P＜０．０５；与C组相比,әP＜０．０５.
表２㊀各组大鼠神经细胞凋亡率与脑组织梗死面积的比较(n＝１０,χ/％, xʃs)
组别神经细胞凋亡率梗死面积
A组３．２５ʃ１．４６２．４５ʃ１．３８
B组４８．６５ʃ２．０８∗３７．４８ʃ２．１５∗
C组２９．５２ʃ１．６３∗＃２２．５７ʃ３．４２∗＃
D组２０．３６ʃ１．１８∗＃ә１６．２６ʃ１．２７∗＃ә
E组２８．１８ʃ２．０８∗＃ә２３．８２ʃ１．３６∗＃ә
㊀㊀注：与假手术组相比,∗P＜０．０５；与I/R组相比,＃P＜０．０５；与I/R＋I S O组相比,әP＜０．０５
.
A：假手术组,B:I/R组,C:I/R＋I S O组,D:I/R＋I S O＋P D T C 组,E:I/R＋I S O＋D M S O组.
图１㊀W e s t e r nb l o t检测N FＧκB p６５㊁B c lＧ２和C l e a v e dC a s p a s eＧ３蛋白的表达
表３㊀各组脑组织相关蛋白比较(n＝１０, xʃs)
组别N FＧκB p６５㊀B c lＧ２㊀C l e a v e dC a s p a s eＧ３A组０．０９ʃ０．０２０．５１ʃ０．０３０．２６ʃ０．０２
B组０．４９ʃ０．０３∗０．２５ʃ０．０２∗０．７５ʃ０．０６∗
C组０．３６ʃ０．０３∗＃０．４２ʃ０．０３∗＃０．４８ʃ０．０５∗＃
D组０．２２ʃ０．０２∗＃ә０．３３ʃ０．０２∗＃ә０．３５ʃ０．０３∗＃ә
E组０．３４ʃ０．０２∗＃０．４４ʃ０．０３∗＃０．４６ʃ０．０３∗＃
㊀㊀注：与假手术组相比,∗P＜０．０５；与I/R组相比,＃P＜０．０５；与I/R＋I S O组相比,әP＜０．０５.
２．４㊀各组大鼠脑组织中炎症因子T N FＧα和I LＧ１β含量的比较
与假手术组相比，其余４组中T N FＧα和I LＧ１β含量均明显升高(F＝２０．６１３㊁３０．１９７,P＜０．０５).I/ R＋I S O组㊁I/R＋I S O＋P D T C组和I/R＋I S O＋
㊀
２５８青㊀岛㊀大㊀学㊀学㊀报㊀(医㊀学㊀版)５７卷
D M S O组中T N FＧα和I LＧ１β含量较I/R组均明显降低(q＝５．２４４~７．３８１,P＜０．０５).同时,I/R＋I S O＋P D T C组明显低于I/R＋I S O组(q＝３．５８０㊁３．６２８,P＜０．０５)，而I/R＋I S O＋D M S O组与I/R＋I S O组比较差异无显著性(q＝０．２１８㊁０．６３６,P＞０．０５).见表４.
表４㊀各组脑组织T N FＧα和I LＧ１β含量比较(n＝１０,ρ/ n g L－１, xʃs)
组别T N FＧαI LＧ１β
A组８１．２８ʃ５．３６４５．５７ʃ３．６４
B组１２８．４６ʃ８．７５∗７８．８６ʃ５．２８∗
C组１０７．８５ʃ６．９２∗＃６１．７５ʃ３．４２∗＃
D组９３．７８ʃ５．２６∗＃ә５３．５８ʃ３．２６∗＃ә
E组１１０．３５ʃ７．１３∗＃６２．２４ʃ３．５５∗＃
㊀㊀注：与假手术组相比,∗P＜０．０５；与I/R组相比,＃P＜０．０５；与I/R＋I S O组相比,әP＜０．０５.
