2021年3月
第45卷第2期
安徽大学学报(自然科学版)
JournalofAnhuiUniversity(NaturalScienceEdition)
March2021
Vol.45No.2为什么植树是义务
doi：10.3969/j.issn.1000-2162.2021.02.013
李奥丽x肖伟莉x王雪梅1*，陈紫薇x孔小卫2
葛洲坝论坛（1安徽大学化学化工学院，安徽合肥230601；2.安徽大学生命科学学院，安徽合肥230601.）
摘要：采用正交试验设计，通过对DPPH・自由基清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率以及对金黄
葡萄球菌抑菌作用的测试，优选出黄连、黄檗、黄苓、大黄水提液的最佳复配比，制备一款祛痘凝胶，并对该凝胶的感官和理化指标及功效进行测试，对试用者的祛痘效果进行跟踪研究和问卷调查，结果表明：该祛痘凝胶质地清爽、肤感舒适、无刺激，具有较好的祛痘功效• 关键词：正交试验；祛痘凝胶；四黄复配水提液；功效测试
中图分类号：TQ630文献标志码:A文章编号：10002162（2021）02-0087-08
Development and evaluation of efficacy of Chinese
herbal medicine compound anti-acne gel
LI Aoli1,XIAO Weili1,WANG Xuemei1*,CHEN Ziwei1,KONG Xiaowei2
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering,Anhui University,Hefei230601,China;
2.School of Life Sciences,Anhui University,Hefei230601,China.）
Abstract:Through orthogonal experimental design,the best,ratio of water extracts of Copiis chinensis,Cortex pheLLodendri,Radix scuieLLaria and Rheum officinale was optimized by testing of
scavenging rates to DPPH,inhibition rate on hyaluronidase activity,testosterone conversion rate,and antibacterial effect,on Staphylococcus aureus to prepare an anti-acne gels.Theirs sensory,physicochemical indicators and efficacy were tested,follow-up study and questionnaire was conducted on anti-acne effect,of the trier.The results showed that,the gel had a refreshing texture,comfortable skin feeling without,irritation,and the better antiacne effect.
Keywords:orthogonal experiment.;anti-acne gel;sihuang compound water extracts;
efficacy testing
青春痘，又称为粉刺、座疮，是一种皮肤毛囊皮脂腺的慢性炎症[1].产生青春痘的原因很多，主要原因是青春期内分泌机能发生了较大变化，体内5a-还原酶催化雄性激素睾酮转化为活性更强的雄性激素双氢睾酮，从而引起皮脂分泌过多，使毛囊上皮增生、毛囊孔角质化、管口阻塞，皮脂排出不畅[2].毛孔堵塞与皮脂氧化产物为毛囊中的微生物（其中包括引发炎症的座疮丙酸杆菌（.Proptomaactenum 收稿日期=2020-08-06
基金项目：安徽省绿高分子材料重点实验室资助项目（KF2012006.）
作者简介：李奥丽（995—），女，安徽蚌埠人，安徽大学硕士研究生，E-mail：
m；*王雪梅（通信作者），安徽大学副教授，硕士生导师,E：-mail:wangxm929@139.
88安徽大学学报（自然科学版）第45卷
a cnes）、金黄葡萄球菌（Staphylococcus aureus）A表皮葡萄球菌（Staphylococcus epidermidis）等）提供大量繁殖的条件，繁殖过程中产生的脂酶又会分解皮肤表面的皮脂生成游离脂肪酸，从而加重炎症反应[-4].因此，若要有效青春痘，需要选择对5a-还原酶有一定抑制作用的成分以减少皮脂分泌，同时要注重抑菌、抗炎和抗氧化.
