荧光原位杂交技术检测5、7、8号染体异常在骨髓增生异常综合征患者的应用 杨建和;岑岭;章艳;肖溶;陈涛;周民
【摘 要】目的 应用荧光原位杂交技术(FISH)检测骨髓增生异常综合征(MDS)患者的5、7、8号染体,分析其改变的临床意义.方法 结合常规的细胞遗传学检查和FISH技术检测5、7、8号染体.应用SPSS 11.5统计软件,对患者的遗传学异常及疾病的转归及预后进行分析.结果 30例患者常规遗传学检测与FISH检测结果如下:5号染体异常为(6.7%)vs(16.7%);7号染体异常为(6.7%)vs(16.7%);8号染体异常为(16.7%)vs(30.0%).30例患者中存活13例,死亡15例,失访2例;其中9例转化为急性白血病.复杂核型及正常核型的缺失与患者的不良预后密切相关.结论 FISH技术能敏感地检测出小克隆异常,运用常规细胞遗传学技术结合多种探针进行分析,能对MDS患者的诊断、转归及预后进行更为准确的判断. 【期刊名称】《临床荟萃》
美术家眼中的自己【年(卷),期】2010(025)016
【总页数】4页(P1393-1396)
【关键词】骨髓增生异常综合征;原位杂交荧光;预后
【作 者】杨建和;岑岭;章艳;肖溶;陈涛;周民
【作者单位】南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003;南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003;南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003;南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003;南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003;南京医科大学附属常州第二人民医院,血液科,江苏,常州,213003
【正文语种】红楼外传中 文
【中图分类】R733.3
骨髓增生异常综合征(myelodysplastic syndrome,MDS)是一组造血干/祖细胞恶性克隆增殖性疾病,以骨髓病态造血和外周血细胞减少为特征,有较高的转化为白血病的风险。染体核
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型异常对于MDS预后有重要影响[1-2]。由于常规细胞遗传学分析只能分析中期细胞,且受到染体数量和质量的影响,因而检出MDS的克隆性异常率仍较低。近年来发展的荧光原位杂交技术(fluorescence in situ hybidization,FISH)则能在染体制片和骨髓涂片上分析大量的中期或间期细胞,以检测染体的数目和结构异常,因而成为细胞遗传学的重要补充[3]。我们采用FISH技术对我院近年就诊的30例MDS患者进行常见的5、7、8号染体异常检测,旨在探讨MDS患者的染体改变与其诊断、转归、预后判断和检测的临床价值。
1 资料与方法
马彦生1.1 病例选择 2007年1月至2009年12月在我院门诊或住院的 MDS患者30例,男 16例,女14例。年龄30～86岁,中位年龄60岁。均为初诊患者 ,其中 MDS-难治性贫血(MDS-RA)4例,MDS-难治性血细胞减少伴有多系发育异常(MDSRCMD)3例,MDS-环形铁粒幼细胞性难治性贫血(MDS-RAS)1例,MDS-难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅰ(MDS-RAEBⅠ)6例,MDS-难治性贫血伴有原始细胞过多-Ⅱ(MDS-RAEBⅡ)16例(表 1)。诊断和疗效标准参照《血液学诊断及疗效标准》[4]及《血液肿瘤骨髓诊断图谱》[5]。对照组6例为同期住院的缺铁性贫血患者,男 3例,女3例,年龄28～84岁,中位年龄59岁。两组性别、年龄等一般资料差异无统计学意义(P＞0.05),具有可比性。
1.2 方法