３㊀讨㊀㊀论
在I/R过程中，中性粒细胞和内皮细胞等可通过释放T N FＧα㊁I LＧ１β等炎症因子启动炎症反应的发生，加重细胞损伤，而炎症因子的释放受多种信号通路调控[１０Ｇ１３].另外，神经细胞凋亡是导致脑I/R 损伤的重要环节，而信号转导是介导细胞凋亡启动的重要前提[１４Ｇ１５].因此，寻有效抑制细胞凋亡和改善炎症反应的信号靶点对减轻脑I/R损伤具有重要意义.
众所周知,N FＧκB是广泛存在于细胞内的多效核转录因子,p６５是其重要的功能性亚单位，翻译后修饰能够精细地激活N FＧκB信号通路，进而调控多种细胞基因，参与细胞的增殖㊁迁移㊁凋亡㊁炎症和免疫反应等过程[１６Ｇ１７].目前多项研究显示,N FＧκB与中枢神经系统疾病㊁肿瘤和心血管疾病等多种疾病的发生发展密切相关[１８Ｇ２０]，是多种药物介入方面潜在的靶标.
I S O是一种挥发性麻醉剂，一项研究证实I S O 预处理可通过激活A k t/m T O R/s６K信号通路减轻I/R损伤诱导的神经功能缺损㊁梗死体积㊁脑水肿和细胞凋亡等[７].P E N G等[２１]指出,I S O通过T G FＧβ２/S m a d３信号通路增强V E G F和C D３４的活化来减轻I/R损伤.此外,I S O还能够有效缓解大鼠脑I/ R损伤[２２].Z H A O等[２３]研究结果显示，在脑I/R 损伤后大鼠脑组织中N FＧκB信号通路被
激活，脑梗死体积增大和病理改变加重，神经功能障碍明显，而抑制N FＧκB信号通路后，大鼠脑I/R损伤可明显减轻.Z H A N G等[２４]研究显示，脂联素通过抑制海马中的P３８ＧMA P K信号通路来改善I S O引起的老年大鼠认知功能障碍.另一项研究显示,I S O诱导C UM S小鼠中B D N FＧT r k B信号传导产生抗抑郁作用[２５].以上研究提示,I S O能够调控不同信号通路在多种疾病中发挥作用.
本研究通过构建I/R损伤大鼠模型,I S O预处理后I/R损伤大鼠T M S评分㊁B c lＧ２表达水平均明显升高，而神经功能损伤评分㊁神经细胞凋亡率和脑组织梗死面积㊁N FＧκB p６５和C l e a v e dC a s p a s eＧ３表达水平㊁T N FＧα和I LＧ１β含量均明显降低.B c lＧ２是公认的抑凋亡基因,C a s p a s eＧ３是凋亡的关键执行因子，活化的C a s p a s eＧ３以C l e a v e dC a s p a s eＧ３形式存在；两者均在脑I/R损伤的细胞凋亡过程中发挥着重要作用[２６Ｇ２７].本文结果提示,I S O预处理可通过抑制神经细胞凋亡和减弱炎症反应以发挥保护脑I/R损伤的作用.而以N FＧκB信号通路抑制剂P D T C作用后,I/R损伤大鼠的T M S评分㊁B c lＧ２表达水平均进一步升高，而神经功能损伤评分㊁神经细胞凋亡率和脑组织梗死面积㊁N FＧκB p６５和C l e a v e d C a s p a s eＧ３表达水平㊁T N FＧα和I LＧ１β含量进一步降低.本文研究结果表明,I S O对脑I/R损伤的保护作用进一步增强.提示,I S O可通过抑制N FＧκB信号通路减少神经细胞凋亡和减轻炎症反应，进而减轻脑I/R损伤发挥神经保护作用.
综上所述,N FＧκB信号通路在脑I/R损伤过程中发挥着重要作用,I S O预处理可通过抑制其激活抑制神经细胞凋亡和炎症反应来减轻脑I/R损伤.本研究为脑I/R损伤发病机制的深入研究提供实验依据，并为I
S O用于脑I/R损伤提供一定的理论基础.然而，本实验未涉及I S O是否调控其他信号通路尚显不足，后续研究将对此进行补充和完善，且大鼠体内实验与临床试验也有一定差距,I S O 用于脑I/R损伤仍然需要大量的研究.
