氨基葡萄糖生物制造关键技术研究

氨基葡萄糖生物制造关键技术研究
商业报道N-乙酰氨基葡萄糖(N-acetylglucosamine)是葡萄糖的一个,基被氨基取代后的衍生物,又称作N-乙
酰-D-葡萄糖胺,化学名为2-乙酰氨基-2-脱氧-D-葡萄糖。N-乙酰氨基葡萄糖在酸性条件下可脱去乙酰基转化为氨基葡萄糖。氨基葡萄糖广泛应用于医药、食品、化妆品等领域,具有较大的市场需求。
目前,N-乙酰氨基葡萄糖的生产方法主要为甲壳素水解法,通过使用强酸对生物中的甲壳素进行酸解,使其相互连接的!键断裂,从而解离出N-乙酰氨基葡萄糖单体。该方法存在强酸、水解条件强、虾壳蟹壳部分人过敏等缺陷。微生物法是利用微生物GleNAc,并
unproper目标产物分泌到发酵液中的方法。如Kim、Jin-Yeon等(2019)通过代谢工程构建重组谷氨酸产生N-乙酰葡糖胺(GleNAc)"为产生GleNAc的基,分别从谷氨酸棒杆菌产生菌株13032中删除编码N-乙酰葡糖胺-6-磷酸脱乙酰酶、葡糖胺-6-磷酸脱氨N-乙酰甘露糖胺-6-磷酸差向异构酶的基因nagA、nagB和nanE,重组菌株被命名为KG208。此外,分别源自谷氨酸棒杆菌和酿酒酵母的编码葡糖胺-6-磷酸葡糖胺-6-磷酸N-乙酰转移酶的基因glmS和gnal在几种表达载体中表达。在g(mS和gn,+表达的几种组合中,在启动子控制下表达glmS gnal的重组细胞在烧瓶培养物中产生1.77g/L 的GlcNAc和0.63g/L的GlcNAc。JP199********具有N-乙酰葡糖胺-1-磷酸酰转移酶(GlmU)活性的,的DNA O,通过大规模生产于谷氨酸
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属的微生物的GlmU多肽。通过使用该酶,可有效地生成尿昔5'-二磷酸-N-乙酰葡糖胺。Jiang Zhu等(2018)开发了一种全细胞生物催化过程,用于从N-乙酰氨基葡萄糖(GlcNAc)氨基葡萄糖(GlcN)o其通过表达来源于的几丁二糖脱乙酰酶(Dac)大肠杆菌和枯草芽砲杆菌作为有效的生物催化剂°为增强GlcN产生,最佳反应条件:生物催化剂18.6g/L,温度40",pH7.5,GlcNAc质量浓度50g/L,反应时间3h°在上述条件下,GlcN的最大质量浓度为35.3g/L,3-L生物反应器中的摩尔转化率为86.8%°郑昭奕(2018)选用了谷氨酸状杆菌(Cor-ynebacterium glutamicum)为对象进行代谢路径改造合成GlcNAc。论文主要进行了以下工作:1)通过过基因glnA对谷氨酸状途径中加强谷氨酰胺合成途径表达,增强GlcNAc氨基供氨酰胺合成,  C.gW-SG的GlcNAc产量达到2.34g/L。通过敲除基因poxB对副产物乙酸合成途径阻断并将GlcNAc途径中关键酶基因gnal进行整合,  C.gWBG-SGA的GlcNAc产量  2.62g/L;
2)通过对GlcNAc途径主要竞争途径中的关键基因p<=A进行弱化,采用了anti-sense RNA和CRISPRi两
方式进行"弱化效果最好的是通过anti-sense RNA进行弱化的  C.gWBG-SGAA1的GlcNAc产量达
3.11g/L;3)确定  C.gWBG-SGAA41发酵过程中诱导剂最优添加时间和添加浓度分别为接种后2 h0.8mmol/L IPTG O对基中重要成分进行浓度优化,当葡萄糖质量浓度为85g/L,玉米浆质量浓度为40g/L,尿素质量浓度为5g/L时最为合适,菌株C.gWBG-SGAA1达到螺旋湿喷机
4.48g/L°CN201611001491.7提供了一生产氨基葡萄糖的方法,包括如下步骤:N-乙酰氨基葡萄糖为原料,在的作用下,生产氨基葡萄糖;所述为表达功蛋白的,是将编码所述功蛋白的功基因导入出得到的;所述功能蛋白为N-乙酰-6-磷酸氨基葡萄糖脱乙酰酶或几丁二糖脱乙酰酶°采用该发明提供的方法制备氨基葡萄糖,反应条件温和、工艺路线简单、产物纯度高、适合大的工业化生产,非常适于推广应用CN20181030209
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忆白石老人5.0公开了一生产N-乙酰氨基葡萄糖的氨酸棒杆菌及其应用,其氨酸状杆菌S9114作为出发菌株,使用谷氨酸棒杆菌与大肠杆菌的穿梭表达载体pJYW-4乙酰氨基葡萄糖合成途径中的一个关键基因:来源于秀丽隐杆线I的氨基葡萄糖-6-磷酸乙酰转移酶GNA1,通过在GNA1基因的3'非翻译区入性回文加强乙酰氨基葡萄糖途径,提高乙酰氨基葡萄糖的产量,得产乙酰氨基葡萄糖氨酸,产量
6.1g/L°
生物法氨基葡萄糖具有很多优点,对、产物得率高、反应条件温和、成本较低、生产
时间较等,市场应用前广°高产N-乙酰氨基葡萄糖的食Q优生产,氨基葡萄糖的绿高生产系,具有要的意义°
(江南大学图书馆张)
2020年第39卷第12期

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