1.2.1 常规细胞遗传学分析 2例直接法患者取新鲜标本2 ml,肝素抗凝,加入培养瓶中。在标本中直接加入秋水仙酰胺(使其终浓度为0.05 mg/L)于37℃培养箱中放置1小时后,以0.075 mol/L的氯化钾溶液进行低渗30分钟,再以3∶1的甲醇、冰醋酸溶液固定3次,然后气干法滴片。28例同时采用直接法和短期培养法,后者将标本于37℃培养箱中培养24小时后再按上述步骤制备染体。核型分析采用R显带技术。平均每例分析中期分裂相20个。核型异常的描述按人类细胞遗传学国际命名体制[ISCN(1995)][6]。
1.2.2 FISH分析 探针及试剂:LSI5qEGR1/D5S23,D5S721探针,检测-5/5q-;LSI D7S522/CEP7探针,检测-7/7q-;CEP8Acqua探针,检测 8号染体。探针均购自VYSIS公司。操作方法:杂交前1天滴片,室温老化过夜。相差显微镜下观察,划定杂交区域。按照探针试剂说明书进行DNA变性、杂交、洗片及复染。信号检测:荧光显微镜为日本OLYMPUS公司产品,FISH图像分析系统为俄罗斯VIDEOT EST公司产品。LSI5qEGR1/D5S23,D5S721探针在正常间期细胞中表现为2个红信号及2个绿信号,如仅见1个红信号为5q-,仅见1个绿信号为-5;LSI D7S522/CEP7探针在正常间期细胞中表现为2个红信号及2个绿信
号,如仅见1个红信号为7q-,仅见1个绿信号为-7;CEP8Acqua探针在正常间期细胞中表现为2个蓝信号,出现3个蓝信号为+8。分析每例正常对照标本的200个间期细胞,计算出现阳性信号的百分率及其均值和标准差(s),以+2 s作为截断值。分析每例MDS患者的200个间期细胞,计算出现阳性信号的百分率,超过截断值者判定为阳性。每例标本均进行重复性实验。
1.3 统计学方法 应用SPSS 11.5软件处理数据,率的比较采用χ2检验,P＜0.05为差异有统计学意义。
花的启示
2 结 果
2.1 常规遗传学结果分析 30例患者中40.0%(12/30)出现异常核型,其中累及5号染体6.7%(2/30),7号染体6.7%(2/30,),8号染体16.7%(5/30),20q-6.7%(2/30),1q+3.3%(1/30)。见表1。
2.2 FISH结果
2.2.1 LSI5qEGR1/D5S23、D5S721探针 正常对照出现一个红信号缺失的百分比为(4.12±1.
16)%,将＞6.44%定为5q-缺失的阳性值。正常对照出现一个绿信号及一个红信号同时缺失的百分比为(1.98±0.49)%,将＞2.96%定为5号染体缺失的阳性值。MDS患者5号染体异常为16.7%(5/30),见表 1。
2.2.2 LSI D7S522/CEP7探针 正常对照出现一个红信号缺失的百分比为(1.56±0.66)%,将＞2.88%定为7q-缺失的阳性值。正常对照出现一个绿信号及一个红信号同时缺失的百分比为(1.09±0.35)%,将＞1.79%定为7号染体缺失的阳性值。MDS患者5号染体异常为16.7%(5/30),见表1。
2.2.3 CEP8Acqua探针 对照组出现3个蓝信号的百分比为(0.29±0.12)%,将＞0.53%定为 8号染体三体的阳性值。MDS患者5号染体异常为30.0%(9/30),见表1。
环
2.3 30例MDS患者FISH结果 累及5号染体异常从常规遗传学分析的6.7%(2/30)上升为16.7%(5/30);累及7号染体异常从常规遗传学分析的6.7%(2/30)上升为16.7%(5/30);累及8号染体异常从常规遗传学分析的16.7%(5/30)上升为30.0%(9/30),其中1例出现4体8号(表1)。
结合常规核型分析和FISH检测,30例患者共检出遗传学异常60.0%(18/30),其中单一累及5号染体6.7%(2/30),单一累及7号染体6.7%(2/30),单一累及8号染体26.7%(8/30)。另有20q-2例,1q+1例,累及多条染体异常的复杂核型3例,见表 1。
2.4 随访结果 30例患者中存活13例,死亡15例,失访2例;其中9例转化为急性白血病。遗传学异常的患者转化为白血病者为38.8%(7/18),而无遗传学异常患者的转白血病率仅16.7%(2/12)。疾病转归的统计学分析显示细胞遗传学异常与MDS向急性白血病转化密切相关(χ2=3.880,P＜0.05)。