[参考文献]
[１]HU G Q,D U X,L IYJ,e t a l．I n h i b i t i o no f c e r e b r a l i s c h e m i a/ r e p e r f u s i o ni n j u r yＧi n d u c e da p o p t o s i s:n i c o t i f l o r i na n dJ A K２/
S T A T３p a t h w a y[J]．N e u r a lR e g e n e r a t i o nR e s e a r c h,２０１７,１２
(１):９６Ｇ１０２．
[２]Q U Y,Z H A N G H L,Z H A N G X P,e t a l．A r a c h i d o n i ca c i d
a t t e n u a t e s
b r a i n d a m a g e i n a r a tm o d e l o f i s
c h e m i a/r e p e r f u s i o n
b y i n h i b i t i n g i n f l a mm a t o r y r e s p o n s ea n do x i d a t i v es t r e s s[J]．
㊀
２期朱婧，等．异氟烷预处理对大鼠脑缺血再灌注损伤的作用及机制２５９
㊀㊀H u m a n&E x p e r i m e n t a lT o x i c o l o g y,２０１８,３７(２):１３５Ｇ１４１．[３]F A N GLQ,G A O H M,Z H A N G W N,e t a l．R e s v e r a t r o l a lＧl e v i a t e s n e r v e i n j u r y a f t e r c e r e b r a l i s c h e m i aa n dr e p e r f u s i o n i n m i c e b y i n h i b i t i n g i n f l a mm a t i o na n da p o p t o s i s[J]．I n t e r n a t i oＧn a l J o u r n a l o f C l i n i c a l a n dE x p e r i m e n t a lM e d i c i n e,２０１５,８(３):３２１９Ｇ３２２６．
[４]H E H,X U C,Z H E N GL,e t a l．P o l y p h y l l i nⅦi n d u c e s a p o pＧt o t i c c e l l d e a t h v i a i n h i b i t i o n o f t h e P I３K/A k t a n dN FＧκB p a t hＧw a y s i n A５４９h u m a nl u n g c a n c e rc e l l s[J]．M o l M e d R e p,２０２０,２１(２):５９７Ｇ６０６．
[５]S U Y L,WA N G X,MA N N M,e t a l．M y e l o i dc e l lＧt a r g e t e d m i RＧ１４６am i m i c i n h i b i t sN FＧκBＧd r i v e n i n f l a mm a t i o na n dl e uＧk e m i a p r o g r e s s i o n i nv i v o[J]．B l o o d,２０２０,１３５(３):１６７Ｇ１８０．[６]WU Y,HU Y,WA N G B,e t a l．D o p a m i n eU s e s t h eD R D５Ｇ
A R R B２ＧP P２A S i g n a l i n g A x i st o
B l o c kt h e T R A F６ＧM e d i a t e d
N FＧκBP a t h w a y a n dS u p p r e s sS y s t e m i c I n f l a mm a t i o n[J]．M o l
C e l l,２０２０,７８(１):４２Ｇ５６．e６．
[７]Y A N W,C H E NZ,C H E NJ,e t a l．I s o f l u r a n e p r e c o n d i t i o n i n g p r o t e c t s r a t b r a i n f r o mi s c h e m i a r e p e r f u s i o n i n j u r y v i a u pＧr e g uＧl a t i n g t h eH I FＧ１αe x p r e s s i o n t h r o u g hA k t/m T O R/s６Ka c t i v aＧt i o n[J]．C e l l u l a ra n d M o l e c u l a r B i o l o g y(N o i s yＧL eＧG r a n d,
F r a n c e),２０１６,６２(２):３８Ｇ４４．
[８]杨玉琪，王胜，司军强，等．异氟烷后处理减轻大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤时T G FＧβ３/S m a d３信号通路与神经元凋亡的关
