氯丙基键合硅胶固定相谱性能与应用
Ι
龚银汉 叶能心 萧湘竹 达世禄 王忠华
武汉大学化学系 武汉
dna甲基化检测方法提 要 研究了氯丙基键合硅胶固定相的高效液相谱性能和在分离二取代苯异构体 前列腺素差向异构体方面的应用 探讨了流动相组成 性质 值等对溶质保留和分离的影响 讨论了溶质保留机理和最佳谱分离条件∀对上述异构体进行了良好的分离 而且分离速度比一般的反相谱体系要好∀关键词 高效液相谱法 氯丙基键合固定相 二取代苯异构体 前列腺素分类号 前言
自从首次报道正相谱Π Π电荷转移相互作用固定相以来 因氯氟等卤素原子是较易极化的电负性原子 具有类似于苯环的Π轨道 所以对氯氟代烃基键合相的研究受到人们的关注 ∗ ∀我们已报道过氯丙基键合硅胶 的合成和表征 ∀氯丙基硅胶作为固定相的应用研究尚未见其它文献报道∀本文以甲醇Ù
水或甲醇Ù磷酸缓冲液为流动相 研究了苯二取代物 前列腺素 甲基 Α在 固定相上的保留行为 实现了上述异构体的分离∀
实验
仪器及试剂
高效液相谱仪分别由 高压输液泵 紫外检测器 型进样阀 积分仪或岛津 泵 紫外检测器 上海科学仪器厂 型台式记录仪 四川仪表四厂 组成∀不锈钢谱柱 ≅
∀
所用试剂均为 其中前列腺素样品由东北制药总厂提供∀样品以甲醇为溶剂配制成 ∗
Ù 的溶液∀流动相配制用二次蒸馏水∀ 实验方法
氯丙基键合硅胶 ∗ Λ 按前法
制备 键合
量 Ù 采用匀浆法装柱∀流动相以 砂漏斗过滤 超声脱气 待谱体系稳定后进样分离∀
结果与讨论
柱效
以 甲醇为流动相 以联苯为溶质 测定
的每米柱效为 ∀ 动力学曲线
以 甲醇为流动相 以联苯为溶质 ΗÙυ υ曲线见图 ∀由图 可以看出 柱子填充不甚理想 Η随υ增大而增大 ΗÙυ随υ增大趋于一条直线 表
明 柱适合于快速分离∀
图 ΧΠΣ柱的动力学曲线
Φιγ ΚινετιχχυρϖεσοφΧΠΣχολυ ν
ΧΠΣ谱性能研究
流动相甲醇含量对溶质保留的影响 以不
同体积比的甲醇Ù水为流动相 以苯二取代物为溶质 测定样品保留值 结果见表 ∀影响溶质保留和分离选择性的主要因素是疏水效应 电荷转移 极性作用等∀随流动相中甲醇含量的变化 起主导作用的谱保留机理有可能发生变化 故各类异构体洗出顺序不尽一致∀以甲醇Ù水为流动相 柱对大多数苯二取代物异构体有良好的分离选择性∀
缓冲溶液的 值对二取代苯异构体保留
的影响 以不同 值的 Ù 的磷酸缓冲溶
第 卷第 期 谱
年 月
Ξ国家自然科学基金资助项目 通讯联系人
本文收稿日期 修回日期
表 流动相组成对二取代苯在ΧΠΣ柱上保留的影响
Ταβλε Εφφεχτοφχο οσιτιονοφ οβιλε ηασεοντηερετεντιονοφδισυβστιτυτεδβενζενεσονΧΠΣχολυ ν
样 品
流动相组成 Β
Β Β
Β
Β
Β
Β郭庚茂简历
κχ
ακχακχ
α
κχ
α
κχαο 甲苯胺 ο 甲苯胺 甲苯胺 ο 苯二酚 ο
苯二酚 苯二酚
ο 氨基苯甲酸 ο
氨基苯甲酸 ο 硝基苯酚 ο
硝基苯酚 硝基苯酚
ο 氨基苯酚 ο 氨基苯酚 氨基苯酚
ο 苯二胺 ο
苯二胺
苯二胺
表中Α为溶质κχ与同组内第一个流出的异构体κχ的比值∀
液为流动相 测定 种二取代苯异构体的保留值 结果如图 所示∀
溶质保留决定于离解度引起的疏水性 极性的
变化 如硝基苯酚 由于 值低时有较强的疏水效应 值高时有强极性作用 从而导致保留值在
左右出现一个低谷 见图
∀图 溶质保留与流动相 Η值的关系
Φιγ Εφφεχτοφ Ηιν οβιλε ηασεσοντηερετεντιονοφσολυτεσ