表1 伴细胞遗传学异常的18例患者常规核型及FISH检测结果注:N正常核型,*涉及多条染体异常的复杂核型例号 分期 性别 年龄(岁)FISH结果(%)5号染体 7号染体 8号染体 核型1*RAEB2男6562.5(5q-)31.6(7q-)N 46,XY,del5[6]/46,XY,del7[8]/45,XY,-5,del5[3]/45,XY,-5,del5,del7[3]21.6(-5)2 RAEB2女72N N 5.12(+8)46,XX[20]4 RAEB2男73N N 9.28(+8)46,XY[20]5 RAEB2男655.23(-5)14.6(-7)N 45,XY,-7[3]/46,XY[12]6 RAEB2女68N N N 46,XX,20q-[16]/46,XX[4]7 RAEB2女59N N 49.56(+8)47,XX,+8[8]/46,XX[12]8 RAEB1 女 75 31.24(5q-)N N 未见分裂相9 RAEB2男40
N N 49.5(+8),5.26(+8+8)47,XY,+8[7]/46,XY[13]11 RA 女70N N 47.0(+8)47,XX,+8[6/46,XX[14]]13 RA 女40N N 18.0(+8)47,XX,+8[2]/46,XX[16]14 RCMD女47N N N 46,XX,1q+[12]/46,XX[8]18*RAEB245,X,-Y,11q-,22p+[3]/45,X,-Y[5]/46,XY[7]20 RAEB2女55N 11.6(7q-)N 46,XX[20]21 RAEB1女54N N N 46,XX,20q-[12]/46,XX[8]22 RAEB2男79N N 36.9(+8)47,XX,+8[6]/46,XX[14]26*RAEB2男728.41(-5)4.8(-7)3.21(+8)45,XY,-5[2]/46,XY[13]27 RAEB1男566.72(-5)N N 46,XY[20]29 RAEB2男51N 11.6(-7)N 46,XY[20]男72N N 9.23(+8)
3 讨 论
FISH是近年来基于细胞遗传学、分子生物学和免疫学基础上发展而来,以核酸序列特异性探针标以不同的荧光素与经变性处理的靶细胞DNA进行杂交检测的方法,它克服了常规细胞遗传学只能分析中期细胞并受分裂相数量和质量的影响,导致核型分析失败的弊端,使得确定染体的畸变类型和染体的缺失部位更为精确,为其成为判断MDS预后的重要指标并对指导其提供了重要帮助[7]。本组结果显示常规遗传学异常检出率为40.0%,而采用FISH技术异常检出率提高至60.0%。5、7、8号染体阳性率分别由6.7%,6.7%,16.7%提高至16.7%,
16.7%,30.0%。提示间期FISH技术能敏感地检测出小克隆异常,是常规细胞遗传学的重要补充。
申咏梅等[8-9]、李建勇等[10]报道MDS患者 5、7、8号染体异常率为17.1%、18.8%、22.4%与本组结果接近。国外报道MDS患者有相对较高的5q-异常,但本组该异常仅见1例,且该患者常规遗传学核型分析未见分裂相。因该患者预后较好,结合临床可考虑是否能诊断为5q-综合征。本组例1、例18、例26为累及多条染体的复杂异常核型。例1患者6个月后曾达形态学和常规遗传学的完全缓解,但FISH检测仍有异常核型的微量残留,患者于第8个月复发,14个月后死亡。例18患者初发时即为复杂核型异常,3个月后转化为M2,11个月后死于颅内出血。例26患者常规遗传学显示为单一异常,FISH结果显示为复杂异常,2个月后转化为M5,6个月后死于白血病。由此可见多种探针结合的FISH技术较常规遗传学能更敏感地检测出患者的复杂核型,为患者预后提供更为可靠的帮助。本组患者有9例转化为急性白血病,其中7例转化为M2,2例转化为M5。7例转白血病患者伴遗传学异常,其中2例患者是经FISH检测检出的异常,可见只有常规细胞遗传学与FISH技术相结合,才能更好地对患者的诊断、转归、预后进行分析。
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