01/2014:20631 2.6.31 口服草药医疗产品及其制剂用到的提取物的微生物检查1.微生物计数检测 总需氧微生物计数（TAMC）. 按照通用章节2.6.12描述的计数方法进行。 总酵母菌/霉菌计数（TYMC）. 按照通用章节2.6.12描述的计数方法进行。如果通用章节5.1.8涵盖的产品中本身具有很高的生物负载，使用含有抗生素的沙氏葡萄糖琼脂培养基比较适合。 2. 特定微生物检测
2-1 概述
这里描述的检测用于测定在规定条件下可以被观察到的特定微生物的不存在或存在受限。
该检测主要被设计用于测定一个产品、物质或制剂(此后统称为“产品”)是否符合已经建立微生物质量的规格。当用于该目的时，应遵循下列指令，包括所取样品的数量，然后按照下述说明评估结果。
信息系统集成
2.2 通用程序
根据通用章节2.6.12中的描述进行样品制备。
如果供试品具有抗菌活力，可通过通用章节2.6.12中的描述尽可能除去或中和。如果表面活性物质用于
制备样品，应根据通用章节2.6.12中的描述证明它们对微生物无毒性，且与所用灭活剂相容。
2.3 培养基的促生长性和抑制性、检测的适用性和阴性控制 必须确定检测方法对供试品中微生物的检测能力。如果检测过程或产品发生改
变，而这改变可能会影响检测结果，则必须确认该方法的适用性。
2-3-1测试菌株的制备
使用测试菌株的标准化稳定混悬液或按照下述说明制备。使用种子批培养保持技术(种子批系统)，确保用于培养的活性微生物从原始种子批最多传代5次。
2-3-1-1 需氧微生物：在30-35℃条件下，在含有大豆-酪蛋白消化物肉汤的容器中或大豆-酪蛋白消化物琼脂的容器中分别培养各种细菌检测菌株，培养18-24h。- 金黄葡萄球菌，如：ATCC 6538，NCIMB 9518，CIP 4.83，或NBRC 13276；-铜绿假单胞菌如：ATCC 9027，NCIMB 8626，CIP 82.118，或NBRC 13275；-大肠埃希氏菌如：ATCC 8739，NCIMB 8545，CIP 53.126，或NBRC 3972；
-肠道沙门氏菌Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimutium如：ATCC 14028或其替代品S. enterica subsp. enterica serovar Abony如：NBRC 100797，NCTC 6017，或CIP 80.39；
-枯草芽孢杆菌如：ATCC 6633，NCIMB 8054，CIP 52.62，或NBRC 3134。
周菊英paa使用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH 7.2的磷酸盐缓冲液配制测试混悬液。该混悬液在2小时内使用或在2°- 8°贮存条件下24小时内使用。
作为一种先制备然后稀释枯草芽孢杆菌活力细胞新鲜混悬液的替代方法，可制备稳定的孢子混悬液，然后使用合适的体积作为测试菌接种。该稳定的孢子混悬液可在2°-8°保存一段有效时间。
汉语翻译2-3-2. 阴性对照
为验证测试条件，用选定的稀释剂代替供试品作阴性对照。必须无微生物生长。当按2-4章节的描述检测产品时，也需进行阴性对照。需要对失败的阴性对照需进行调查。
南充和兴证券2-3-3培养基的生长促进性与抑制性
检测每批预制备的培养基，以及每一批由脱水培养基或各成分所配制的培养基。
按照表2.6.31.-1的描述验证相关培养基的适用性。
生长促进性检测，液体培养基—将少量(不多于100cfu)适宜的微生物接种至适宜的培养基上。在规定的温度下进行培养，培养的时间不超过检测所需的最短时间。30-35℃，在大豆-酪蛋白消化物肉汤上培养不超过3天。清晰可见的微生物生长应类似于以前试验且经认可批次的培养基所得到的结果。
生长促进性检测，固体培养基—采用表面铺展法，在每个培养板上接种少量(不多于100cfu)适宜的微生物。在规定的温度下进行培养，培养的时间不超过检测所需的最短时间。微生物的生长应类似于以前试验且经认可批次的培养基所得到的结果。
铵根离子抑制性能的检测，液体或固体培养基—将不少于100cfu的合适的微生物接种于合适的培养基上。在规定的温度下进行培养，培养的时间不短于检测规定的最长时间。应无被检测的微生物的生长。
指示性能的检测—采用表面铺展法，在每个培养板上接种少量(不多于100cfu)适宜的微生物。在规定的温度下进行培养，培养的时间应该在检测规定的范围内。菌落的外观和指示反应应类似于以前试验且经认可批次的培养基所得到的结果。2-3-4检测方法的适用性
对于每一种待检测的产品，均需按照2-4章节相关段落所述制备样品。混合时，往指定的生长培养基（
大豆酪蛋白消化物肉汤或缓冲蛋白胨培养基）中加入各种测试菌株。对于胆汁耐受革兰氏阴性菌的计数方法，单独培养大肠埃希菌和铜绿假单胞菌。对于大肠埃希菌和沙门氏菌的检测，单独培养特定微生物。
对于任何有抗菌活性的产品，则需要对检测程序进行修改（见通用章节2.6.12中的4-5-3部分）。
对于某种指定的产品，如果对其中规定检测的微生物的抑制活性无法被中和，则可假定被抑制的这种微生物在产品中不存在。
2-3-4-1不得检出的试验。在接种试验准备时使用相当于不多于100cfu的微生物。根据2-4相关章节使用规定的最短培养时间来进行检测。特定微生物必须被观察到2-4章节规定的指示反应。
2-3-4-2计数试验。半定量试验（可能数方法）。使用相当于不多于100cfu每克或每毫升微生物的产品。根据2-4相关章节使用规定的最短培养时间来进行检测。对应于0.1g或0.1ml产品的稀释度必须是阳性的。
2-4 检测程序
2-4-1胆汁耐受革兰氏阴性菌
2-4-1-1计数试验. 半定量试验（可能数方法）
2-4-1-1-1样品制备和预培养. 用不少于1g供试产品的1：10稀释液，按照通用章节2.6.12描述的方法制备一样品。但使用大豆酪蛋白消化物肉汤培养基作为选定的稀释液，混合并在20-25℃条件下培养一段时间，使细菌有足够时间复苏但不足以促进该微生物的增殖（2-3小时）。
2-4-1-1-2筛选和继代培养. 将上述培养液和/或，分别含有0.1g、0.01g、0.001g和0.0001g（或0.1ml、0.01ml、0.001ml和0.0001ml）供试产品的该培养液4个稀释度中的3个，（具体的选择依赖于特定产品要求的限度），分别接种至肠杆菌增菌肉汤中。在30-35℃条件下培养24-48小时。在结晶紫，中性红，胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，每一培养物于30-35℃继代培养18-24小时。
2-4-1-1-3结果判定. 如果有菌落生长，则判定为阳性结果。记录产生阳性结果的产品的最小数量及产生阴性结果的产品的最大数量。
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