系[J]．中华麻醉学杂志,２０２０,４０(４):４１６Ｇ４２０．[９]L O N G AEZ,W E I N S T E I NPR,C A R L S O NS,e t a l．R e v e rＧs i b l em i d d l ec e r e b r a l a r t e r y o c c l u s i o n w i t h o u tc r a n i e c t o m y i n r a t s[J]．S t r o k e,１９８９,２０(１):８４Ｇ９１．
小黑眼
[１０]朱明燕．血清淀粉样蛋白A对T H PＧ１巨噬细胞炎症反应及S RＧB I表达的影响[C]．第十二次全国动脉硬化性疾病学术会
议论文集,２０１３:４５Ｇ４６．
[１１]姚茹冰，牟慧，赵智明，等．青藤碱对佐剂性关节炎大鼠T L R４/ M y D８８信号通路的影响[J]．蚌埠医学院学报,２０１５,４０(４):４２８Ｇ４３０,４３３．
[１２]卢森，陈秋华，黄英姿．J A K/S T A T信号通路在肺纤维化中作用的研究进展[J]．国际呼吸杂志,２０１５,３５(１２):９５１Ｇ９５３．[１３]X I A N GB,Z HO N GP,F A N GL,e t a l．m i RＧ１８３i n h i b i t sm iＧ
c r o g l i aa c t i v a t i o na n de x p r e s s i o n o fi n f l a mm a t o r y f a c t o r si n
r a t sw i t hc e r e b r a l i s c h e m i ar e p e r f u s i o n v i a N FＧκB s i g n a l i n g p a t h w a y[J]．E x p T h e rM e d,２０１９,１８(４):２５４０Ｇ２５４６．[１４]L I U H,R E N X,MA C．E f f e c to fb e r b e r i n eo na n g i o g e n e s i s
a n d H I FＧ１α/V E G Fs i g n a l t r a n s d u c t i o n p a t h w a y i nr a t s w i t h
c e r e b r a l i s c h e m i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y[J]．JC o l l P h y s i c i a n s S u r g
P a k,２０１８,２８(１０):７５３Ｇ７５７．
[１５]T E N G L,C H E N W,Y I N C,e ta l．D e x m e d e t o m i d i n ei mＧp r o v e s c e r e b r a l i s c h e m i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y i n r a t s v i a e x t r a c e lＧl u l a r s i g n a lＧr e g u l a t e dK i n a s e/C y c l i c a d e n o s i n em o n o p h o s p h a t e r e s p o n s e e l e m e n t b i n d i n gp r o t e i ns i g n a l i n gp a t h w a y[J]．W o r l d
N e u r o s u r g,２０１９,１２７:e６２４Ｇe６３０．
[１６]吴琼，王乐锋，张妍淞，等．表没食子儿茶素没食子酸酯通过N FＧκB通路抑制脂多糖诱导的巨噬细胞向M１表型极化[J]．食品科学,２０１８,３９(０１):１４２Ｇ１４８．
[１７]吴军霞，马阿火．柳氮磺吡啶联合糖皮质激素对老年溃疡性结肠炎患者疗效㊁免疫功能㊁血清炎症因子及肠黏膜N FＧκB㊁
I C AMＧ１㊁V C AMＧ１的影响[J]．中国老年学杂志,２０１８,３８(７):
１６３０Ｇ１６３２．
[１８]C A V I E D E S A,L A F O U R C A D E C,S O T O C,e t a l．B D N F/ N FＧκBs i g n a l i n g i
nt h en e u r o b i o l o g y o fd e p r e s s i o n[J]．C u r r P h a r m D e s,２０１７,２３(２１):３１５４Ｇ３１６３．
[１９]T A N I G U C H IK,K A R I N M．N FＧκB,i n f l a mm a t i o n,i mm u n iＧt y a n d c a n c e r:c o m i n g o f a g e[J]．N a tR e v I mm u n o l,２０１８,１８(５):３０９Ｇ３２４．
[２０]S O R R I E N T O D,I A C C A R I N O G．I n f l a mm a t i o na n dc a r d i oＧv a s c u l a r d i s e a s e s:t h em o s t r e c e n t f i n d i n g s[J]．I n t JM o l S c i,２０１９,２０(１６):３８７９Ｇ３８８２．
