联想家悦h360504/2010:20613
2.6.1
3.非无菌产品的微生物检测: 特定微生物的检测（4） 1.介绍
以下描述的几项检测可用于检测不得存在或限量存在的特定微生物，这些微生物可在规定的条件下检出。 设计这些检测，主要用于鉴定一种物质或制剂是否符合一个已建立的微生物质量规定。用于此目的时，可按如下规定确定取样数量，判定结果。
如果能证明它等同于药典的方法，可采用替代性的微生物的检测程序（包括自动化的方法）。
2 .一般性操作规程
按通用章节2.6.12所述制备样品。
若供试品有抑菌性活性，需按通用章节2.6.12所述尽可能的减少其抑菌性或中和。
如果样品制备过程中使用了表面活性剂，则必须按通用章节2.6.12所述证明表面活性剂对微生物的无毒性和它与所使用的钝化剂的相容性。
必须验证在有供试品存在的条件下检测方法检出微生物的能力。如果检测过程或产品发生了变化，且该变化可能影响检测的结果，则需证明其适用性。
3-1. 检测菌株的制备
使用稳定的标准检测菌株混悬液或按以下规定制备。采用种子菌培养保持技术，确保原代菌连续传代不超过5次。
3-1-1.需氧的微生物。将每种细菌检测菌株分别在大豆酪蛋白消化物肉汤培养基或大豆酪蛋白消化琼脂培养基上于30 - 35 ℃培养18 - 24小时。将白念珠菌的检测菌株在分别在萨布罗右旋糖琼脂培养基上或萨布罗右旋糖肉汤培养基上于20 - 25 ℃培养2 - 3天。
－金黄葡萄球菌如：ATCC 6538，NCIMB 9518，CIP 4.83或NBRC 13276；
（4）本章已通过药典协调，见章5.8.药典协调
－铜绿假单胞菌如：ATCC 9027，NCIMB 8626，CIP 82.118或NBRC 13275；
－大肠杆菌如：ATCC 8739，NCIMB 8545，CIP 53.126或NBRC 3972；
－肠道沙门菌：血清型为salmonella ica serptype typhimutium，如ATTC 14028，或其替代品salmonella ica serotype abony如NBRC 100797，NCTC 6017或CIP 80.39;
分压器
－白念珠菌如：ATCC 10231，NCPF 3179，IP 48.72或NBRC 1594；
用pH 7.0的氯化钠-蛋白胨缓冲溶液或pH 7.2的磷酸缓冲溶液配制供试混悬液。该混悬液在2小时内使用或在2 - 8 ℃贮存条件下24小时内使用。
3-1-2.梭菌属使用产孢梭菌如ATCC 11437 (NBRC 14293，NCIMB 12343,CIP 100651)或ATCC 19404(NCTC 532 或CIP 79.03)或NBRC 14293。在无氧条件下，将梭菌检测菌株在梭菌的增菌培养基中于30 - 35 ℃培养24 - 48小时。可用稳定的孢子混悬液代替孢梭菌的营养细胞混悬液的新鲜稀释液作为测试菌接种。该孢子混悬液可在2 - 8 °C保存一定有效时间。
3-2 阴性对照
特种能源工程与烟火技术
yuqing
为验证检测条件，采用选定的稀释剂代替供试制剂作阴性对照。必须无微生物生长。当产品按照第4部分的描述进行检测时也需要进行阴性对照实验。需要对失败的阴性对照进行研究。
3-3 培养基促进生长和抑制的作用
检测每批预制备的培养基和培养基，包括经无水培养基和由所描述成分制备的培养基。
按表2.6.13-1的描述验证相关培养基适用性。
液体培养基促生长性的检测: 将少量(不超过100 CFU)合适的微生物接种于适量的培养基中。于规定的温度下，不超过检测中规定的最短时间内培养。相比于预先用预测试得到的和经认可批次的培养基，其长出的微生物应该是清晰可见的。
表2.6.13.-1 －培养基的生长促进性，抑制性和指示性
固体培养基促生长性的检测: 采用表面铺展法，在每个培养皿中接种少量(不超过100 CFU)的合适的微生物。于规定的温度下，不超过检测中规定的最短时间内培养。相比于预先用预测试得到的和经认可批次的培养基，其长出的微生物应该是清晰可见的。
液体或固体培养基抑制性的检测: 将不少于100 CFU的合适的微生物接种于合适的培养基中。于规定的温度下，不超过检测中规定的最长时间内培养。应无检测的微生物生长。