中药中的三黄通常由黄连（Copts chinensis Franc.）、黄檗（Phellodendron amurense Rupr.）、黄苓（Scutellaria baicalensis Georgi.）、大黄（.Rheum palmatum L.）中的三味药材按照不同的组合等比例混合而成，具有清热解毒、行气止痛、托毒排脓、抗菌增强免疫及活血消肿等作用，对疖痈等外科感染性疾病效果显著[56]，也有同时将上述四味药材（简称四黄）按照1：1：1：1组方混合后直接用于[7].笔者的研究参考中医古方，选择四黄的中草药水提液作为祛痘功效成分，采用四因素三水平的正交试验方法进行复配，通过现代分析测试手段筛选最佳组方；制备出一款具有较强抗氧化、抗炎、抑菌、抑制5a-还原酶作用的祛痘凝胶，并通过体外测试和人体试用对其祛痘功效进行评价. 1实验部分
1.1主要仪器与试剂
仪器:AB104-N电子分析天平，精度0.0001g，上海梅特勒-托利多仪器有限公司;Waters600型高效液相谱仪，美国沃特斯公司；GNP9160型隔水式恒温培养箱，上海三发科学仪器有限公司;SW-CJ-1G单人单面净化工作台（水平送风），江苏通净净化设备有限公司；智能高速冷冻离心机，湖南赫西仪器装备有限公司;UV-1750紫外-可见分光光度计，日本岛津公司；CBS皮肤检测仪，产地台湾.
中药材饮片：大黄、黄苓，产地甘肃；黄连、黄檗，产地四川.
试剂：还原性辅酶n（NADPH,95%）睾酮（8%）抗坏血酸（V c），阿拉丁试剂（上海）有限公司；爱普列特（mg/片，有效成分含量），江苏联环药业股份有限公司；牛肉膏，北京奥博星生物技术有限责任公司；牛血清蛋白标准溶液（10g-L丨，分析标准品）、三羟甲基氨基甲烷（Tris,99.9%生物技术级），上海麦克林生化科技有限公司；透明质酸酶，美国Sigma公司；蛋白胨，分析纯，国药集团化学试剂有限公司；透明质酸钠、12-辛二醇和2-苯氧基乙醇的混合物（PCG）甘草酸二钾（质量浓度＞99%）、甘油、甜菜碱，均为化妆品级；硼酸、乙酸钠•3H2O.对-二甲氨基苯甲醛、1,1-二苯基2-苦肼基自由基（DPPH）氯化钠、无水乙醇、EDTA2Na、丁二醇、三乙醇胺（TEA），均为国产分析纯试剂；雄性SD大鼠（190士10）g），安徽医科大学实验动物中心；金黄葡萄球菌，安徽大学生命科学学院提供；蒸馏水，实验室自制.
1.2实验方法
1.2.1四黄复配水提液的制备
称取干燥粉碎后的4种中草药粉末各10.0g，分别加入100mL水，沸水浴1h后过滤，重复上述操作1次，合并滤液并浓缩至原药材含量为100g•L S制得4种中草药提取液，进一步稀释至所需浓度.以黄连、黄檗、黄苓、大黄水提液作为正交试验的4个因素，选择原药材含量50,75,100g・L1为3个水平，正交实验安排见表1和表2.其中，表2中4种不同浓度水提液等体积混合制得9种复配液，分别命名为Y-1-Y-9，即为待测液.
表1实验因素水平g•L—1
水平黄连
不真正连带责任
A
黄檗
B
黄苓
C
大黄
D
150505050 275757575 3100100100100
第2期李奥丽，等：中草药复方祛痘凝胶的研制及功效评价89
表2正交试验设计
试验号A B C D
Y-11111
Y-21222
Y-31333
Y-42123
Y-52231
Y-62312
Y-73132
Y-83213
Y-93321
1.2.2四黄复配水提液的功效测试
(1)中草药复配液的DPPH-清除能力的测定：按文献［8］中方法测定Y-1-Y-9对DPPH-自由基的清除率P，以质量浓度为001g-L1的Vc作阳性对照.