[２１]P E N G L,Y I NJ,WA N GS,e t a l．T G FＧβ２/S m a d３s i g n a l i n g p a t h w a y a c t i v a t i o nt h r o u g he n h a n c i n g V E G Fa n dC D３４a m eＧl i o r a t e sc e r e b r a li s c h e m i a/r e p e r f u s i o ni n j u r y a f t e ri s o f l u r a n e p o s tＧc o n d i t i o n i n g i n r a t s[J]．N e u r o c h e m R e s,２０１９,４４(１１):２６０６Ｇ２６１８．
[２２]L U O Y,Z HA N GF,X I A N G D IY U,e t a l．E f f e c to f i s o f l uＧr a n e p r e c o n d i t i o n i n g o na u t o p h a g y d u r i n g f o c a l c e r e b r a l i s c h eＧm i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y i n r a t s[J]．C h i n e s e J o u r n a l o fA n e s t h eＧs i o l o g y,２０１６,３６(１０):１２０２Ｇ１２０５．
[２３]Z H A O H,C H E N Z,X I E LJ,e t a l．S u p p r e s s i o no fT L R４/ N FＧκBs i g n a l i n gp a t h w a y i m p r o v e sc e r e b r a l i s c h e m i aＧr e p e r f uＧs i o n i n j u r y i n r a t s[J]．M o l e c u l a rN e u r o b i o l o g y,２０１８,５５(５):４３１１Ｇ４３１９．
[２４]Z H A N GJC,Z HA N G WJ,Z H A O Q,e t a l．A d i p o n e c t i n i mＧp r o v e s i s o f l u r a n eＧi n d u c e dc o g n i t i v ed y s f u n c t i o n i ne l d e r l y r a t s v i a i n h i b i t i n gp３８ＧMA P Ks i g n a l p a t h w a y i nh i p p o c a m p u s[J]．
E u rR e vM e dP h a r m a c o l S c i,２０１９,２３(３S u p p l):１７１Ｇ１７６．[２５]Z H A N GSS,T I A N Y H,J I NS J,e t a l．I s o f l u r a n e p r o d u c e s
a n t i d e p r e s s a n t e f f e c t s i n d u c i n g B D N FＧT r k B s i g n a l i n g i nC UM S
m i c e[J]．P s y c h o p h a r m a c o l o g y(B e r l),２０１９,２３６(１１):３３０１Ｇ３３１５．
[２６]C H E N X,C H E N G C,Z U O X,e ta l．A s t r a g a l i na l l e v i a t e s
c e r e b r a l i s c h e m i aＧr e p e r f u s i o n i n j u r y b y i m p r o v i n g a n t iＧo x i
d a n t
a n da n t iＧi n f l a mm a t o r y a c t i v i t i e s a n d i n h i
b i t i n g a p o p t o s i s p a t hＧ
w a y i n r a t s[J]．B M C C o m p l e m e n t M e d T h e r,２０２０,２０(１):１２０Ｇ１３０．
[２７]L I U M B,WA N G W,G A OJM,e t a l．I c a r i s i d eⅡa t t e n u a t e s
c e r e b r a l i s c h e m i a/r e p e r f u s i o nＧi n
d u c
e db l o o dＧb r a i nb a r r i e r d y sＧ
f u n c t i o n i nr a t sv i ar e
g u l a t i n g t
h eb a l a n c eo f MM P９/T I M P１
[J]．A c t aP h a r m a c o l S i n,２０２０,４１(１２):１５４７Ｇ１５５６．
(本文编辑㊀于国艺)
豫公网安备41160202000603
站长QQ:729038198
关于我们
投诉建议