附录 III A薄层谱 BP(2.2.27 )

薄层谱法
(同样适用于EP2.2.27)
薄层谱法是一种分离技术,这种技术采用由适当物质作为固定相均匀涂布在玻璃、金属或塑料的支持物上。在展开前,供试品液点样在薄层板上。分离原理是供试品溶解在溶剂中或合适的混合溶剂中(流动相)在薄层上(固定相)通过吸附、分配、离子交换或以上机制共同作用移动(展开)来实现的。
仪器
薄层板 谱法是按照4.1.1试剂(Appendix I A)项下描述的涂层板来进行的。
薄板预处理:在分离前用适当的溶剂来清洗薄板。可用适当的溶剂洗脱。在进行展开、浸渍或喷雾显过程中要将薄板浸透。使用时,如果需要,要在120℃干燥箱中加热20min活化薄板。
层析:使用适合薄层板大小的无活性、透明物质制成的层析缸,并有严密的盖子,底部平
整,或有双槽。水平展开的层析缸有一个装展开剂的槽,并且额外有一个装置用来引导展开剂到固定相。
微量加液器、微量注射器、有刻度的一次性毛细管:或其它适合于应用溶液的装置。
荧光检测装置:用来测量直接荧光或荧光抑制。
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显试剂:合适的装置通过喷雾、置蒸汽中或浸渍来检测分离斑点,加热可以促进分离斑点的可视性。
文件:应用能够提供可视化谱图(例如照片或电子文件)文件的装置。
方法:
点样:取规定体积的溶液点样,要距离底边和侧边合适的位置上,并且点样基线与底边平行;点样点一般为圆点,各圆点中心间的距离至少为10mm(高效薄层板间距为5mm),条带间边距5mm(高效薄层板间距为2mm)。点样点应尽量小,直径一般2-5mm(高效薄层板上直径为1-2mm)或危机干预10-20mm长的条带(高校薄层板为5-10mm)。
正文中,正常板和高效薄层板都使用时,高效薄层板的展开条件应在正常板的展开条件后用[ ]注明。
垂直展开 沿着层析缸的壁贴滤纸。向层析缸中加入适合层析缸大小的足够量的流动相,根据使用的薄层板的大小浸没一定深度的滤纸。为了饱和层析缸,密封顶盖,在20-25℃放置1h 如果无其它说明,在饱和层析缸中进行谱分离。应用以上提到的规定体积的溶剂。当溶剂已从点样溶液中蒸发,则将薄层板垂直置于层析缸中,确保斑点或条带要在流动相液面以上。密封层析缸,避光放置在20-25℃下。待展开至规定距离取出薄层板,测定点样点与溶剂前沿的距离。晾干,按规定检视谱图。
对于双向谱法,第一次展开后干燥薄层板,将薄层板转动90°,按第一次展开方法进行第二次展开。
水平展开 应用以上规定体积的溶剂。当溶剂已从点样溶液中蒸发,利用注射器或移液管将足量的流动相引入槽中,将薄层板水平放入分离室中,根据产品说明书连接流动相引导装置。如果有规定,则同时两侧展开薄层板。密封层析缸,避光放置在20-25℃下。待展开至规定距离取出薄层板,晾干,按规定检视谱图。
对于双向谱法,第一次展开后干燥薄层板,将薄层板转动90°,按第一次展开方法进行第二次展开。
目测
鉴别    供试品溶液谱图上的主斑点与对照品溶液谱图上对应的斑点比较颜、大小和比移值(Rf)。
比移值(Rf)的定义为是基线到展开斑点中心的距离与点样点至展开剂前沿的距离的比值。
鉴别的分离能力的验证 一般4.1.1 试剂部分描述的适应性检查提供的性能就足够了。只有在特殊情况下,专论中会有其它的性能标准。
有关物质检查
供试品溶液谱中的除主斑点外的其它斑点与含杂质对照品溶液和供试品溶液自身稀释得到的对照品溶液中的相应斑点比较。
分离能力的验证 分离能力验证的要求在相关专论中有提供。
检测能力的验证 在大多稀释的对照品溶液的谱图上的斑点或条带如果清晰可见,则认为检测能力良好。
定量测定
分辨率和分离度的要求在相关专论中有描述。
可由薄层谱分离并且对紫外照射有反应的物质可以通过合适的仪器来直接在薄层板上检测。移动薄层板或检测仪器,通过测量入射光的反射率或透光率来检测薄层板。同样利用合适的光学系统则可以测量荧光。含有放射性核素的物质可以通过三种方式进行定量:可直接通过移动薄层板靠在一合适计数器旁或反之(见放射品制备 0125),或通过将薄层板切成小条,利用一合适的计数器测量每个小条的放射性,或刮去固定相,将其溶解于合适的闪烁体中,利用液体闪烁计数器测量放射性。
仪器 直接测量薄层板的仪器包括:
一个可以准确定位,并且重复分配薄层板上物质的量的仪器;
一个可以移动薄层板的机械装置或者沿着X-轴或Y-轴的测量设备;
记录仪和一个合适的积分仪或计算机;
对紫外照射有反应的物质:有光源的光度计,一个可以产生单光的光学设备和一个灵敏的光电元件用来测量反射率或透光率。如果测量荧光,额外还需要一个单光滤光器,来选择一个特殊的发光光谱区。
含放射性的物质:放射性计数器。计数设备的线性范围要进行验证。
方法 按规定制备供试品溶液,如果必要,用同样溶剂制备对照品溶液。点样相同体积的每种溶液于薄层板上,展开。                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                     
考风考纪对紫外可见光照射反应的物质:制备并点样不少于三个含检测物的对照品溶液,这些对照品溶液浓度跨越供试品溶液中期望的浓度值(约80100120%)。规定的试剂处理,记
录供试品溶液和对照品溶液谱图中的反射率、透光率或荧光量。利用测量结果计算供试品溶液中的物质量。
含放射性的物质:制备和点样含约100%2011湖北高考数学期望值的供试品溶液。利用径长函数确定放射性,报告每个峰的放射性作为放射性总量的百分比。
评估系统适用性的标准在谱分离技术(2.2.46)项下描述。调整谱参数以满足系统适用性标准的内容也在此章节给出。
以下是欧洲药典中没有的内容:
如果专论中说明避光或微弱光线,那么整个程序就应该在这些条件下实施。
如果没有另有规定,展开剂应展开距离基线15cm
“紫外灯,254nm”这个词说明了薄层板应该在在254nm波长处有最大输出量的紫外灯下检测,其他的最大波长可以说明。
second spot”的意思是除主斑点外的其他斑点。同样,“second band”的意思指除主谱带外
船长教学设计的其他谱带。
一旦规定使用喷雾技术,保证试够很好地喷雾是非常有必要的。当在目录中说明时可使用下面的方法。
方法
层析板干燥后,用20%硫酸的乙醇溶液喷射,在105℃加热30分钟,然后立即暴露于含亚硝酸气体的密闭的玻璃容器中约15分钟(亚硝酸气体可以在含有10% w/v亚硝酸钠及3% w/v碘化钾的溶液中滴加7M 硫酸制取)。然后将层析板在暖气流中放置15分钟,喷以0.5%w/v N-1-萘基)乙烷-12-二铵二氯化物的乙醇(96%)溶液。如有必要,待干燥后再喷射一次。
原物料:
Appendix A中描述了用于涂布的物质和预处理 的薄层板。除非另有规定,应按照规定的方法制备。市售的预处理薄层板也可用用于药典方法,只要这种固定相符合要求。

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