硝基苯胺异构体 苯二甲酸异构体 硝基苯酚异构体∀
甲醇 缓冲溶液体系中溶质的保留行为 以
和 Ù 磷酸缓冲液Ù甲醇为流动相 测定二取代苯ο 异构体在 柱上的保留值∀随甲醇含量的降低 所有溶质的保留值均增加 各类异构体洗出顺序随流动相中甲醇含量的不同而发生变化∀以硝基苯酚为例 其异构体的保留值变化如图 所示∀芳香二取代苯异构体在甲醇 磷酸缓冲
溶液流动相中也能得到良好的分离∀几种二取代苯异构体在 柱上分离的典型谱图如图 所示∀
ΠΓΦ Α差向异构体在ΧΠΣ柱上的分离
前列腺素 是一类由 个碳原子组成的含五元环的不饱和烃类脂肪酸类化合物 在药学 生命科学等领域内具有重要意义 ∀各种前列腺及其差向异构体以硅胶 氰基键合硅胶正相
期 龚银汉等 氯丙基键合硅胶固定相谱性能与应用
谱分离 环糊精衍生化纤维素手性谱分离 已有报道
∀
图 两种流动相下硝基酚异构体在ΧΠΣ柱上的保留值的比较
Φιγ Τηεχο αρισονοφτηερετεντιονϖαλυεσοφνιτρο ηενολισο ερσονβοτηχηρο ατογρα ηιχ
σψστε σωητηδιφφερεντ οβιλε ηασεσ
流动相为磷酸盐缓冲液Ù白嘉轩
甲醇 流动相为甲醇Ù水∀ Ù Ù Ù
以不同比例的甲醇Ù水为流动相 用 紫
外检测器测定Ρ 甲基 Α及Σ 甲基 Α在 柱上的保留值 结果见表 ∀
在 Α的结构中 Σ体的 位及 位羟基处于同侧 易形成分子内氢键 其极性减弱 疏水性提高 导致Σ体的κ值高于Ρ体∀当甲醇含量低于 时 Α的Ρ Σ体能够实现分离∀图 为 Α典型谱分离图∀
结论
Χ 氯丙基键合硅胶是一种合成简单 具有优良
化学稳定性和谱性能的弱极性键合相 其分离样
品广 分离速度快∀对芳香化合物 前列腺差向异构体有良好的分离选择性 尤其适合于酸性化合物的分离∀对溶质的保留机理主要有疏水效应 电荷转移作用 极性及偶极 偶极作用∀ 还可以作为中间体进一步合成含各种功能团的键合相
∀等爱
图 几种二取代苯异构体分离典型谱图
Φιγ Τψ ιχαλχηρο ατογραηιχσε αρατιονοφσεϖεραλδισυβστιτυτεδβενζενεισο ερσ
甲苯胺的分离 流动相为甲醇Β水 Β 硝基酚的分离 流动相为甲醇Β水 Β
苯二甲酸的分离 流动相为 Ù 氨基酚的分离 流动相为 Β Ù
Β 苯二酚的分离 流动相为 Ù Β ∀
ο Β ο Β ο Ù Β Ù Β ο Β Ù Β
表 甲醇含量对Ρ Σ体保留的影响
Φιγ Εφφεχτοφ ετηανολχοντεντινελυεντοντηερετεντιονοφΠΓΦ Αε ι ερσ
样 品
流动相组成 Β
Β Β
Β Β Β Β Β Σ 甲基 Α Ρ 甲基 Α Ρ Σ相对保留值Α ΑΡ Σ
Ù
ε 谱 卷
图 ΠΓΦ ΑΡ Σ体典型谱分离图
Φιγ Τψ ιχαλχηρο ατογρα οφΠΓΦ Αε ι ερσ如何推动社会主义文化大发展大繁荣
流动相为甲醇 水 Β ∀
Β 参考文献
达世禄 张元伟 董亚琼 王忠华 谱
吴元鎏 药学学报
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宝马案Ι Σε αρατιονοφ∆ισυβστιτυτεδΒενζενεΙσο ερσανδ
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期 龚银汉等 氯丙基键合硅胶固定相谱性能与应用
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