成分
指示性的检测：采用表面铺展法，在每个培养皿中接种少量(不超过100 CFU)的合适的微生物。于规定的温度下，在检测规定的时间范围内培养。相比于预先用预测试得到的和经认可批次的培养基，菌落是明显的且具有指示反应。
3-4.检测方法的适用性
对于每份供试品，按第4部分相关段落所述制备样品。在混合时，于规定的生长培养基中加入每种检测菌株。单个的接种这些检测菌株。使用相当于接种的供试制剂中不超过100 CFU的微生物接种。采用规定的最短的培养时间, 执行第4部分相关段落描述的检测。
规定的微生物必须检出有如第4部分所述的指示反应。
产品的任何抗菌作用，将使检测过程做出必要的改变(参见总论章节2.6.12中4-5-3项内容)。
对于某种给定的产品，规定的检测不能中和其对有关微生物的抗菌活性时，可假定其抑制的微生物在产品中不存在。
4. 产品的检测
山下智久生田斗真
4-1胆汁耐受革兰氏阴性菌
4-1-1. 样品的制备和预培养. 按总论章节2.6.12所述使用1 g供试品的10倍稀释液制备样品。（用大豆酪蛋白消化物肉汤作为稀释液）混匀并于20 - 25 ℃下，在大于细菌复苏而小于细菌增殖的一段足够的时间内培养（一般为2h，但不超过5h）。
4-1-2.无菌检测除非另有规定，按4-1-1项制备相当于1 g产品量的样品，接种于肠道菌增菌Mossel肉汤培养基上，于30 - 35 ℃下培养24 - 48小时。在结晶紫，中性红，胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，于30 - 35 ℃继代培养18 - 24小时。若无任何菌落生长，则该产品符合检测要求。
4-1-3.定量检测
4-1-3-1.选择和继代培养。取适量的肠道菌增菌Mossel肉汤培养基，分别接种按4-1-1所述的含0.1 g,0.01 g,0.001 g(或0.1 ml,0.01 ml或0.001 ml)的供试品和/或稀释液，于30 - 35 ℃培养24 - 48小时。在结晶紫，中性红，胆盐葡萄糖琼脂培养基的平板上，于30 - 35 ℃继代培养18 - 24小时。
4-1-3-2. 结果判定。有菌落的生长即为阳性结果。记录产品呈现阳性结果的最小量和呈阴性结果的最大量。按表2.6.13-2测定细菌的可能数目。
表2.6.13.-2 －结果判定
4-2 大肠杆菌
4-2-1样品的制备和预培养。按总论章节2.6.12所述使用不少于1 g供试品的10倍稀释液制备样品，用1
0 ml或相当于供试品1 g或1 ml的量接种于适量（按3-4项下描述检测）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基上，混匀并于30 - 35 °C 培养18 - 24小时。
4-2-2选择和继代培养。振摇容器，将1 ml大豆酪蛋白消化物肉汤培养基转移至100 ml麦康凯(MacConkey) 肉汤培养基中，于42 - 44 ℃培养24 - 48小时。在麦康凯琼脂培养基平板上于30 - 35 ℃继代培养18 - 72小时。
4-2-3结果判定。有菌落生长表明可能存在大肠杆菌。可用鉴别检测来确证。
若无菌落存在或鉴别检测结果呈阴性，则产品符合检测要求。
4-3.沙门氏菌
4-3-1.样品的制备和预培养。按总论章节2.6.12所述制备供试品，使用相当于不少于供试品10 g或10 ml的量接种于适量（按3-4项下描述检测）的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基中，混匀并于30 - 35 °C 培养18 - 24小时。
4-3-2.选择和继代培养。将0.1 ml的大豆酪蛋白消化物肉汤培养基转移至10 ml 氯化镁孔雀绿沙门氏菌增菌肉汤培养基中，于30 - 35 ℃培养18 - 24小时。在木糖，赖氨酸，脱氧胆酸盐琼脂培养基平板上于30 - 35 ℃继代培养18 - 48小时。
4-3-3.结果判定。有生长良好的红菌落（有或无黑中心）生长表明可能存在沙门氏菌。可用鉴别检测来确证。
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