(2)透明质酸酶抑制率的测试：按文献［9-10］中方法测定Y-1—Y-9对透明质酸酶的抑制率以质量浓度为4.0g•L1的甘草酸二钾作阳性对照.
(3)抑菌实验测试：按文献口1-2］中方法测定Y-1-Y-9样品的抑菌效果，设置阳性对照组：培养物对照，接种同数量的菌液，不加待测液；空白对照组：培养基对照，不接种菌液，不加待测液.
(4)睾酮转化率的测试：按文献［2］中方法测定Y-1-Y-9睾酮的转化率，以0.5g•L1的爱普列特溶液为阳性对照液.
1.2.3四黄最优组合的筛选
对1.2.2中测试结果进行分析，由每个指标的测试结果选出一个优质组合，再通过正交试验，根据直观分析各指标的K值选出一个优质组合，再通过矩阵计算结合所有的指标计算出一个优化的组合，将初步选出的组合分别按照1.2.2中的实验方法再进行一效测试，通过对实验结果的分析得到一个最优的复配组合.
1.2.4祛痘凝胶的制备
1.2.4.1中草药复方水提液的制备
准确称取四黄最佳组合复方，装入滤袋并置于250mL烧杯中，加蒸馏水100mL，沸水浴1h后过滤，重复上次操作，合并2次滤液后浓缩至80g，制得中草药复方水提液.
1.2.4.2祛痘凝胶配方及制备
按照表3所列的配方，取烧杯加入中草药复方水提液80g，置于75C水浴中，搅拌下将增稠剂卡波21均
乡村医生从业管理条例匀分散其中，随后加入表3中的A相中其他成分，搅拌均匀后加入B相，继续搅拌20min并降温，至45C时将C相加入搅拌至均匀，冷却至室温出料，制得祛痘凝胶.
表3祛痘凝胶配方
相原料w/%
中草药复方水提液80
卡波210.8
A相
甘油 5.0丁二醇 2.0甜菜碱 2.0 E2DTA-2Na0.05 TEA0.8
B相
水加至100 C相PCG 1.0
90安徽大学学报（自然科学版）第45卷
1.2.5感官及理化指标评价
1.2. 5.1感官评价
在阳光直射下，观察祛痘凝胶样品的颜、光泽度、均匀性、形态等，同时用手触摸样品的稠度、黏度、触变性.
1.2. 5.2理化指标评价
（1）稳定性测试：将样品分别置于45C的恒温烘箱、一10C的冰箱冷冻室、一10〜45C高低温（交变）试验箱中放置1d和90d后取出观察样品是否出现变化.
（2）酸碱度（pH）测试：称取样品3.0g于烧杯中，加入30.0mL的蒸馏水，用玻璃棒搅拌后，测量其pH.
1.2.6祛痘凝胶的功效性测试
取样品1.0g，稀释10倍，按照1.2.2中方法进行测试.
语义网络分析1.2.7祛痘凝胶的试用调查
参照文献［3］将座疮分为3度4级，选取25名座疮试用者，皮肤严重程度分级符合轻度至中度座疮I〜
皿级标准，黑头粉刺者：7例，脓疱丘疹者：18例，年龄在18~25岁，性别不限，自身前后对照.纳入标准：试用者选择符合《中国临床皮肤病学》中座疮的诊断标准，实验前3个月内未参加其他临床实验，患者本人自愿参加且签署知情同意书，测试期间生活作息规律.排除标准：妊娠或哺乳期妇女，对应用药物过敏，伴有其他面部皮肤病，精神障碍.入选对象严格遵守相应的实验伦理学原则.试用者连续使用祛痘凝胶4周，分别从使用后皮肤的祛痘效果、舒适感、刺激性以及保湿性等指标进行评估讨论祛痘凝胶的试用情况，并通过皮肤测试仪对试用者皮肤中水分、油分、素含量进行跟踪测试.
2结果与讨论
2.1正交试验结果
2.1.1正交试验结果比较
通过选择DPPH-的清除率、透明质酸酶抑制率、抑菌效果和睾酮转化率作为正交试验筛选复配组合的4个指标来选择最优组合.表2中4种不同浓度水提液等体积混合制得的9种复配液的测试结果列于表4.
表4正交试验结果
试验号A B C D P/%I/%T/%抑菌效果
Y-1111190.562.527.2—
Y-2122288.477.124.8—
Y-3133392.176.027.1—
Y-4212387.388.525.7—
Y-5223191.172.928.2—
Y-6231297.369.828.7—
Y-7313295.180.227.9—
Y-8321392.859.432.9—
Y-9332185.479.229.6—
K190.391093.589.0
K91.990.887.093.6
K91.191.692.890.7
第2期李奥丽，等：中草药复方祛痘凝胶的研制及功效评价91
续表4
试验号A B C D P/%「/%T/%抑菌效果R 1.60.8 6.5 4.6
K171.977.163.971.5
K77.169.881.675.7
K72.975.076.474.6
R 5.27.317.7 4.2
K126.426.929.6283
k227.528626.727.1
K330.128527.7286
R 3.7 1.7 2.9 1.5
注：一”表示无菌生长，有抑菌作用.
表4所示的抑菌实验中，发现9种组合对金黄葡萄球菌均有抑制作用，因此，正交试验只考虑DPPH-清除率（P）透明质酸酶抑制率（）和睾酮转化率（T）3个指标.从表4中可看出，四黄对DPPH自由基清除率影响主次分别为大黄>黄苓>黄连>黄檗，其中清除率最高的Y-6组合为A2B3C1D2，根据K值选出1个复配组合AB3CD2；四黄对透明质酸酶的抑制率影响主次分别为黄檗>黄苓>黄连>大黄，抑制率最高的Y-4组合为A2B1C2D3，由K值选出1个复配组合A2B1C2D2；四黄复配液对睾酮转化率的影响主次分别为黄连>大黄>黄檗>黄苓，转化率最低的Y2组合为A1B2C2D2，由K值选出1个复配组合A1B1C2D2.再利用矩阵分析法对实验进行优化，通过计算得到1个复配组合A1B1C2D2[14].
综合以上对实验结果影响因素的分析及矩阵分析法计算的优化，筛选出5个组合，分别为a2b3c1d2,a2b1c2d3,a2b1c2d2,a1b2c2d2,a1b1c2d2.
2.1.2四黄最优组合的确定
将5个组合按照上述1.2.2中的测试方法进行DPPH-的清除率、透明质酸酶抑制率、睾酮转化率测试及抑菌实验，结果列于表5.
dpph自由基清除率
表5复方组合功效测试结果
复方组合P/%h/%T/%抑菌效果
A2B3C1D298.968.129.8—
A2B1C2D284.278.932.3—
A2B1C2D385.286.726.8—
A1B2C2D287.474.326.2—
A1B1C2D291977.129.9—
注：一”表示无菌生长，有抑菌作用.
由表5发现,5个组合对DPPH-清除效果较好的组合依次为AB3C1D2,A1B1CD2, A1B2C2D2；对透明质酸酶的抑制效果较好的依次为A2B1C2D3,A2B1C2D2,A1B1C2D2；对睾酮转化率较低的依次为A1B2C2D2,A2B1C2D3，A2B,C1D2，而A2B1C2D，对DPPH-清除率虽然低于A1B2C2D2，对睾酮的转化率与A1B2C2D2接近，但是透明质酸酶的抑制效果是5个组合中效果最好的.综合比较测试结果较好的是A2B1C2D3，按此组合的等体积复配液中药材含量分别为：黄连
1.88%、黄檗1.25%、黄苓1.88%、大黄
2.5%.
2.2祛痘凝胶测试结果
由2.1.2中得到四黄最佳复配组合，每100g凝胶中黄连1.88g、黄檗1.25g、黄苓1.88g、大黄
豫公网安备41160202000603
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